Herida láser epidérmica: Inducción de daños localizados para examinar los procesos de reparación en C. elegans

- Para empezar, transfiera gusanos adultos jóvenes a una almohadilla de agarose fresca en un tobogán. A continuación, agregue unas gotas de solución de levamisola de 12 mililitros para paralizar los gusanos. Cubra los gusanos con un coverlip y espere unos minutos.

La epidermis de un gusano adulto es una estructura delgada de una sola capa que consiste en sincronía multincleada que resulta de eventos de fusión celular. La superficie apical de la epidermis secreta una cutícula collagenosa flexible, mientras que la superficie basal está cubierta por una fina capa de matriz extracelular llamada lamina basal.

A continuación, enrollar la superficie apical de la epidermis con un láser.

La irradiación láser tiene una ventaja sobre otras técnicas, como la herida de aguja, ya que causa la interrupción localizada de la cutícula y las células epidérmicas, sin dañar los tejidos internos.

- Para herir con precisión los nematodos, este protocolo utiliza un láser femtosegundo conectado al microscopio confocal de disco giratorio.

- Comience recogiendo a 10 adultos jóvenes en una almohadilla de agar. Paralídelos en una gota de dos microlitros de solución de levamisola de 12 mililitros.

- Es esencial que un animal quede completamente paralizado. 12 mililitros levamisole no afectarán a la respuesta de la herida. Sin embargo, también se pueden utilizar otros métodos de inmovilización.

- Asegúrese de que la potencia láser femtosecond se establece en 140 milivatios, medida antes del objetivo, y la tasa de repetición láser es de 80 megahercios. Ahora, localice los gusanos bajo un microscopio confocal de disco giratorio.

Centrándose en la superficie apical de la célula epidérmica, brillar el láser durante dos pulsos de 200 milisegundos separados por 20 milisegundos. Esto debe ser suficiente para herir la epidermis. Espere un momento y observe la interrupción local del citoplasma, que aparecerá como burbujeante.