Ögonlins dissekering: En teknik för att observera zebrafisklins morfologi

- Ett zebrafisköga består av hornhinna, sklera, lins och näthinna. Hornhinnan är en genomskinlig vävnad som gör det möjligt för ljus att komma in i ögat. Sclera är en ogenomskinlig vävnad som är kontinuerlig med hornhinnan och bildar ett yttre skyddande skikt.

För att dissekera ögat, fyll en petriskål med silikon och låt den ställas in. Placera nu en bedövad fisk i skålen och punktskatt ögonen med en mikrosax. Överför ögonen till en tallrik fylld med PBS för att upprätthålla ett konstant pH i vävnaden och orientera ögat med den bakre sidan vänd uppåt.

Vik sedan ut vävnaden för att avslöja linsen. Placera nu ögat med den främre sidan uppåt och ta bort skleran och näthinnan. Skopa ut linsen från det dissekerade ögat och ta bort eventuell återstående vävnad runt den. I följande protokoll kommer vi att utföra larv- och vuxen zebrafisklins dissekeringar för att analysera linsmorfologi.

Efter Bekräftelse Av Tillräcklig Sedering Med trikain, Använda mikrodissektion Sax Att Omedelbart Punktskatter Både Ögon Från Antingen En Vuxen Eller larv zebrafisk, Och Plats Både Ögon I A 35 millimeter Skräddarsydda Petri Maträtt Med A Silikon Dissektion Mögel Fylld Med Pbs. Att Skörd den Objektiv Från En Vuxen zebrafisk, Plats den Öga Bakre Sidan Upp Och Infoga Pincett På A Mindre Än 45 Grad Vinkel Genom den Optisk Disk. Använda Dissektion Sax Att Göra två Eller tre Radiella Snitt Genom den Näthinnan Och Sklera Från den Optisk Disk Att den Ciliär Zon I den immobiliserad Öga Och Skal Tillbaka den Näthinnan Och Sklera som Blomma Kronblad. Invertera den Öga Hornhinnan Sidan Upp Och Använda den Platt Sidan Av den Sax Att Immobilisera den Objektiv Indirekt Via Manipulation Av den Sklera Och Hornhinnan Medan Använda Pincett Att Dra Bort den Näthinnan Och Kopplade Vävnader. Sedan Noggrant Trimma Bort Någon Överskott Vävnad Från den Objektiv.

För larv zebrafisk lins skörd, spelar ett larv öga bakre sidan upp på den platta delen av en silikon skål pbs. Och använd en vässad volfram nål för att göra radioskärningar genom näthinnan och sclera samtidigt immobilisera ögat med en annan nål eller tång. Sedan försiktigt skopa linsen från det dissocierade ögat med den trubbiga sidan av en skräddarsydd volfram tråd nål och försiktigt dra bort den bifogade vävnaden.