Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Bir diseksiyon yatağına ötenazili bir balık yerleştirin ve solungaçlar seviyesindeki balığın kafasını kesmek için cerrahi bir bıçak kullanın. Başı ventral tarafı yukarı bakacak şekilde tutun ve beyni gözlere bağlayan optik sinirlerden yapılmış bir yapı olan optik chiasm'ı görene kadar yumuşak dokuları çıkarın.
Optik sinirleri kesin ve gözleri çıkarın. Şimdi, dorsal tarafı yukarı bakacak şekilde balığı yönlendirin ve beyni izole etmek için kafatasının parçalarını çıkarın. Dokuyu sabit bir pH tutmak için beyni diseksiyon ortamı içeren bir Petri kabına aktarın. Beynin bölümlerini gözlemleyin.
Koku ampulleri, koku sinyallerini algılayan koku organlarına bağlı ön uçta bir çift yapıdır. Teleensefalon hafıza ile ilgili alanları içerir. Habenula, teleensefalondan beynin diğer bölgelerine bilgi aktarır.
Optik tectum duyusal bir bilgi işlem merkezidir. Serebellum somatik motor fonksiyon ve dengede rol oynar. Ve medulla omurilikten beyne bilgi aktarır. Aşağıdaki protokolde, farklı bölgelerden nöral kök hücreleri toplamak için beyni yetişkin bir zebra balığından izole edeceğiz.
Başlamak için, bir Petri kabını jel paketleriyle doldurarak bir diseksiyon yatağı hazırlayın. Daha sonra kabı ilgili kapağıyla örtün ve eksi 20 santigrat derecede kuluçkaya yatırın. Jel dondurulduktan sonra kabı dondurucudan çıkarın ve kapağının üzerine temiz bir filtre kağıdı karesi yerleştirin. Hem kağıdı hem de kabı plastik filmle sarmaya devam edin.
Daha sonra, tüm mikro diseksiyon aletlerini% 70 etanol ile tedavi edin. Bu sterilize edilmiş aletleri bir diseksiyon mikroskopunun yanına yerleştirin ve tamamlanan diseksiyon yatağını optik fiber aydınlatma ile mikroskop altına yerleştirin. Hemen daha önce hazırlanmış bir kafa örneğini diseksiyon yatağının üzerine yerleştirin ve dorsal tarafı aşağı bakacak şekilde yönlendirin.
Daha sonra başın arkasından ağza yumuşak dokudan uzunlamasına bir kesim yapmak için makas kullanın. Daha sonra, kafatasının tabanını forsepsle ortaya çıkarın ve bitişik dokunun tamamını çıkarın. Daha sonra, kafatasının yanal duvarlarından birini başın arkasından başlayarak ve beynin tekekum bölgesine doğru hareket ederek kesin. Kontralasyon tarafı için bu işlemi tekrarlayın. Optik siniri kesmeye devam edin.
Son olarak, baş ventral tarafı yukarı çevirin. Daha sonra, beyni ve kafatasının kalan kısımlarını penisilin streptomisin ile desteklenmiş DMM F12'den oluşan diseksiyon ortamı içeren bir tabağa aktarın. Mikroskop altındaki bir mikroknasın plastik sapıyla, beyin dokusunu temizleyin, herhangi bir sinir yapısına zarar vermemeye dikkat edin. Tüm beyin kaynaklı nörosferleri oluşturmak için iki zebra balığı beyni kullanın.
