İntramüsküler (IM) Enjeksiyon: Yetişkin Zebra Balıklarının Dorsal Kasına Bileşik Teslimat

- Trikain anestezi edilmiş bir balığı sırt tarafı yukarı bakacak şekilde ıslak bir süngerin üzerine aktarın. Balıkları taşıyan süngeri mikroskop altına yerleştirin.. Bir mikro enjeksiyon iğnesini sırt kasının yakınındaki vücut ekseninden 45 derecelik bir açıyla yerleştirin.

Daha sonra, büyük kuvvet uygulamadan iğneyi yerleştirebileceğiniz ölçeklerle kaplı olmayan sırt yüzgecinin önündeki noktayı bulun. Sonra iğneyi hafifçe yerleştirin ve ilgi bileşiği ile birlikte yavaşça kas içine fenol kırmızısı gibi bir belirteç enjekte edin.

İlgi bileşiği genetik materyal içeriyorsa, enjeksiyon bölgesinin her iki tarafına elektrotlar yerleştirerek ve akımı uygulayarak hücreleri elektroporatlayın. Akım, kas hücrelerini geçirgen hale getirir ve genetik materyali verimli bir şekilde alabilir hale getirir. İşlemden sonra, balığı hemen bir kurtarma tankına aktarın. Aşağıdaki protokolde, mikobakteriyoza karşı DNA aşısı yapmak için yetişkin bir zebra balığına kas içi enjeksiyon yapacağız.

Enjeksiyon sırasında balığı sabit bir konumda tutmak için, dolgu olarak ortada bir oluk kesilmiş bir sünger parçası kullanın. Süngeri sistem suyuna iyice batırın ve bir Petri kabına yerleştirin. Plastik bir kaşık kullanarak, uyuşturulmuş bir zebra balığını, balığın ventral tarafı olukta aşağı olacak şekilde ıslak süngere aktarın. Mikroskop altında, iğneyi zebra balığının sırt kasına yakın 45 derecelik bir açıyla yerleştirin.

Herhangi bir direnç hissedilirse, bitişik bir nokta deneyin. Plazmid çözeltisini yavaş yavaş kas içine enjekte etmek için bir ayak anahtarı kullanın. Mikroskop altında, fenol kırmızısı kas dokusuna girerken görünür olmalıdır.

Enjeksiyondan hemen sonra, enjeksiyon bölgesinin her iki tarafına cımbız tipi elektrotlar yerleştirerek balığı elektroporatlayın. Elektroporatörün üzerindeki Başlat düğmesine basın ve altı adet 40 volt, 50 milisaniyelik darbe verin. Sonra balığı hafifçe bir geri kazanım tankına aktarın. Son olarak, metni protokolüne göre balığı uyuşturtuktan sonra, enjeksiyon bölgesinin yakınında EGFP ifadesini görmek için bir UV ışığı kullanın.