Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Во-первых, поместите анестезированной рыбы с спинной стороны лицом вверх в предварительно смоченные губки. Перед электропорацией ввините генетический материал в целевую ткань, в этом случае часть forebrain называется теленцефалон. Далее, положить небольшое количество ультразвукового геля на голову. Кроме того, нанесите гель на кончик электродов для облегчения эффективной работы.
Теперь осторожно прижимайте электроды к голове и ввемите несколько импульсов электрического тока. Ток создает временные поры в плазменной мембране электропорированных клеток и делает их проницаемыми. Ток также облегчает движение отрицательно заряженных частиц, таких как плазмиды экспрессии ДНК или RNAi олигонуклеотиды, присутствующие в окружающей, в клетки. В следующем примере мы будем использовать электропорацию, чтобы ввести рекомбинантную плазмиду в эпендимолиотические клетки,
- Обложка рыбы теленцефалона с небольшим количеством ультразвукового геля. Для электропорации плазмидно-инъекционной животных, удалить губку из выброса создана и погрузить внутреннюю сторону электрода советы в ультразвуковой гель. Положение головы рыбы между электродами, с положительным электродом на брюшной стороне головы и отрицательный электрод на спинной стороне. Затем, сохраняя тело рыбы в губке, нажмите электроды мягко и точно против теленцефалона и управлять током с педалью ноги, удерживая ток с педалью ноги, удерживая закончены.
