紫外线照射：集成染色体外阵列的方法

- 通过微注射创建染色体外DNA阵列——产生转基因蠕虫菌株的最简单方法——导致基因元素在细胞分裂过程中不能稳定地传输，因此表现出可变的遗传率和表达水平。将阵列整合到染色体中的目的是减少这种遗传不稳定性和变异性。

为此，从L4转基因蠕虫的年龄同步种群开始，这些蠕虫携带以前由微注射引入的染色体外阵列，并允许它们成长为贪大的成年人。将这些成年人转移到新的盘子里，让他们产卵，直到每个盘子里至少有30个卵子。 取出成人，让卵子生长，直到它们达到L4阶段。 然后，用紫外线照射蠕虫。 这会导致基因组DNA中随机的双链断裂，蠕虫DNA修复机制可以任意地将阵列纳入其中。

经过一夜恢复期后，计算幸存蠕虫的数量。一小部分死蠕虫表示有效的辐照。 观察后代分离同源集成转基因线。 在示例协议中，我们将集成传输速率高的染色体外阵列，该阵列携带在咽液中表示的荧光联合注射标记。

-评估要集成的转基因线的传输速率。对于每一条转基因线，在荧光立体镜下，在10个独立的培养板上挑选10个荧光大人。培养蠕虫孵化器中的动物在允许遗传背景繁殖的温度下。

每天监测后代，以评估共同注射标记表达的发育阶段，并可以最好地观察。 使用荧光立体镜，通过确定荧光后代的百分比来评估后代的传播率。对于转基因集成，选择传输速率最高的转基因线。

获得在L4幼虫阶段同步的转基因动物种群进行整合。在5个培养板上挑选30个荧光大人。蠕虫在15摄氏度下卵3至4小时后，逐板检查至少30个卵子的存在，然后，将成人从盘子中剔除。

在蠕虫孵化器中培养动物，直到后代达到L4幼虫阶段。将每个含有15 到20 个荧光转基因L4 动物的盘子放在紫外线交叉链接器中，并取下盖子。照射蠕虫。

为了恢复，在15摄氏度的温度下连夜孵育辐照蠕虫。检查活着的动物数量。在我们手中，大约 80% 到 90% 的存活率是适应高效辐照的。 在15至25摄氏度下生长辐照动物，直到后代达到发育阶段，以便观察共注射标记表达。