Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- יצירת מערכי דנ"א חוץ-סימטריים על ידי מיקרו-אינג'ים - השיטה הפשוטה ביותר ליצירת זני תולעים מהונדסים - גורמת לאלמנטים גנטיים שאינם מועברים ביציבות במהלך חלוקת התאים, ולכן מציגים שיעורי ירושה משתנים ורמות ביטוי.
כדי לעשות זאת, להתחיל עם אוכלוסייה מסונכרנת גיל של תולעים מהונדסות L4, אשר נושאים מערך extrachromosomal שהוצגו בעבר על ידי microinjection ולאפשר להם לגדול למבוגרים gravid. העבר את המבוגרים האלה לצלחות חדשות ואפשר להם להטיל ביצים עד שיהיו לפחות 30 ביצים על כל צלחת. הסר את המבוגרים ואפשר לביצים לגדול עד שיגיעו לשלב L4. לאחר מכן, להקרין את התולעים עם אור UV. זה גורם אקראי כפול גדיל הפסקות ב- DNA הגנומי שבו תולעים DNA מכונות תיקון עשוי לשלב באופן שרירותי את המערך.
לאחר תקופת התאוששות לילה, לספור את מספר התולעים ששרדו. אחוז קטן של תולעים מתות מצביע על הקרנה יעילה.
- להעריך את קצב השידור של הקו מהונדס להיות משולב. עבור כל קו מהונדס, לבחור 10 מבוגרים gravid פלואורסצנטי על 10 צלחות תרבות נפרדות תחת סטריאוסקופ פלואורסצנטי.
לפקח על הצאצאים כל יום כדי להעריך איזה שלב התפתחותי סמן ההזרקה המשותפת מבוטא וניתן לראותו בצורה הטובה ביותר. באמצעות סטריאוסקופיה פלואורסצנטית, להעריך את קצב השידור של הצאצאים על ידי קביעת אחוז הצאצאים פלואורסצנטיים.
השג אוכלוסייה של בעלי חיים מהונדסים המסונכרנים בשלב הזחל L4 לשילוב.
תרבות בעלי החיים באינקובטור תולעת עד הצאצאים להגיע לשלב הזחל L4. מניחים כל צלחת המכילה 15 עד 20 חיות L4 פלואורסצנטיות מהונדסות בצלב UV עם העפעפיים הוסרו.
להתאוששות, דגירה תולעים מוקרן לילה ב 15 מעלות צלזיוס.
