Intraductale injectie: het leveren van injectie mix in de kanalen van de muis borstklier

Een intraductale injectie is een techniek voor het leveren van een injectiemix die kankercellen, expressievectoren of een therapeutisch middel kan bevatten, aangevuld met een tracerkleurstof in kanalen van de borstklier.

Voor deze procedure moet u een spuit met het injectiemengsel laden. Plaats vervolgens een verdoofde muis ventrale kant omhoog op een chirurgisch bed. Maak een incisie op de huid tussen het inguinale of vijfde paar borstklieren. Scheid de huidflap voorzichtig van het pariëtale peritoneum om de ductale boom te visualiseren.

Til met behulp van een tang de nippel op en snijd het buitenste deel voorzichtig door om de kanaalopening te bekijken. Gebruik een pincet om de rand van de huidflap op te tillen en steek de spuitnaald voorzichtig in de tepel om de injectiemix af te leveren. Controleer de beweging van de tracerkleurstof in de borstkanaalboom. De kleurstof verspreidt zich in de ductale boom zonder in het stroma te lekken, wat wijst op een succesvolle injectie.

Wacht een paar seconden om morsen te voorkomen en verwijder vervolgens langzaam de naald van de injectieplaats. Sluit de incisie met de wondklem. In het volgende protocol zullen we intraductale injectie uitvoeren om Cre uit te drukken adenovirus in de borstklier van de muis.

Gebruik aseptische technieken tijdens de chirurgische ingreep. Maak een incisieplaats op de huid op een lengte van ongeveer een centimeter tussen de twee vierde inguinale borstklieren. Scheid de huidflap voorzichtig van het pariëtale peritoneum, om de borstkanaalboom te visualiseren.

Houd de tepel voorzichtig vast met een tang van horlogemakers om de buitennippel te verwijderen zonder een nabijgelegen huid te knippen met behulp van een microdissectieschaar. Laad ongeveer drie tot vijf microliters Cre adenovirus injectiemengsel in een 25 microliter Hamilton spuit met een 33 gauge metalen naafnaald aangebracht.

Schat het volume van het injectiemengsel in de spuit op basis van de blauwe kleurstof in het mengsel. Houd de rand van de huidflap voorzichtig vast met een fijn gebogen pincet en injecteer het Cre adenovirus injectiemengsel langzaam in de tepel terwijl u de verspreiding van blauwe kleurstof in de borstkanaalboom controleert. Houd de injectiesnelheid zo langzaam mogelijk aan om schade aan het ductale lumen te voorkomen.

Een succesvolle intraductale injectie wordt aangegeven door geïnjecteerde vloeistoffen die zich door de hele ductale boom verspreiden zonder in het stromale compartiment te lekken. Trek de naald voorzichtig uit de tepel om lekkage van de geïnjecteerde vloeistof te voorkomen. Onderzoek de distale kant van de borstklier of het omliggende gebied van de geïnjecteerde tepel.

Kleurstofverspreiding in het nabijgelegen stroma, zoals hier getoond, duidt op een borstvetkusseninjectie in plaats van een succesvolle intraductale injectie. Sluit de chirurgische wonden en de huid met wondclips.

Verwijder de muis uit de anesthesie en plaats deze op een verwarmingskussen in een schone kooi voor herstel. Monitor de ontwikkeling van de borsttumor zoals beschreven in het tekstprotocol.