Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- إنشاء صفائف الحمض النووي خارج كروموسومية عن طريق التجميل الدقيق - أبسط طريقة لتوليد سلالات دودة معدلة وراثيا - يؤدي إلى عناصر وراثية لا تنتقل بشكل ثابت أثناء انقسام الخلايا ، وبالتالي ، تظهر معدلات ميراث متغيرة ومستويات التعبير.
للقيام بذلك ، ابدأ بمجموعة متزامنة مع العمر من الديدان المعدلة وراثيا L4 ، والتي تحمل مجموعة خارج الكروموسومات التي سبق إدخالها عن طريق التلقيح الدقيق والسماح لهم بالنمو إلى بالغين مرق. نقل هؤلاء البالغين إلى لوحات جديدة والسماح لهم بوضع البيض حتى يكون هناك ما لا يقل عن 30 بيضة على كل لوحة.
بعد فترة نقاهة بين عشية وضحاها، عد عدد الديدان الناجية.
- تقييم معدل انتقال الخط المعدل وراثيا ليتم دمجه.
رصد ذرية كل يوم لتقييم المرحلة التنموية التي يتم التعبير عن علامة الحقن المشترك ويمكن ملاحظتها على أفضل وجه. باستخدام مجسمة الفلورسنت، وتقييم معدل انتقال ذرية من خلال تحديد النسبة المئوية للذرية الفلورسنت.
الحصول على مجموعة من الحيوانات المعدلة وراثيا متزامنة في مرحلة اليرقات L4 للتكامل. اختيار 30 الكبار gravid الفلورسنت على خمس لوحات الثقافة.
زراعة الحيوانات في حاضنة دودة حتى يصل السلف إلى مرحلة يرقات L4. ضع كل لوحة تحتوي على 15 إلى 20 حيوانا من L4 المعدلة وراثيا الفلورية في وصلة عرضية للأشعة فوق البنفسجية مع إزالة الأغطية.
للتعافي، احتضن الديدان المشععة بين عشية وضحاها عند 15 درجة مئوية.
