Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- כדי להתחיל, להעביר תולעים מבוגרים צעירים על כרית agarose טרי על שקופית.
האפידרמיס של תולעת בוגרת הוא מבנה חד שכבתי דק המורכב מסנכרוטיה רב-גרעינית הנובעת מאירועי היתוך תאים.
לאחר מכן, פצע את פני השטח apical של האפידרמיס עם לייזר. ציטופלסמה מן התאים הפגועים עלול לדלוף החוצה, להופיע כמו בועה באתר הפצע.
הקרנת לייזר יש יתרון על פני טכניקות אחרות, כגון פצעים מחט, כפי שהוא גורם שיבוש מקומי של קוטיקולה ותאי אפידרמיס, מבלי לפגוע ברקמות פנימיות. בפרוטוקול לדוגמה, נראה את תהליך הפציעה בלייזר C. elegans.
- כדי לפצוע במדויק את nematodes, פרוטוקול זה משתמש לייזר femtosecond מחובר מיקרוסקופ קונפוקל דיסק מסתובב. קו או סריקות נקודה באמצעות לייזרים femtosecond, כגון אלה במיקרוסקופים שני פוטון, צריך גם להספיק.
- התחל על ידי איסוף 10 מבוגרים צעירים על כרית אגר. לשתק אותם בירידה של שני microliter של 12 פתרון levamisole מילימולאר.
- זה חיוני כי בעל חיים להיות משותק לחלוטין. 12 levamisole מילימולאר לא ישפיע על תגובת הפצע.
- ודא כי כוח לייזר femtosecond מוגדר 140 מילי וואט, כפי שנמדד לפני המטרה, ואת שיעור החזרה בלייזר הוא ב 80 מגה הרץ. עכשיו, לאתר את התולעים תחת מיקרוסקופ קונפוקל דיסק מסתובב. באמצעות מטרה 100x עם צמצם מספרי גבוה, להתמקד צדדית או אחורית אפידרמיס סינכרוניאלי של התולעת היעד.
התמקדות על פני השטח apical של התא האפידרמיס, לזרוח את הלייזר עבור שני פולסים 200 אלפיות השנייה מופרדים על ידי 20 אלפיות שנייה. זה צריך להיות מספיק כדי לפצוע את האפידרמיס.
