C.エレガンス 移動追跡: ワームにおける移動を評価する方法

- C.エレガンスの移動を評価するには、カメラを使用して寒天プレートにワームの動きを記録し、記録中にプレートの照明を確保します。

1つのプレートに複数の銅リングを置いて、各リング内のワームを同時に追跡します。これは、制御動物と実験動物を同じ条件下で行い、日々の変動を減らし、並べて比較することを可能にします。

プロトコルの例では、アルコールがワームの移動速度に及ぼす影響を検定する運動追跡アッセイのデモンストレーションを見ていきます。

- 開始するには、各実験グループから順応プレート上の銅リングの中心に10個のワームを転送するのに2分以下かかります。これはエタノールのないプレートです。動きを減らすので、ワームと一緒に食べ物を移すことを避けてください。また、ワームが穴を掘るので寒天表面に損傷を与えることを避けてください。

各順応プレートを室温で30分間インキュベートさせ、その後、細菌を入れ替える際に使用される命令に従って、ワームをアッセイプレートに移します。

- 移された動物はエタノールに露出するので、このステップで動物が移動する速度は非常に重要です。だから、実験複製を越えて最初にプレートにどの株が置かれているかを回転させるのは良い考えです。

-高分解能のビデオカメラを搭載した顕微鏡が今、ワームを撮影するために必要です。3インチの正方形のバックライトからの照明でさえ、分析には不可欠です。

120 フレーム、12 ビット、グレースケール、タイムラプスムービーを1 フレーム/秒でキャプチャするようにイメージ解析ソフトウェアを準備します。

最後のワームがそのプレートに置かれてから10分後に各プレートから2分間の映画を録画します。その後、2回目の2分間の録音を行い、ワームがプレートに置かれた30分後に2回目の録画を行います。

まず、背景を平坦化してワームオブジェクトのコントラストを高める画像にフィルタを適用します。メニューの下で[プロセス]、[フィルタ]、[エンハンスメント]の順に選択し、次に[平坦化]を選択します。

今度は、各リング内の動物の移動を、銅リングと重なる円形の領域で別々に解析します。

[トラッキングデータテーブル] ウィンドウで、[トラッキングオプション]ボタンを使用して、特定のトラックを除外し、実験アーティファクトを制限します。

[最小トラック長]を 400ミクロンに設定し、[主要モーションタイプ]を[カオス]に設定します。

次に、追跡プロセスを開始するには、最初に[すべてのトラックを自動的に検索]機能ボタンをクリックします。[カウント/サイズオプション]ダイアログボックスと[トラッキング]ダイアログボックスが表示されます。

次に、サイズフィルタを適用して、1 つのワームよりも大きいオブジェクトまたは小さいオブジェクトを除外します。

トラッキングダイアログボックスで「続行」をクリックしてトラッキングプロセスを完了します。

次に、各フレーム間または1 秒ごとに移動した距離を平均化して各ワームの速度を計算し、各母集団のトラックの平均速度を作成します。