Name: Zuiveren Plasmide DNA van bacteriële kolonies Met behulp van de Qiagen Miniprep Kit (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-29T00:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 24 s
Description: Leer plasmide-DNA zuiveren uit bacteriële kolonies met de Qiagen Miniprep Kit voor site-directed mutagenese. Deze methode bereidt plasmiden voor op sequencing om mutaties te verifiëren.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

De auteurs hebben niets te melden.

zuiveren plasmide dna van bacteriële kolonies met behulp van de qiagen miniprep kit

Purifying Plasmid DNA from Bacterial Colonies Using the Qiagen Miniprep Kit

Plasmide DNA-zuivering van E. coli is een kern-techniek voor moleculaire klonen. Kleinschalige zuivering (Miniprep) van minder dan 5 ml bacteriecultuur is een snelle manier voor het klonen verificatie of DNA-isolatie, gevolgd door verdere enzymatische reacties (polymerase kettingreactie en restrictie-enzym digestie). Hier hebben we video opgenomen van de algemene procedures van Miniprep door de QIAGEN&#39;s QIAprep 8 Miniprep Kit, gericht op de invoering van deze zeer efficiënte techniek om de algemene beginners voor moleculaire biologische technieken. De hele procedure is gebaseerd op alkaline lysis van E. coli-cellen gevolgd door adsorptie van DNA op silica in de aanwezigheid van hoge zout. Het bestaat uit drie stappen: 1) de voorbereiding en afwikkeling van een bacteriële lysaat, 2) adsorptie van DNA op het membraan QIAprep, 3) het wassen en elutie van het plasmide DNA. Alle stappen worden uitgevoerd zonder het gebruik van fenol, chloroform, CsCl, ethidiumbromide, en zonder alcohol neerslag. Het duurt meestal minder dan 2 uur tot het einde van de gehele procedure.

Zuiveren Plasmide DNA van bacteriële kolonies Met behulp van de Qiagen Miniprep Kit

Plasmid-DNA-zuivering uit E. coli is een kerentechniek voor moleculaire klonering. Zuivering op kleine schaal (miniprep) uit minder dan 5 ml bacteriële ...

Ik ben van het laboratorium van Mike Halen, Department of Physiology and Biophysics, University of California, Irvine. Vandaag zal ik u laten zien hoe u een collagen mini-prep gebruikt om DNA uit bacteriën te zuiveren. Ik doe dit als een stap in een experiment voor site-directed mutagenese.Nadat ik het plasmide heb verkregen, zal ik het insert sequensen om te verifiëren dat de geselecteerde klonen de gewenste mutaties bevatten. Voordat we de minipreparatie uitvoeren, introduceer ik kort wat we gisteren hebben gedaan. Om bacteriën te laten groeien, moet ik eerst vijf milliliter LB-medium in individuele buisjes inoculeren.En zoals u kunt zien, is het medium helder voordat we de bacteriën in de buis plaatsen. Vervolgens gebruik ik een pipet om een enkele kolonie van een agarplaat te inoculeren, waarbij ik elke keer de tip vervang om contaminatie te voorkomen. Daarna plaats ik de buizen in een schudmachine en laat ik ze groeien bij 300 RPM gedurende ten minste acht uur; gewoonlijk kan dit gedurende de nacht gebeuren.Er zijn drie belangrijke buffers uit de collagen mini preparation kit. Dit zijn P one, P two en N three. Normaal gesproken bewaren we P one bij 4 °C omdat het RNA's bevat;

purifying-plasmid-dna-from-bacterial-colonies-using-qiagen-miniprep

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Dit protocol is een kosteneffectief alternatief voor een efficiënte parallelle verduidelijking en plasmide DNA zuivering...

Gestroomlijnde Zuivering van Plasmide DNA Van Prokaryote culturen

We beschrijven een robuuste methode voor het chromatine immunoprecipitatie met primaire T-cellen. De methode is gebaseerd op standaard methoden, maar gebruikt een specifieke set van omstandigheden en reagentia die de efficiëntie van een beperkte hoeveelheid cellen verbeteren. Belangrijk is een gedetailleerde beschrijving van de data analysefase gepresenteerd.

Efficiënte Chromatine immunoprecipitatie behulp Beperking hoeveelheden biomassa

Een nieuwe semi-automatische hybride DNA-extractiemethode voor gebruik met monsters uit de biologische pluimveehouderij werd ontwikkeld en vertoonde verbeteringen ten opzichte van een gebruikelijke mechanische en enzymatische extractiemethode in termen van de kwantitatieve en kwalitatieve schattingen van de totale bacteriegemeenschappen.

Een hybride DNA-extractie methode voor de kwalitatieve en kwantitatieve beoordeling van Bacteriële Gemeenschappen van pluimveeproductie Monsters

De lineaire covalent gesloten (LCC) DNA-minivector (DNA-ministring) is een niet-viraal genoverdrachtsvector dat een hoge transfectie-efficiëntie biedt en relevant is voor elke DNA-overdrachtstoepassing. Het productiesysteem is eenvoudig, snel en schaalbaar in vivo. Het volgende protocol biedt visuele stapsgewijze instructies voor de productie van DNA-ministrings.

Productie van Dubbelstrengs DNA Ministrings

Dit artikel presenteert een gevoelige methode genaamd Circle-Seq voor het zuiveren van extrachromosomale circulaire DNA (eccDNA). De methode omvat zuivering in een kolom, verwijdering van resterend lineair chromosomaal DNA, rolling-circle-amplificatie en high-throughput sequencing. Circle-Seq is toepasbaar voor het screenen op genoomschaal van eukaryotische eccDNA en het bestuderen van genoomonstabiliteit en copy-numbervariaties.

Genoom-brede Zuivering van extrachromosomale circulaire DNA van eukaryote cellen

Hier presenteren we chimera assemblage door plasmideherstel en restrictie-enzymplaatsinzending (CAPRRESI), een protocol gebaseerd op de invoeging van restrictie-enzymplaatsen in synoniem-DNA-sequenties en functioneel plasmideherstel. Dit protocol is een snelle en goedkope methode voor het smelten van proteïne-coderende genen.

CAPRRESI: Chimera Assembly Door Plasmide Recovery En Restriction Enzyme Site Insertion

Dit protocol beschrijft een hoge doorvoer plasmide transfectie van zoogdiercellen in een 384-goed plaat met behulp van akoestische druppel ejectie technologie. De tijdrovende, foutgevoelige DNA-afgifte en multiplexing, maar ook de transfectie-reagens afgifte, zijn softwaregestuurd en worden uitgevoerd door een nanodispenser apparaat. De cellen worden vervolgens in deze voorgevulde putten gesest.

High-throughput DNA plasmide multiplexing en transfectie met behulp van akoestische nano doseertechnologie

Hier presenteren we protocollen voor het werken met Limosilactobacillus reuteri DSM20016, met details over groei, plasmidetransformatie, kolonie-PCR, fluorescerende reporter-eiwitmeting en beperkte plasmide mini-prep, evenals veelvoorkomende problemen en probleemoplossing. Deze protocollen maken het mogelijk om reportereiwitten in DSM20016 te meten, of bevestiging via kolonie-PCR als er geen reporter bij betrokken is.

Methoden voor elektroporatie en transformatie bevestiging in Limosilactobacillus reuteri DSM20016

Recombinant adeno-geassocieerd virus (rAAV) wordt veel gebruikt voor klinische en preklinische genafgifte. Een ondergewaardeerd gebruik van rAAV's is de robuuste transductie van gekweekte cellen zonder dat zuivering nodig is. Voor onderzoekers die nieuw zijn op het gebied van rAAV, bieden we een protocol voor het klonen van transgencassettes, de productie van ruwe vectoren en de transductie van celculturen.

Transgenexpressie in gekweekte cellen met behulp van ongezuiverde recombinante adeno-geassocieerde virale vectoren

De huidige studie beschrijft een workflow voor nanoporesequencing van plasmiden wanneer de chromosomale sequentie al bekend is of niet van belang is. Een initiële plasmide-DNA-verrijkingsstap zorgt voor een optimale plasmidesequentiediepte en maximaliseert het aantal monsters dat per flowcel kan worden gesequenced.

Long-read plasmidvolgordebepaling en assemblage met behulp van op nanopore sequencing gebaseerde workflows

Leer plasmide-DNA zuiveren uit bacteriële kolonies met de Qiagen Miniprep Kit voor site-directed mutagenese. Deze methode bereidt plasmiden voor op sequencing om mutaties te verifiëren.

Zuiveren Plasmide DNA van bacteriële kolonies Met behulp van de Qiagen Miniprep Kit

Meer video's verkennen