Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- העבר דג מורדם משולש אל ספוג רטוב כאשר הצד הגבי פונה כלפי מעלה.
לאחר מכן, לאתר את הנקודה מול סנפיר הגב שאינו מכוסה קשקשים שבו אתה יכול להכניס את המחט מבלי להפעיל כוח רב.
אם תרכובת העניין מכילה חומר גנטי, אלקטרופורט התאים על ידי הצבת אלקטרודות משני צדי אתר ההזרקה וניהול הזרם. הזרם הופך את תאי השריר לחלחלים ומסוגלים לקחת ביעילות את החומר הגנטי. לאחר ההליך, להעביר מיד את הדג למיכל התאוששות. בפרוטוקול הבא, נבצע הזרקה תוך שרירית על זברה למבוגרים כדי לספק חיסון DNA נגד mycobacteriosis.
כדי לשמור על הדג במצב קבוע במהלך ההזרקה, להשתמש חתיכת ספוג עם חריץ לחתוך באמצע כמו ריפוד. משרים את הספוג ביסודיות במים של המערכת ומניחים אותו בצלחת פטרי. באמצעות כף פלסטיק, מעבירים דג זברה מורדם לספוג הרטוב כשצד הגחון של הדג למטה בחריץ.
אם מורגשת התנגדות כלשהי, נסה נקודה סמוכה. השתמש במתג רגל כדי להזריק בהדרגה את הפתרון פלסמיד לשריר.
אלקטרופורט הדג מיד לאחר ההזרקה על ידי הנחת אלקטרודות סוג פינצטה בכל צד של אתר ההזרקה.
