Encyclopedia of Experiments: Biology
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- Disolver el metronidazol en agua de huevo que contiene DMSO, un disolvente, y añadir feniltiourea, que impide la formación de pigmentos en embriones. Transferir algunas larvas de la edad adecuada a las placas de tratamiento y control.
Deje que las larvas en ambas placas crezcan a 28 grados centígrados. Las larvas transgénicas producen nitrorreductasa sólo en hepatocitos, lo que convierte el metronidazol en un fármaco citotóxico, resultando en la muerte de sólo los hepatocitos objetivo.
Añadir tricarina para anestesiar las larvas y examinarlas bajo un microscopio de epifluorescencia para la ablación severa de hepatocitos-- la destrucción de las células hepáticas. Observarás un hígado mucho más pequeño en individuos tratados que en individuos del grupo de control.
- Transferir hasta 100 embriones a una placa Petri de 100 milímetros que contenga 25 mililitros de agua de huevo y colocar el plato a 28 grados Centígrados. Para inhibir la pigmentación, añadir PTU al cultivo hasta 10 horas después de la fertilización. A las 80 horas después de la fertilización, anestesiar las larvas con tricacina y utilizar un microscopio de epifluorescencia para recoger las larvas positivas de la PPC, manteniendo sólo a los animales con hígados de tamaño similar
A continuación, reemplace el agua de huevo de tricaina con agua de huevo fresca complementada con PTU y devuelva las larvas positivas de pez cebra CFP a la incubadora de 28 grados Celsius. Para tratar las larvas de pez cebra con MTZ, primero, divida el número adecuado de larvas en dos recipientes de cultivo diferentes.
cubrir el experimental grupo con aluminio florete Para impedir foto inactivación de el MTZ y incubar ambos grupos de Pez cebra larvas en 28 Grados Celsius. en el fin de el ablación periodo eliminar el MTZ solución De el Placas y lavar el Tratado con MTZ lava Dos Para Tres veces con 25 Mililitros de agua de huevo y Remolino Descartar el huevo Agua después cada lavar. después el último lavar inmovilizar el larvas con mitad el concentración de tricarina previamente usado Para evitar corazón edema y muerte en el Tratado con MTZ larvas. entonces uso el cfp filtro en un epifluorescencia microscopio Para evaluar el hepatocito ablación Niveles basado en el pariente hígado tamaño de el Tratado con MTZ lavae. considerar el Pez cebra con grande Hígados Representando 0% Para 5% de el larvas Para ser no en llamas, aquellos con Medio Tamaño Hígados Representando 10% Para 20% de el larvas Para ser parcialmente en llamas, y aquellos con muy pequeño Hígados Representando 80% Para 90% de el larvas Para ser completamente en llamas.
