表皮レーザー創傷:C.エレガンスの修復過程を調べるために局所的な損傷を誘発する

- まず、若い成虫をスライドの新鮮なアガロースパッドに移し、12ミリモルレバミソール溶液を数滴加えてワームを麻痺させます。

成虫の表皮は、細胞融合事象に起因する多元性シンディシマからなる薄い単層構造である。表皮の頂端表面は柔軟なコラーゲン性キューティクルを分泌し、基底表面は基底層と呼ばれる細胞外マトリックスの薄い層で覆われている。

次に、表皮の頂端面をレーザーで巻き付け、損傷した細胞から細胞質が漏出し、創傷部位に泡として現れる。

レーザー照射は、キューティクルや表皮細胞の局所的な破壊を引き起こすので、針の傷のような他の技術よりも利点があり、内部組織に損傷を与えることなく、例のプロトコルでは、C.エレガンスにおけるレーザー創傷のプロセスが見られます。

- 線虫を正確に巻くために、このプロトコルは、回転ディスク共焦点顕微鏡に取り付けられたフェムト秒レーザーを使用します。

- 寒天パッドに10人の若い成人を集めることから始め、12ミリモルレバミソール溶液の2マイクロリットルの落下でそれらを麻痺させる。その後、カバースリップでそれらを覆い、麻痺している間数分待ちます。

-動物が完全に麻痺することが不可欠です。12ミリモルレバミソールは創傷反応に影響を与えない。しかし、他の固定化の方法も使用することができます。

- フェムト秒レーザーパワーが目的の前に測定されるように140ミリワットに設定され、レーザー繰り返し速度が80メガヘルツであることを確認してください。

表皮細胞の頂部面に焦点を当てて、20ミリ秒で分離された200ミリ秒のパルスにレーザーを照らします。これは表皮を巻くのに十分です。