Ooglensdissectie: een techniek om zebravislensmorfologie te observeren

- Een zebravisoog bestaat uit hoornvlies, sclera, lens en netvlies. Het hoornvlies is een transparant weefsel dat licht in het oog laat komen. De sclera is een ondoorzichtig weefsel dat continu met het hoornvlies zit en een buitenste beschermende laag vormt. De lens is een bolvormige structuur die licht op het netvlies richt, een lichtgevoelige weefsellaag die licht omzet in een neuraal signaal.

Om het oog te ontleden, vult u een Petrischaal met siliconen en laat u deze zetten. Plaats nu een verdoofde vis in de schaal en verwijder de ogen met een microschaar. Breng de ogen over op een plaat gevuld met PBS om een constante pH in het weefsel te behouden en oriënteer het oog met de achterste kant naar boven gericht. Houd het oog met een tang vast en maak voorzichtig drie radiale sneden door de sclera en het netvlies.

Vouw vervolgens het weefsel uit om de lens te onthullen. Plaats nu het oog met de voorste kant naar boven gericht en verwijder de sclera en het netvlies. Schep de lens uit het ontleed oog en verwijder het resterende weefsel eromheen. In het volgende protocol zullen we larvale en volwassen zebravislensdissecties uitvoeren om de lensmorfologie te analyseren.

Na Bevestiging Van Voldoende Sedatie Met tricaine, Gebruiken microdissection Schaar Aan Onmiddellijk Accijnzen Zowel Ogen Van ofwel Een Volwassen Of Larval Zebrafish En Plaats Zowel Ogen In A 35 millimeter Op maat gemaakte Petri Schotel Met A Silicone Dissectie Schimmel Gevuld Met Pbs. Aan Oogst De Lens Van Een Volwassen Zebrafish Plaats De Oog Posterior Kant omhoog En Invoegen Tang Op A Minder Dan 45 Mate Hoek Door De Optic Schijf. Gebruiken Dissectie Schaar Aan Maken Twee Of Drie Radiale Insnijdingen Door De Netvlies En Sclera Van De Optic Schijf Aan De ciliair Zone Inch De Geïmmobiliseerd Oog En Peel Terug De Netvlies En Sclera Als Bloem Bloemblaadjes. Omkeren De Oog Hoornvlies Kant omhoog, En Gebruiken De Platte Kant Van De Schaar Aan Immobiliseren De Lens Indirect Via Manipulatie Van De Sclera En Hoornvlies Terwijl Gebruik Tang Aan Trekken Weg De Netvlies En Aangesloten Weefsels. Dan Zorgvuldig Trim Weg elke Overtollige Weefsel Van De Lens.

Voor de oogst van larvale zebravislenzen speelt een larveoog posterieure kant omhoog op het platte deel van een siliconenschaal van PBS. En gebruik een geslepen wolfraamnaald om radiosneden door het netvlies en sclera te maken terwijl het oog wordt geïmmobiliseerd met een andere naald of tang. Schep vervolgens voorzichtig de lens van het gedissocieerde oog met de stompe kant van een op maat gemaakte wolfraamdraadnaald en trek het bijgevoegde weefsel voorzichtig weg.