Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- Kardiyomiyopati, kalp kasının zayıfladığı ve kan pompalama yeteneğini kaybettiği bir durumdur. Bu durum zebra balıklarında çoğaltılabilir. İlk olarak, birkaç çalışma konsantrasyonu hazırlamak için Hanks'in Dengeli Tuz Çözeltisi'nde kardiyotoksiklikten sorumlu bir ilacın stok çözeltisini seyreltin. Sonra, trikain anestezi edilmiş bir balığı, ventral tarafı yukarı, bir diseksiyon mikroskobu altında tutan bir süngerin üzerine yerleştirin. İğneyi pelvik yüzgeçler arasında yataydan 45 derecelik bir açıyla yerleştirin.
Şimdi iğneyi periton boşluğuna 1 ila 2 milimetre hafifçe itin ve ilaç çözeltisini yavaşça enjekte edin. Çözeltinin dışarı sızmasını önlemek için iğneyi çıkarmadan önce beş saniye bekleyin. Hemen balığı tatlı sistem suyu içeren temiz bir tanka aktarın. Şiddetli kardiyotoksiklik, kalp kasında hasar nedeniyle her gün ölen balık sayısını kaydedin. İlaç kardiyomiyosit hücre zarında bulunan ölüm reseptörlerine bağlanır ve apoptozu tetikler, bu da şiddetli kardiyotoksikliğe neden olur.
Her ilaç konsantrasyonu için zaman içinde hayatta kalma olasılığını gösteren bir grafik olan bir hayatta kalma eğrisi oluşturun. Örnekte, yetişkin bir zebra balığında kardiyomiyopatiyi iki şekilde teşvik etmek için doxorubicin veya DOX enjekte edeceğiz.
Balığa DOX enjekte etmeden önce, balığı 24 saat boyunca oruçlayın. Sonra, balıkları gruplayın. Anestezi yaparken, her balığı kurutmak ve vücut ağırlığını ölçmek için temiz bir filtre kağıdı kullanın. Her gruba aynı doz DOX enjekte edilebilmesi için aynı vücut ağırlığının% 10'u içinde olan balık gruplarını yapın.
Daha sonra, DOX stoğunu 1x HBSS'de seyreltin. Seyreltmeyi bir girdapla karıştırın ve ardından boruda birikmiş tutmak için seyreltmeyi nabız döndürün. Enjeksiyon için bir enjeksiyon platformu hazırlayın. Temiz bir 100 milimetre Petri kabına bir sünger yerleştirin. Diseksiyon mikroskobu yardımıyla, bir balığı tutmak için süngere bir boşluk kesin, genellikle dört santimetre çalışır.
Daha sonra, 34 kalibrelik bir iğneye, 10 mikroliterli bir mikrosiringe takın. Şimdi, yetişkin balığı trikain ile kısaca uyuşturun. Sonra, süngeri trikain ile embriyo suyuna batırın ve enjeksiyon için karnı yukarı olacak şekilde bir balığı süngere aktarın. Şimdi, iğneyi yaklaşık 1 ila 2 milimetre derinliğinde pelvik yüzgeçler arasındaki orta çizgiye 45 derecelik bir açıyla hızlı bir şekilde sokarak DOX çözeltisini intraperitoneally enjekte edin.
Daha sonra, tüm DOX çözeltisini yavaşça serbest bırakın. İğneyi geri çekmeden önce, beş saniye bekleyin. Alternatif olarak, balık sağdaki iç kısımla yanal olarak konumlandırılabilir. Daha sonra, pelvik yüzgecin üzerindeki yanal çizgiyi, 45 derecelik bir açıyla saat 7'ye doğru ve 3 ila 4 milimetre derinliğe işaret eden eğimle enjekte etti. Enjeksiyon için her iki yöntem de başarılı olsaydı, göbekte kırmızı bir renk tonu olacaktır.
Enjeksiyondan sonra, balığı hızlı bir şekilde geri kazanabileceği taze sistem suyuyla dolu temiz bir geçiş tankına aktarın. Daha sonra, iğneyi HBSS ile durulayın ve bir sonraki balığı enjekte etmeye devam edin. Daha sonra, enjekte edilen balığı akan dolaşıma sahip bir sisteme geri verin, ancak çapraz kontaminasyonu önlemek için ana sistemden ayrı. Önümüzdeki 24 saat boyunca, balıkları oruç etmeye devam edin. İlk hafta boyunca, enjeksiyondan sonra, balıkları günlük olarak kontrol edin ve ölü balıkları çıkarın.
