Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- קרדיומיופתיה היא מצב שבו שריר הלב נחלש ומאבד את היכולת לשאוב דם. מצב זה ניתן לשכפל ב zebrafish. ראשית, לדלל פתרון מלאי של תרופה אחראית cardiotoxicity בתמיסת מלח מאוזנת של הנקס להכין כמה ריכוזי עבודה. הבא, למקם דג מרדים tricaine, בצד הגחוני למעלה, על ספוג מחזיק תחת מיקרוסקופ מנתח.
עכשיו בעדינות לדחוף את המחט 1 עד 2 מילימטרים לתוך חלל הצפק ולאט לאט להזריק את פתרון התרופה. המתן חמש שניות לפני משיכת המחט כדי למנוע מהפתרון לדלוף החוצה.
צור עקומת הישרדות, גרף המציג את ההסתברות להישרדות לאורך זמן עבור כל ריכוז סמים. בדוגמה, נזריק דוקסורוביצין, או DOX, כדי לגרום קרדיומיופתיה בזברה מבוגר בשתי דרכים.
לפני הזרקת הדג עם DOX, צום את הדגים במשך 24 שעות. הבא, לקבץ את הדגים. בעוד הרדמה, להשתמש בנייר סינון נקי כדי לייבש כל דג ולמדוד את משקל הגוף שלה. לעשות קבוצות של דגים כי הם כל בתוך 10% מאותו משקל הגוף כך כל קבוצה ניתן להזריק עם אותה מנה של DOX. הבא, לחשב את ריכוז העבודה של DOX עבור כל קבוצה, כך כל קבוצה מוזרק עם חמישה מיקרוליטרים של פתרון ומקבל את אותה מנה של DOX על ידי משקל
לאחר מכן, לדלל את המלאי של DOX ב 1x HBSS. לערבב את הדילול עם מערבולת ולאחר מכן הדופק לסובב את הדילול כדי לשמור אותו יחד בצינור. עבור הזריקה, להכין פלטפורמת הזרקה. בצלחת פטרי נקי 100 מילימטר, במקום ספוג. בעזרת מיקרוסקופ נתיחה, לחתוך חלל לתוך הספוג להחזיק דג אחד, ארבעה סנטימטרים בדרך כלל עובד.
לאחר מכן, על מחט 34-מד, לצרף microsyringe 10-microliter. לאחר מכן, לשטוף את המחט עם 1x HBSS כדי להסיר את כל בועות או בלוקים מן המזרק צינורות. עכשיו, להרדים בקצרה את הדג הבוגר עם tricaine. לאחר מכן, להשרות את הספוג במים העובר עם tricaine ולהעביר דג על הספוג עם הבטן שלה עד ההזרקה. עכשיו, תוך-פיסטרונלית להזריק פתרון DOX על ידי החדרה מהירה של המחט בזווית של 45 מעלות לתוך קו האמצע בין סנפירי האגן על 1 עד 2 מילימטרים עמוק.
לאחר מכן, שחרר לאט את כל פתרון DOX. לפני ביטול המחט, המתן חמש שניות. לחילופין, הדג יכול להיות ממוקם לרוחב עם הפנים ימינה.
לאחר ההזרקה, להעביר במהירות את הדגים למיכל מעבר נקי מלא במים מערכתיים מתוקים שבו הוא יכול להתאושש. לאחר מכן, לשטוף את המחט עם HBSS ולהמשיך להזריק את הדג הבא. מאוחר יותר, להחזיר את הדגים מוזרקים למערכת עם זרימת דם זורמת אבל נפרדים מהמערכת הראשית, כדי למנוע זיהום צולב.
