Name: Isolatie van Mouse speekselklier Stem Cells (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-08T18:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 52 s
Description: Leer een geoptimaliseerde methode voor het isoleren van stamcellen uit muizenspeekselklieren met enzymatische en mechanische digestie. Dit protocol maakt de cultuur van salisferen mogelijk voor regeneratieve geneeskunde.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

1. Regent Voorbereiding <ol><li> Buffer: 1% (w / v) bovine serum albumine in gebalanceerde zoutoplossing Hank's </li><li> Reconstrueren enzymen. Hyaluronidase enzym: 40 mg / ml, opgelost in buffer. Collagenase II: 23 mg / ml, opgelost in buffer. Gebruik vers bereide oplossingen enzym vers voor elke isolatie. Toen opgelost, bewaren bij 4 ° C tot gebruik voor de spijsvertering. </li><li> 50 mM calciumchloride in gedestilleerd water. Filter steriliseren door een 0,2 uM poriegrootte filter. </li><li> Muis speekselklier (MSG) cultuur medium: DMEM: F12 met penicilline (100 IU / ml), streptomycine (100 ug / ml), Glutamax (2 mM), epidermale groeifactor-2 (20 ng / ml), fibroblast groeifactor -2 (20 ng / ml), N2 supplement (1%), insuline (10 ug / ml) en dexamethason (1 uM). </li></ol> 2. Mechanische en enzymatische Tissue Spijsvertering <ol><li> Weeg de ontleed speekselklieren. </li><li> Hak klieren in een homogene pulp met gebruikmaking van steriele gebogen dissectie schaar in een kleine petrischaal. </li><li> Verzamel gehakt weefsel in 14 ml buizen, met behulp van 1 ml van de buffer per 80 mg submandibulaire weefsel. Spoel de petrischaaltjes schoon van weefsel met behulp van een aantal van de buffer. </li><li> Voeg nog een 1 ml buffer per 80 mg weefsel, gevolgd door 25 pi collagenase II enzymoplossing, 25 il hyaluronidase enzymoplossing en 250 uL calciumchloride oplossing per 80 mg weefsel. Als het werken met grote hoeveelheden weefsel, op een steenworp 2,4 tot 2,9 kan worden uitgevoerd in T25 weefselkweek flessen voor het gemak. </li><li> Incubeer in een schuddend waterbad ingesteld op 37 ° C gedurende 20 minuten. Verwijder de buizen en vermaal met een pipet om grondig te mengen enzym door het weefsel opnieuw. </li><li> Vervang in waterbad voor nog eens 20 minuten. </li><li> Verzamel materiaal door middel van centrifugatie bij 400 xg, 8 minuten. Gooi supernatant. </li><li> Resuspendeer in 2 mL buffer voor elke 80 mg weefsel, en herhaal enzym en calciumchloride aanvulling als hierboven. Incubeer 20 minuten in schudwaterbad. Verwijder de buizen en vermaal met een pipet om grondig te mengen enzymen. </li><li> Incubeer voor de laatste 20 minuten in schudwaterbad. Verzamel cellen door centrifugeren, zoals hierboven, gooi supernatant. </li></ol> 3. Wasstappen <ol><li> Resuspendeer elk 80 mg van het weefsel in 2 mL buffer en pipet aan het weefsel vrij van enzymen te wassen. </li><li> Centrifuge, zoals eerder te verzamelen. Gooi supernatant. </li><li> Herhaal wassen met behulp van een mL buffer per 80 mg weefsel. Centrifuge te verzamelen, supernatant weggooien. </li></ol> 4. Filteren <ol><li> Resuspendeer weefsel oplossing in 1 ml buffer per 80 mg weefsel. </li><li> Voeg oplossing tot 100 urn poriegrootte filter geplaatst over 50 ml Falcon buis. Niet van toepassing meer dan 3 ml van gehakt weefsel oplossing per kolom, zoals filters verstopt kunnen raken. Laat sijpelen door. Verwijder gefilterd materiaal opknoping aan de onderkant van het filter met een pipet, en toe te voegen aan filtraat. </li><li> Gebruik injectiespuit met 26 gauge naald te filtraat te nemen van 50 ml buizen en tot 50 urn poriegrootte filters op 5 ml buizen toe te passen. Laat filteren door middel van, helpen door het losdraaien van deksels indien nodig. </li><li> Centrifugebuizen zoals eerder te verzamelen. Gooi supernatant. </li></ol> 5. Plating-en Kleinbedrijf <ol><li> Combineer alle pellets in een volume. Tellen met behulp van geautomatiseerde cel-counter of hemocytometer. </li><li> Plaat cellen op dichtheid van 0,4 x 10 6 cellen per putje van 12-well plaat, of 2,67 x 10 6 cellen per T25 weefselkweek kolf. Voeg 1 mL MSG medium aan elk putje of 6 mL aan elke T25 fles. </li><li> Incubeer bij 37 ° C. Bollen moet duidelijk zichtbaar zijn op dag 2. </li></ol> 6. Representatieve resultaten: Na twee tot drie dagen in cultuur, zullen kleine aggregaten van cellen (salispheres) blijken in de culturen. Salispheres zal blijven in omvang te groeien in een periode van tien dagen in cultuur. Vertegenwoordiger van fase contrast microscopie beelden van salispheres zijn weergegeven in figuur 1. Delende cellen die stamcel-geassocieerde marker eiwitten kunnen worden geïsoleerd uit deze sferen, optimaal tussen de dagen 3-5 na de isolatie, en zijn in staat van differentiatie in functionele, speeksel produceren acinaire cellen. <img src="/files/ftp_upload/2484/2484fig1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1. Salisphere vorming in vitro. Na de mechanische en enzymatische vertering met behulp van het huidige protocol, kan sferen van toenemende grootte te vinden in de zwevende culturen. Panelen zijn representatief voor fase-contrast-microscopie beelden van de bollen van dag 0 (A), 4 (B), 7 (C) en 10 (D). Schaalbalk = 50 pm.

<ol><li>Vissink, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+Sequelae+of+Head+and+Neck+Radiotherapy%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Oral+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Oral Sequelae of Head and Neck Radiotherapy.</a> Crit Rev Oral Biol Med. 14, 199-212 (2003).</li>
<li>Nape&ntilde, as, J, J., Brennan, M. T., Fox, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diagnosis+and+treatment+of+xerostomia+%28dry+mouth%29%5BTitle%5D)+AND+%22Odontology%22%5BJournal%5D)">Diagnosis and treatment of xerostomia (dry mouth).</a> Odontology. 97, 76-83 (2009).</li>
<li>Denny, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parenchymal+cell+proliferation+and+mechanisms+for+maintenance+of+granular+duct+and+acinar+cell+populations+in+adult+male+mouse+submandibular+gland%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Parenchymal cell proliferation and mechanisms for maintenance of granular duct and acinar cell populations in adult male mouse submandibular gland.</a> 235, 475-485 (2005).</li>
<li>Man, Y. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistence+of+a+perinatal+cellular+phenotype+in+submandibular+glands+of+adult+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Histochem.+Cytochem%22%5BJournal%5D)">Persistence of a perinatal cellular phenotype in submandibular glands of adult rat.</a> J. Histochem. Cytochem. 43, 1203-1215 (1995).</li>
<li>Cotroneo, E., Proctor, G. B., Carpenter, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regeneration+of+acinar+cells+following+ligation+of+rat+submandibular+gland+retraces+the+embryonic-perinatal+pathway+of+cytodifferentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Differentiation%22%5BJournal%5D)">Regeneration of acinar cells following ligation of rat submandibular gland retraces the embryonic-perinatal pathway of cytodifferentiation.</a> Differentiation. 79, 120-130 (2010).</li>
<li>Eirew, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+quantifying+normal+human+mammary+epithelial+stem+cells+with+in+vivo+regenerative+ability%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">A method for quantifying normal human mammary epithelial stem cells with in vivo regenerative ability.</a> Nat Med. 14, 1384-1389 (2008).</li>
<li>Gorjup, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glandular+tissue+from+human+pancreas+and+salivary+gland+yields+similar+stem+cell+populations%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Glandular tissue from human pancreas and salivary gland yields similar stem cell populations.</a> European Journal of Cell Biology. 88, 409-421 (2009).</li>
<li>Alonso, L., Fuchs, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cells+of+the+skin+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Stem cells of the skin epithelium.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100, Suppl 1. 11830-11835 (2003).</li>
<li>Lombaert, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rescue+of+salivary+gland+function+after+stem+cell+transplantation+in+irradiated+glands%5BTitle%5D)+AND+%22Plos+One%22%5BJournal%5D)">Rescue of salivary gland function after stem cell transplantation in irradiated glands.</a> Plos One. 3, e2063-e2063 (2008).</li>
<li>Coppes, R. P., Goot, A. vander, Lombaert, I. M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+Cell+Therapy+to+Reduce+Radiation-Induced+Normal+Tissue+Damage%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Radiation+Oncology%22%5BJournal%5D)">Stem Cell Therapy to Reduce Radiation-Induced Normal Tissue Damage.</a> Seminars in Radiation Oncology. 19, 112-121 (2009).</li>
</ol>

De weefselkweek hier beschreven methode is een reproduceerbaar protocol voor de isolatie van stamcellen-bevattende salispheres uit de speekselklieren van muizen. Studies met behulp van cellen die geïsoleerd op deze manier hebben gewezen op de regeneratieve capaciteit van de speekselklier stamcellen 9. Transplantatie van honderd van de c-Kit + cellen, afkomstig van de salispheres geïnduceerde functionele herstel van bestraalde muis speekselklieren. Deze gegevens zijn spannend en bieden een uitgangspunt voor het onderzoek van de stam-cel-gebaseerde therapie voor xerostomie. Veel wegen nog moet echter worden onderzocht, inclusief de volledige marker-eiwit expressie profiel van de stamcellen, het vermogen van submandibulaire klieren aan de functie van bestraalde parotis speekselklieren en vice versa te redden, en de karakterisering van de vermeende in vivo stamcellen niche van de cellen. Uiteindelijk is de vertaling van dit protocol om menselijk weefsel monsters en de daaropvolgende potentieel voor de behandeling van xerostomie in menselijke patiënten met behulp van de geïsoleerde cellen is de meest opwindende toepassing van de beschreven methode.

<table><tbody><tr><td>Hyaluronidase</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3506</td><td>Bewaren bij &amp;#8211; 20 &amp;#x00B0;C</td></tr><tr><td>Collagenase II</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>17101-015</td><td>Bewaren bij 4 &amp;#x00B0;C</td></tr><tr><td>Epidermal Growth Factor-2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E9644</td><td>Maak een voorraadoplossing van 10 &amp;#x03BC;g / mL in fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS). Bewaren bij &amp;#8211; 20 &amp;#x00B0;C in aliquots voor eenmalig gebruik.</td></tr><tr><td>Fibroblast Growth Factor-2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F0291</td><td>Maak een voorraadoplossing van 25 &amp;#x03BC;g / mL in PBS. Bewaren bij &amp;#8211; 20 &amp;#x00B0;C in aliquots voor eenmalig gebruik.</td></tr><tr><td>N2 supplement</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>17502-048</td><td>Volgens instructies van de fabrikant.</td></tr><tr><td>Insuline</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I6634</td><td>Maak een voorraadoplossing van 2 mg / mL in kraanwater. Stel het water voorafgaand aan het oplossen bij naar pH 2-3 met behulp van glaciaal azijnzuur.</td></tr><tr><td>Dexamethason</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D4902</td><td></td></tr><tr><td>Steriele celzeven met een poriegrootte van 100 &amp;mu;M</td><td>BD Biosciences</td><td>352360</td><td></td></tr><tr><td>Polystyreen buisjes met ronde bodem en doppen met celzeef (poriegrootte 50 &amp;mu;M)</td><td>BD Biosciences</td><td>352235</td><td></td></tr></tbody></table>

isolatie van mouse speekselklier stem cells

Isolation of Mouse Salivary Gland Stem Cells

Ouder speekselklieren van zowel mens en muis oorsprong bestaan ​​uit een minimum van vijf celtypen, die elk de productie en de uitscheiding van speeksel vergemakkelijkt in de mondholte. Sereuze en slijmvliezen acinaire cellen zijn de eiwit en slijmvliezen produceren de fabrieken van de klier respectievelijk, en vertegenwoordigen de herkomst van de speekselproductie. Eenmaal gesynthetiseerd, worden de verschillende enzymatische en andere eiwitachtige componenten van speeksel uitgescheiden door middel van een serie van ductale cellen die epitheliale-type morfologie, tot de uiteindelijke verdrijving van het speeksel door middel van een grote buis in de holte van de mond. De samenstelling van het speeksel is ook aangepast door de ductale cellen tijdens dit proces. In de manifestatie van ziekten zoals het syndroom van Sjögren, en in sommige klinische situaties zoals radiotherapie de behandeling van hoofd-halskanker, speeksel productie door de klieren wordt drastisch verminderd 1,2. De resulterende xerostomie, een subjectief gevoel van een droge mond, beïnvloedt niet alleen het vermogen van de patiënt om te slikken en spreken, maar ook stimuleert de ontwikkeling van tandcariës en kan worden sociaal invaliderend voor de patiënt. De restauratie van speeksel productie in de bovengenoemde klinische aandoeningen is dan ook een onbeantwoorde een klinische noodzaak, en als zodanig een aantal studies hebben aangetoond dat de regeneratieve capaciteit van de speekselklieren 3-5. Naar aanleiding van het isolement van stamcel-achtige populaties van cellen van verschillende weefsels in de muis en het menselijk lichaam 6-8, hebben we laten zien met behulp van de beschreven methode die stamcellen geïsoleerd uit muizen speekselklieren kan worden gebruikt om de speekselproductie in bestraalde speekselklieren te redden klieren 9,10. Deze ontdekking maakt de weg vrij voor de ontwikkeling van stamcel-gebaseerde therapieën voor de behandeling van xerostomic aandoeningen bij mensen, en ook voor de verkenning van de speekselklier als een micro-omgeving bevat cellen met multipotente zelfvernieuwende mogelijkheden.

Een geoptimaliseerde protocol voor de isolatie van stamcellen van de muis speekselklier wordt beschreven. De methode maakt gebruik van enzymatische en mechanische spijsvertering, en laat de isolatie van salispheres met cellen met kenmerken van stamcellen.

Isolatie van Mouse speekselklier Stem Cells

Volwassen speekselklieren van zowel menselijke als muizenoorsprong bevatten minimaal vijf celtypen, waarvan elk de productie en uitscheiding van ... faciliteert.

Het algemene doel van deze procedure is het demonstreren van de isolatie van vermeende stamcellen uit SIV-klieren van neuronen. Dit wordt bereikt door eerst de submandibulaire speekselklieren van volwassen muizen te oogsten. De tweede stap van de procedure is het gebruik van gebogen scharen om het weefsel te verwerken tot een homogene pulp.De derde stap van de procedure is om het weefsel verder te verteren met collageenase en lyase-enzymen met een hogere activiteit. Er moet zorgvuldig worden gewaakt om oververtering van het weefsel te voorkomen. Aangezien een volledige celsuspensie niet veel sferen oplevert, zijn clusters van twee tot drie cellen optimaal.De laatste stap van de procedure is het filtreren van het homogenizaat door filters van 100 micron en 50 micron. Uiteindelijk kunnen er resultaten worden behaald die de kweek en isolatie van stamcellen uit de siv-klier aantonen door het gecombineerde gebruik van mechanische en enzymatische digestie van volledige SIV-klieren. De implicaties van deze techniek strekken zich uit tot de therapie voor xerostomie, ook wel bekend als een droge mond, wat het gevolg kan zijn van radiotherapiebehandelingen.Stamcellen uit de speekselklier kunnen worden gebruikt om xerostomie te behandelen bij patiënten die lijden aan hoofd-halskanker. Bereid vóór aanvang van deze procedure de buffers, muizen, speekselklierculturen, media en enzymoplossingen voor. Volgens het bijbehorende schriftelijke protocol moeten alle dissectie- en weefselkweekstappen worden uitgevoerd in een steriele weefselkweekkap.Weeg na het isoleren en dissekeren van de speekselklieren van de muis het weefsel van de speekselklier op een balans en noteer het gewicht. Gebruik een spatel om de speekselklieren over te brengen naar een kleine Petrischaal en hak de speekselklieren met gebogen dissectiescharen tot een homogene pulp. Knip het uiteinde van een P 1000 pipetpunt af om een bredere opening te creëren.Gebruik dit om één milliliter buffer per 80 milligram weefsel in de Petrischaal te pipetteren en breng het homogenisaat over naar een centrifugebuis van 15 milliliter. Voeg nogmaals één milliliter buffer per 80 milligram weefsel toe aan de Petrischaal. Voeg deze oplossing toe aan de centrifugebuis om alle resterende kleine stukjes weefsel te verzamelen.Voeg vervolgens snel 250 µL calciumchloride-oplossing, 25 µL hyaluronidase-oplossing en 25 µL collagenase toe. Gebruik twee enzymoplossingen per 80 mg weefsel. Plaats de buis met het mengsel van weefsel en enzymen in een schuddend waterbad van 37 °C en incubeer gedurende 20 minuten.Verwijder na de incubatie de buisjes. Gebruik, zoals eerder gedaan, een P 1000-tip waarvan het uiteinde is verwijderd om het weefsel en de enzymoplossing ongeveer 10 keer grondig te mengen. Plaats het buisje voor nog eens 20 minuten terug in het waterbad van 37 degrees Celsius.Centrifugeer na de tweede incubatieperiode het monster acht minuten bij 400 ×g. Gooi na centrifugatie het supernatant weg en resuspendeer het pellet voorzichtig in twee milliliters buffer per 80 milligram startweefsel. Voeg vervolgens nog 250 µL calciumchloride-oplossing, 25 µL hyaluronidase-oplossing en 25 µL collagenase-oplossing toe per 80 milligram weefsel.Plaats de buis vervolgens gedurende 20 minuten terug in het schuddende waterbad bij 37 °C. Haal de weefsels uit het waterbad en herhaal de stappen zoals bij de vorige incubaties na afloop van de incubatie. Centrifugeer het monster 8 minuten bij 400 ×g.Herhaal dit nogmaals en gooi vervolgens het supernatant weg. Het weefsel is nu klaar om te worden gewassen ter voorbereiding op het filteren na de voorgaande centrifugatie. Pipetteer twee milliliters buffer in de buis en homogeniseer door trituratie.Resuspendeer het pellet na de resuspensie. Centrifugeer het monster bij 400 ×g gedurende acht minuten. Verwijder vervolgens het supernatant met een pipet.Voeg één milliliter buffer per 80 milligram weefsel toe aan de buis en homogeniseer opnieuw door trituratie om het pellet opnieuw te suspenderen. Herhaal de centrifugatie.Centrifuge 8 minuten bij 400 ×g. Bereid tijdens het centrifugeren de filtratiestap voor door een filter met een poriegrootte van 100 micron over een centrifugebuis van 50 milliliter te plaatsen. Verwijder na centrifugatie het supernatant en pipetteer een uiteindelijke hoeveelheid van 1 milliliter buffer per 80 milligram weefsel in de buis. Gebruik een P 1000-tip met uiteinde-afknijpers om het monster meerdere keren op en neer te pipetteren, zodat het pellet volledig is geresuspendeerd.Breng het homogenisaat vervolgens over naar het filter met een poriegrootte van 100 micron en laat het door het filter in de centrifugebuis van 50 milliliter sijpelen. Het is belangrijk om niet meer dan drie milliliter homogenisaat toe te voegen, omdat het filter kan verstoppen. Indien dit volume wordt overschreden, gebruik dan een P 1000 pipet om al het weefsel dat zich aan de onderzijde van het filter heeft opgehoopt te verwijderen en breng dit weefsel over naar de centrifugebuis van 50 milliliter met het filtraat.Zuig het homogenizaat uit de centrifugebuis van 50 milliliter op met een spuit van één milliliter die is voorzien van een naald met een dikte van 26 gauge, en breng dit aan op de filterdop met een poriegrootte van 50 micron die op de buis van vijf milliliter is geplaatst. Laat het homogenizaat door het filter sijpelen. Als de filtratie traag verloopt, draai de filterdop dan iets los als deze te strak zit.Een afsluiting kan de filtering belemmeren zodra al het homogenizaat door het filter in de buis is gepasseerd. Centrifugeer het monster bij 400 ×g gedurende acht minuten. Na centrifugatie zijn de gepelletteerde cellen klaar om op een plaat te worden uitgeplaat.De speekselkliercellen worden eerst geresuspendeerd in één milliliter MSG-medium per 80 milligram weefsel. Tel de cellen volgens de standaardprotocollen. In dit geval wordt een automatische celteller gebruikt om het aantal cellen te bepalen.Bereken het volume cel-suspensie dat nodig is voor 0,4 × 10⁶ cellen en bepaal op basis hiervan het aantal putjes dat gezaaid kan worden. Voeg één milliliter MSG-medium per putje toe aan een 12-wells kweekplaat. Zorg dat de cel-suspensie goed gemengd is en voeg het benodigde volume cel-suspensie voor 0,4 × 10⁶ cellen toe aan elk van de putjes.Plaats de platen in een incubator van 37 °C met 5% koolstofdioxide. Na twee dagen incubatie worden de culturen onderzocht op de aanwezigheid van SLO-sferen en op de afwezigheid van ace in onze cellen. Dit is een voorbeeld van weefsel uit een speekselklier van een muis, verwerkt zoals beschreven en gevisualiseerd middels fasecontrastmicroscopie van nul tot 10 dagen in cultuur; de kleine celaggregaten zijn SLO-sferen, die gedurende deze periode in omvang toenemen.Hier wordt de immunokleuring van een representatieve drie tot vijf dagen oude SLO-sfeercultuur voor de stamcelmarker Protein C kit getoond. Zoals geanalyseerd via flowcytometrie, bevestigt de expressie van sea kit de aanwezigheid van vermeende stamcellen in de SLO-sfeerculturen. Drie tot vijf dagen oude SLO-sferen kunnen ook worden gedifferentieerd om acini- en gangachtige structuren te vormen met een morfologie die vergelijkbaar is met die in de natuurlijke speekselklier.Na het bekijken van deze video zou u een goed inzicht hebben in hoe u speekselklieren isoleert en stamcellen uit murine speekselklieren verkrijgt.

isolation-of-mouse-salivary-gland-stem-cells

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Deze video laat zien hoe de dooierzak en de aorta-gonaden-mesonephros regio micro-ontleden van embryo's en het gebruik flowcytometrie om hematopoietische stamcellen te sorteren.

Isolatie van Vroege hematopoietische stamcellen van muizen dooierzak en AGM

Het vermogen van embryonale kiemcellen om in primordiale kiemcellen differentiëren tijdens de vroege ontwikkelingsstadia is een perfect model om onze hypothese te pakken over kanker en onvruchtbaarheid. Dit protocol laat zien hoe primordiale kiemcellen van de ontwikkeling van gonaden isoleren in 10.5-11.5 dagen na coitum muizenembryo's.

Isolatie en Afleiding van muis embryonale cellen Germinal

Een protocol voor de canulatie van de muis submandibulaire speekselklier via kanaal van de Wharton is beschreven. Voor dit experiment wordt het trypaan blauw-oplossing gebruikt als een verver om aan te tonen hoe deze techniek effectief infusies levert in de gerichte klier, en om de betrouwbaarheid van deze nieuwe aanpak voorstellen als een potentieel klinisch drug / celtherapie voor het herstel van de speekselklieren.

Canulatie van de muis submandibulaire speekselklier via Duct de Wharton&#39;s

Hier laten we zien ons protocol voor isolatie van basale en submucosale klier kanaal cellen van de muis luchtpijpen. We tonen ook aan de methode van het injecteren van stamcellen in het dorsale muis vetkussentje om een ​​te...

Isolatie van basale cellen en Submucosale Gland Duct Cellen van Mouse Luchtpijp

Een ideaal model voor het bestuderen van de biologie van volwassen stamcellen is de muis haarfollikel. Hier presenteren we een protocol voor het isoleren van verschillende populaties van haarfollikelstamcellen en epidermale keratinocyten, met behulp van enzymatische vertering van de dorsale muishuid gevolgd door FACS-analyse.

Isoleren haarfollikel stamcellen en epidermale keratinocyten van Dorsale Mouse Skin

Hier presenteren we een protocol voor de isolatie van geheel, intact muis borstklieren om te onderzoeken van de extracellulaire matrix (ECM) expressie en ductaal morfologie. Muis #4 abdominale klieren werden gehaald uit de 8-10 week oude vrouwelijke nullipaar muizen, vast in neutraal gebufferde formaline, gesegmenteerd en gekleurd met behulp van immunohistochemistry voor ECM eiwitten.

Isolatie van Intact, hele muis borstklieren p.a. van extracellulaire Matrix expressie en klier morfologie

Hier introduceren wij een nieuwe microchirurgische techniek voor de isolatie van neurale stamcellen uit de E13 muis embryo ganglionaire eminentie.

Isolatie en cultuur van muis embryonale neurale stamcellen

De traanklier (LG) heeft twee soorten cellen uitdrukken α-Smooth spier actine (αSMA): Myo cellen (MECs) en pericyten. MECs zijn van ectodermale oorsprong, gevonden in vele klier weefsels, terwijl pericyten zijn vasculaire gladde spiercellen van endodermal oorsprong. Dit protocol isoleert MECs en pericyten van muizen LGs.

Isolatie van Myo cellen van volwassen muizen traan en submandibulaire klieren

We presenteren een methode voor het isoleren en cultiveren van primaire menselijke speekselklier-afgeleide epitheliale cellen. Deze cellen vertonen genexpressie patronen consistent met hen van speeksel epitheel oorsprong en kunnen worden gekweekt als salispheres op kelder membraan matrices afgeleid van engelbreth-Holm-Swarm tumorcellen of als monolagen op behandelde cultuur gerechten.

Isolatie van speeksel epitheelcellen van menselijke speekselklieren voor in vitro groei als Salispheres of monolagen

Immunofluorescerende beeldvorming wordt beperkt door het vermogen om complexe, tijdsafhankelijke biologische processen in slechts één momentopname in de tijd waar te nemen. Deze studie schetst een live-imaging-benadering die wordt uitgevoerd op nauwkeurig gesneden plakjes submandibulaire klier van muizen. Deze aanpak maakt de real-time observatie mogelijk van cel-cel interacties tijdens homeostase en de processen van regeneratie en herstel.

Ondervraging van cel-celinteracties in de speekselklier via ex vivo beeldvorming van levende cellen

Leer een geoptimaliseerde methode voor het isoleren van stamcellen uit muizenspeekselklieren met enzymatische en mechanische digestie. Dit protocol maakt de cultuur van salisferen mogelijk voor regeneratieve geneeskunde.

Isolatie van Mouse speekselklier Stem Cells

Meer video's verkennen