Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Encyclopedia of Experiments
Encyclopedia of Experiments: Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

C.エレガンス 移動追跡

 
Click here for the English version

C.エレガンス 移動追跡: ワームにおける移動を評価する方法

Article

Transcript

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

- C.エレガンス移動を評価するにはカメラ使用して寒天プレートワームの動きを記録し、記録中にプレート照明確保します

1つのプレート複数リング置いて、各リングワーム同時に追跡します。これは、制御動物と実験動物同じ条件下で日々変動減らしべて比較することを可能にします

プロトコルの例ではアルコールがワームの移動速度及ぼす影響検定する運動追跡アッセイデモンストレーションていきます。

- 開始するには実験グループからプレートリング中心10個のワーム転送するのに2以下かかりますこれはエタノールのないプレートです。動きを減らす、ワームと一緒食べ物すことを避けてくださいまた、ワーム穴を掘るので寒天表面損傷を与えることを避けてください

順応プレート室温30分間インキュベートさせ、その後、細菌れ替える際に使用される命令従ってワームアッセイプレートします

- された動物はエタノール露出するのでこのステップ動物移動する速度非常重要ですだから、実験複製を越えて最初プレートどのかれているかを回転させるのは良い考えです

-分解能のビデオカメラを搭載した顕微鏡が今、ワーム撮影するために必要です。3インチの正方形のバックライトからの照明でさえ分析には不可欠です

120 フレーム、12 ビットグレースケール、タイムラプスムービー1 フレーム/秒でキャプチャするようにイメージ解析ソフトウェア準備します。

最後ワームがそのプレート置かれてから10分後プレートから2分間の映画録画しますその後、2回目の2分間の録音を行いワームプレート置かれた30分後2回目録画行います

まず、背景平坦化してワームオブジェクトコントラスト高める画像フィルタ適用します。メニューの下で[プロセス]、[フィルタ]、[エンハンスメント]の順に選択し、次に[平坦化]を選択します

今度は、リング動物移動を、銅リングと重なる円形の領域別々解析します。

[トラッキングデータテーブル] ウィンドウ、[トラッキングオプション]ボタン使用して、特定トラック除外し、実験アーティファクト制限します

[最小トラック長] 400ミクロン設定、[主要モーションタイプ][カオス]設定します

次に、追跡プロセス開始するには、最初[すべてのトラックを自動的検索]機能ボタンをクリックします。[カウント/サイズオプション]ダイアログボックス[トラッキング]ダイアログボックス表示されます。

次に、サイズフィルタ適用して、1 つのワームよりも大きいオブジェクトまたは小さいオブジェクト除外します

トラッキングダイアログボックス「続行」をクリックしてトラッキングプロセス完了します

フレーム間または1 ごとに移動した距離を平均化してワーム速度計算母集団トラック平均速度作成します。

Tags

空の値 発行
Read Article

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter