Dissezione delle lenti oculari: una tecnica per osservare la morfologia delle lenti zebrafish

- Un occhio di zebrafish comprende cornea, sclera, lente e retina. La cornea è un tessuto trasparente che consente alla luce di entrare nell'occhio. Lo sclera è un tessuto opaco che è continuo con la cornea, formando uno strato protettivo esterno. La lente è una struttura sferica che focalizza la luce sulla retina, che è uno strato di tessuto sensibile alla luce che converte la luce in un segnale neurale.

Per sezionare l'occhio, riempire una piastra di Petri con silicone e lasciarla posizionare. Ora, posizionare un pesce anestetizzato nella piastra e asportare gli occhi con una micro-forbice. Trasferire gli occhi su un piatto riempito di PBS per mantenere un pH costante nel tessuto e orientare l'occhio con il lato posteriore rivolto verso l'alto. Tenere l'occhio con le pinie e fare con cura tre tagli radiali attraverso la sclera e la retina.

Quindi, piegate il tessuto per rivelare la lente. Ora posizionate l'occhio con il lato anteriore rivolto verso l'alto e rimuovete la sclera e la retina. Raccogliete la lente dall'occhio sezionato e rimuovete il tessuto rimanente intorno ad esso. Nel seguente protocollo eseguiremo dissezioni di lense di zebrafish larvale e adulto per analizzare la morfologia delle lenti.

dopo conferma di sufficiente sedazione vimine tricaina, usare Microdissection forbici A immediatamente dazio ambedue occhi Da o un adulto o larvale Zebrafish e luogo ambedue occhi in un 35 millimetri Personalizzato Petri piatto vimine un silicone dissezione stampo otturato vimine Pbs. A raccolto Le lente Da un adulto Zebrafish luogo Le occhio posteriore lato su e inserire forcipe a un meno di 45 grado angolo attraverso Le ottico disco. usare dissezione forbici A fare Due o Tre radiale Incisioni attraverso Le retina e sclera Da Le ottico disco A Le ciliare zona Pollici Le Immobilizzato occhio e sbucciare Indietro Le retina e sclera come fiore Petali. invertire Le occhio cornea lato su e usare Le appartamento lato di Le forbici A immobilizzare Le lente indirettamente tramite manipolazione di Le sclera e cornea mentre Utilizzando forcipe A tirare via Le retina e allegato Tessuti. allora attentamente tagliare via qualunque eccesso fazzoletto Da Le lente.

Per la raccolta delle lenti zebrafish larvali, riproduce un lato posteriore dell'occhio larvale sulla parte piatta di un piatto di silicone di PBS. E utilizzare un ago di tungsteno affilato per effettuare tagli radio attraverso la retina e lo sclera immobilizzando l'occhio con un altro ago o pinza. Quindi raccogliere delicatamente la lente dall'occhio dissociato con il lato smussato di un ago di filo di tungsteno su misura e allontanare con cura il tessuto attaccato.