Name: Diagnose van Ecto-en endoparasieten bij laboratoriumratten en muizen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-06T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 3 s
Description: Leer diagnostische methoden voor ecto- en endoparasieten bij laboratoriumratten en muizen. Deze technieken omvatten onderzoek van vacht, feces en darminhoud om de gezondheid van dierkolonies te waarborgen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

1. Endoparasiet onderzoek (tabel 1) 1. Perianale tape test (zie ook paragraaf 5, deze worden meestal uitgevoerd op hetzelfde tijdstip) <ol><li> Verwijder een lengte van duidelijke, niet mat, cellofaan tape van een dispenser. Tape moet lang genoeg te hanteren zijn door de ene kant, zonder het aanraken van de midden (ongeveer 5 cm). Het kan makkelijker zijn om meerdere lengtes afzien in een keer, waarmee ze aan de rand van een schoon werkvlak en gebruik als dat nodig is. </li><li> Lift een muis uit zijn kooi en plaats op de kooi deksel, terwijl u hem aan de staart. Het uitvoeren van deze actie in een laminaire flow kast of bioveiligheid kabinet als de gezondheidstoestand van het dier het nodig heeft. </li><li> Weerhoudt de muis door de staart, de intrekking van haar achterpoten uit de kooi. Pak het einde van de band tussen duim en wijsvinger, dan geldt het midden van de band stevig aan perineum van de muis, met inbegrip van het perianale gebied meerdere malen. Haar moet worden gezien als aanhanger van de tape zijn voor de test te worden als succesvol beschouwd. </li><li> Plaats de muis terug in de kooi. </li><li> Plaats een druppel van minerale olie op een label schoon glasplaatje, gelden de tape aan de dia, dan nog een druppel van minerale olie. Dek af met een glazen deksel slip. </li><li> Lees het objectglaasje met de 10x en 40x objectieven op een lichtmicroscoop. De perianale tape-test is het beste op het opsporen Syphacia eieren, hoewel andere parasiet eieren worden soms gevonden. </li></ol> 2. Fecale flotatie <ol><li> Monteer flotatie oplossing, een platte bodem flacon (pil flacon of fecale flotatie apparaat zoals Ovatector), petrischaaltje dekglas, microscoopglaasje, en applicator / roerstaafjes. Drijfvermogen oplossing, zoals Fecasol, moet een soortelijk gewicht van 1.20 tot 1,30 en kunnen worden gemaakt van verschillende natriumzouten, suiker, zinksulfaat, of gekocht commercieel. (Tabel 2) </li><li> Verzamel 2-5 fecale pellets uit de kooi of vers uit de dier (en) in de beursgang kamer. Als uitwerpselen zijn zeer droog, hetzij als gevolg van leeftijd of soorten productie van de ontlasting, het bevochtigen van de ontlasting met 500 pi van 0,9% zoutoplossing kan gunstig zijn. </li><li> Plaats de flacon in de petrischaal op het werkvlak te beschermen tegen overstroming van de ontbonden uitwerpselen. Voeg een klein volume van de flotatie medium en aardappelpuree en roer goed. Geen grote stukken materiaal moet blijven. Blijf flotatie medium toe te voegen tot een meniscus vormt boven de rand van de flacon. </li><li> Plaats het deksel slip op de meniscus en incubeer bij kamertemperatuur gedurende 15 minuten. Parasiet eieren en sommige protozoa oöcysten zal stijgen naar de top en zich houden aan de dekglas. </li><li> Na de incubatie, lift en omkeren van de dekglas. Plaats het deksel slip op een glazen microscoopglaasje. </li><li> Onderzoek de schuif met de 10x en 40x objectieven onder een lichtmicroscoop. </li><li> Hoewel de low-tech en gemakkelijk te presteren in het algemeen, is deze techniek niet geschikt voor muizen of ratten. In de regel is het meer geschikt voor dieren die een groter volume van de ontlasting te produceren. </li></ol> 3. Fecale concentratie en centrifugeren <ol><li> Monteer flotatie oplossing, centrifugebuis, dekglas, microscoopglaasje, en applicator / roeren stokken en buizen caps. Flotatie-oplossing moet hebben een soortelijk gewicht van 1.18-1.30 en kunnen worden gemaakt van verschillende natriumzouten, suiker, zinksulfaat, of gekocht commercieel. (Tabel 2) </li><li> Verzamel 20-10 fecale pellets uit de kooi of vers uit de dier (en) in een verzameling buis. Als uitwerpselen zijn zeer droog, hetzij als gevolg van leeftijd of soorten productie van de ontlasting, het bevochtigen van de ontlasting met 500 pi van 0,9% zoutoplossing of met de beursgang oplossing die u gebruikt kan gunstig zijn. </li><li> Mengmonster in een geschikte flotatie-oplossing in een glazen centrifugebuis. Mechanisch roeren met een vortexer kan worden gebruikt om monsters te mengen. Als een vortexer wordt gebruikt, moet snap caps worden gelegd op de toppen van de buis om morsen en kruisbesmetting te voorkomen. Routinematig worden monsters bereid in 1.18 soortelijk gewicht zinksulfaat, maar andere oplossingen kunnen worden gebruikt naast (in een aparte voorbereiding buis) of ter vervanging. </li><li> Voeg extra flotatie oplossing voor elke buis een lichte positieve meniscus op elke buis. Breng een plastic cover slip aan elke buis, en ervoor zorgen dat volledig contact met de buis lip is gemaakt. Plaats tube (s) in de centrifuge. </li><li> Centrifugeer op ongeveer 616-760 RCF gedurende 10 minuten. Als dekglaasjes verloren gaan of worden afgebroken tijdens het centrifugeren proces, kan een nieuw dekglas worden geplaatst op het monster buis en de buis kan voorzichtig worden gekanteld, zodat de meniscus de nieuwe cover slip raakt. Geen extra centrifugeren is niet nodig. </li><li> Verwijder het deksel slip uit centrifugebuis en plaats deze op een label, schone glazen microscoopglaasje. Als er meerdere oplossingen centrifugatie werden gebruikt om een ​​monster ontlasting te evalueren, kunnen twee dekglaasjes worden geplaatst op dezelfde dia. </li><li> Vlekken op de dia met jodium. Dit zorgt voor een eAsier identificatie van cysten. </li><li> Onderzoek de schuif met de 10x en 40x objectieven op een lichtmicroscoop. </li></ol> 4. Rechtstreeks onderzoek van de darmen voor helminten en protozoa <ol><li> Plaats de muis of rat gedood karkas in dorsale decubitus op een schone dissectie board of soortgelijk werk oppervlak. </li><li> Met behulp van een tang, til de buikwand in het genitale gebied. Met een schaar voorzichtig incise de ventrale buikwand van het genitale gebied aan de onderkant van de ribbenkast het verwijderen van zowel de huid en de spieren en het blootstellen van de darmen. Verwijder de ingewanden, beginnend bij de twaalfvingerige darm (het segment van de darm te beginnen bij de uitgang van de maag) en blijft de dalende dikke darm (het segment van de darm die eindigt bij de anus en bevat meestal gevormd ontlasting). </li><li> Plaats darmen in een 100 ml petrischaal. Verzamel een deel van de blindedarm en twaalfvingerige darm van het dier laten inslapen en leg ze op een dissectie boord. Lengte incise elke intestinale segment naar de mucosa bloot te leggen. </li><li> Met behulp van een schaar, knip de rest van darmen in kleine secties. Voeg genoeg leidingwater om de schotel te dompelen nauwelijks de verzamelde weefsel. </li><li> Incubeer het monster mengsel bij 35-40 ° C in een laboratorium oven of incubator voor een minimum van 10 minuten. Dit zal bevrijden en bloot luminale helminten. Terwijl het monster is uitbroeden, het uitvoeren van de volgende stappen. </li><li> Plaats twee druppels van 0,9% zoutoplossing naast elkaar op een enkel label glijbaan, om voor de voorbereiding van de monsters toestaan ​​van twee intestinale segmenten (twaalfvingerige darm en blindedarm). </li><li> Warmte steriliseren en cool een entnaald of gelijkwaardig. </li><li> Schraap het slijmvlies van de twaalfvingerige darm en plaats de geschraapt aan de linkerkant van de dia (zij het dichtst bij de rand van frosted). </li><li> Schraap het slijmvlies van de blindedarm en plaats de geschraapt uit aan de rechterkant van de dia. </li><li> Top van de geschraapt met een dekglas. Onderzoek bereid schuif het gebruik van de 40x doelstelling van een fase-contrast microscoop), een stijging van vergroting als nodig is voor identificatie. Als parasieten worden gevonden, te identificeren op basis van morfologie. </li><li> De schotel inhoud zal klaar zijn voor onderzoek door dit punt. Onderzoek de schotel inhoud onder een dissectie microscoop. Gebruik een sonde of een applicator blijven als nodig is om de inhoud te verplaatsen binnen de schotel aan een grondig onderzoek te voltooien. Als Oxyuren aanwezig zijn zullen ze verschijnen als kleine, witte, haar-achtige wormen. Als lintwormen aanwezig zijn, zullen ze verschijnen als gesegmenteerd, platte wormen (groter dan de draad-achtige Oxyuren). </li><li> Als helminten ontdekt of vermoedt, het verzamelen van het monster met behulp van een klein pincet. </li><li> Monteer het monster op een label, schoon glasplaatje in een druppel paraffine of minerale olie en leg een deksel slip op de top van het monster. Onderzoek de schuif met de 10x en 40x objectieven op een lichtmicroscoop. </li></ol> 2. Ectoparasiet onderzoek (tabel 3) 5. Fur plukken onderzoek tegen ectoparasieten (tape-test) <ol><li> Verwijder een lengte van duidelijke, niet mat, cellofaan tape van een dispenser. Tape moet lang genoeg te hanteren zijn door de ene kant, zonder het aanraken van de midden (ongeveer 5 cm). Het kan makkelijker zijn om meerdere lengtes afzien in een keer, waarmee ze aan de rand van een schoon werkvlak en gebruik als dat nodig is. </li><li> Lift een muis of rat uit zijn kooi en plaats op de kooi deksel, terwijl u hem aan de staart. Het uitvoeren van deze actie in een laminaire flow kast of bioveiligheid kabinet als de gezondheidstoestand van het dier het nodig heeft. </li><li> Beperken van de muis of rat. Pak de vacht met hemostats en zacht vacht plukken van scapulier van de muis gebied, ventrale cervicale regio, oksel gebied, lies gebied, en dorsale romp. Plaats de vacht op de band. Haar moet worden gezien als aanhanger van de tape zijn voor de test te worden als succesvol beschouwd. Plaats de muis of rat terug in zijn kooi. </li><li> Plaats een druppel van minerale olie op een label schoon glasplaatje; toepassing van de band, toen nog een daling van minerale olie. Dek af met een glazen deksel slip. </li><li> Lees het objectglaasje met de 10x en 40x objectieven onder een lichtmicroscoop. </li><li> Dit onderzoek is het beste voor het opsporen van vacht mijten, zoals Radfordia, Myobia, en Myocoptes. </li></ol> 6. Huid schrapen <ol><li> Monteer de volgende materialen: dier te testen, minerale olie, microscoopglaasje, dekglas, scalpel en schaar. Als deze test moet worden uitgevoerd op levende dieren, moeten ze verdoofd worden voordat u begint. </li><li> Proef de dorsum de buurt van de basis van de staart en de temporale regio van het hoofd. Als alternatief kan de huid laesies en / of andere sites worden geschraapt. </li><li> Diep schrapen van de huid met de scalpel in de tegenovergestelde richting van de haargroei, de epidermis eroderen. Het trimmen van de vacht voorafgaand aan de scraping kunnen verbeteren screening de gevoeligheid door het verminderen van visuele obstructie (overtollige haren) op deglijbaan. </li><li> Plaats een druppel olie op de dia. Breng het monster op de olie langs het mes af te vegen (met voorbeeld bevestigd) op het oppervlak van de dia. Voeg extra olie aan de dia, indien nodig, en leg er een dekglas. </li><li> Lees het objectglaasje met de 10x en 40x objectieven onder een lichtmicroscoop. </li><li> De huid schrapen wordt meestal gebruikt om Demodex (en dermatophytic schimmels) te detecteren. </li></ol> 7. Rechtstreeks onderzoek van de vacht <ol><li> Plaats de muis of rat gedood op het podium van een dissectiemicroscoop. </li><li> Onderzoek de haren van de vacht op ongeveer 10x met behulp van een applicator stick of een soortgelijk instrument om een ​​deel van de haren en observeren de basis van de haarschacht. </li><li> Onderzoek van de schedel, tussen de ogen en de oorschelpen, tussen de oorschelpen, tussen de schouderbladen, onder de kaak, en de lies en oksel gebieden. Als alternatief kan de hele karkas worden onderzocht. </li><li> Verzamel alle ectoparasieten of verdachte materiaal gezien met een kleine pincet. Ectoparasieten kan er vaak uit als roos of een gele wasachtige opbouw aan de basis van een haarschacht of direct op de huid. </li><li> Monteer het monster op een schoon glasplaatje in een druppel paraffine of minerale olie en leg een deksel slip op de top van het monster. Onderzoek de schuif met de 10x en 40x objectieven onder een lichtmicroscoop. </li></ol> 3. Representatieve resultaten: Zie bijgevoegde bestanden identificeren van de volgende parasieten: (Let op: deze procedures zal elke ei, worminfecties, of cyste aanwezig zijn op te sporen in de ontlasting of op de huid en vacht, alleen een paar van deze staan ​​hieronder vermeld) Endoparasieten: <table border="0"><tbody><tr><td> Syphacia Muris (ei, worm) </td><td> Chilomastix bettencourti </td></tr><tr><td> Syphacia obvelata (ei, worm) </td><td> Hexamastix Muris </td></tr><tr><td> Aspiculuris tetraptera (ei, worm) </td><td> Retortamonas sp. </td></tr><tr><td> Rodentolepis nana (ei, worm) </td><td> Giardia spp. </td></tr><tr><td> Tritrichomonas Muris </td><td> Spironucleus Muris </td></tr><tr><td> Entamoeba Muris </td><td></td></tr></tbody></table> Ectoparasieten: <table border="0"><tbody><tr><td> Myocoptes musculinis </td><td> Radfordia affinis </td></tr><tr><td> Myocoptes musculinis </td><td> Radforida ensifera </td></tr><tr><td> Myobia musculi </td><td></td></tr></tbody></table><table border="1"><tbody><tr><td>&nbsp;</td><td> Tape-test </td><td> Fecale flotatie </td><td> FCC </td><td> Direct examen een </td><td> PCR </td></tr><tr><td> Protozoa </td><td> - </td><td> + </td><td> + + </td><td> + + + </td><td> + + + / NA 2 </td></tr><tr><td> Metazoa </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Pinworm </td><td> + / - 3 </td><td> + / - 4 </td><td> + 4 </td><td> + + + </td><td> + + + </td></tr><tr><td> Lintworm 5 </td><td> - </td><td> + </td><td> + + </td><td> + + + </td><td> NA </td></tr><tr><td> Andere rondwormen 5 </td><td> - </td><td> + </td><td> + + + </td><td> + + + </td><td> NA </td></tr></tbody></table> 1. Deze methode vereist euthanasie van het dier. 2. Er zijn geen PCR-detectie-methoden die momenteel beschikbaar zijn voor elke protozoa. 3. Deze methode is meest geschikt is om Syphacia spp op te sporen. 4. Deze methode zal wellicht meer Aspiculuris te detecteren, en minder kans op Syphacia op te sporen. 5. Lintwormen en rondwormen andere dan de maden zijn zeer zeldzaam in het moderne laboratorium muizen en ratten. Tabel 1. Klasse van endoparasiet en passende detectiemethode. Sommige methoden vereist euthanasie van het dier. NA geeft methode is op dit moment niet beschikbaar voor deze parasieten + geeft geschiktheid van de methode voor de detectie van de parasiet in kwestie, en -. Geeft aan dat de methode niet wordt aanbevolen voor deze parasiet. <table border="1"><tbody><tr><td> Oplossing </td><td> Soortelijk gewicht </td><td> Ingrediënten per 1 l H 2 O </td></tr><tr><td> Natriumchloride </td><td> 1.20 </td><td> 311 g natriumchloride </td></tr><tr><td> Natriumnitraat </td><td> 1.20 </td><td> 338 g natrium nitraat </td></tr><tr><td> Natriumnitraat </td><td> 1.30 </td><td> 616 g natrium nitraat </td></tr><tr><td> Suiker </td><td> 1.20 </td><td> 1170 g sucrose een </td></tr><tr><td> Sheather&#39;s suiker </td><td> 1.27-1.30 </td><td> 1563 g sucrose een </td></tr><tr><td> Zinksulfaat </td><td> 1.18 </td><td> 493 g zinksulfaat </td></tr></tbody></table> 1. Deze oplossingen vereisen koeling of de toevoeging van 9 ml fenol als conserveermiddel. Tabel 2. Fecale beursgang oplossingen (van Smith et al.). <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Fur plukken (tape-test) </td><td> Huid schrapen een </td><td> Direct examen een </td><td> PCR </td></tr><tr><td> Luizen </td><td> - </td><td> - </td><td> + + </td><td> NA </td></tr><tr><td> Mijten </td><td> + </td><td> + </td><td> + + + </td><td> + + + / NA 3 </td></tr><tr><td> Vlooien 4 </td><td> - </td><td> - </td><td> + </td><td> NA </td></tr><tr><td> Teken 4 </td><td> - </td><td> - </td><td> + + </td><td> NA </td></tr></tbody></table> 1. Deze methode vereist anesthesie als het moet worden uitgevoerd op een levend dier. 2. Deze methode vereist euthanasie van het dier. 3. Er zijn geen PCR-detectie-methoden die momenteel beschikbaar zijn voor elke soort van mijt. 4. Vlooien en teken zijn uiterst zeldzaam in de moderne proefdieren faciliteiten. Tabel 3. Class van ectoparasiet en passende detectiemethode. Sommige methoden vereist euthanasie van het dier, en andere methoden vereist verdoving om ze uit te voeren in levende dieren. NA geeft methode is op dit moment niet beschikbaar voor deze parasieten. NA geeft methode is op dit moment niet beschikbaar voor deze parasieten + geeft geschiktheid van de methode voor de detectie van de parasiet in kwestie, en -. Geeft aan dat de methode niet wordt aanbevolen voor deze parasiet.

<ol><li>Baker, D. G. Chapter 23. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBaker%2C+DG+%22The+Mouse+in+Biomedical+Research%3A+Diseases%22">The Mouse in Biomedical Research: Diseases</a>. Fox, J. Diseases Vol. 2, Academic Press. (2007).</li>
<li>Baker, D. G. Chapter 11. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBaker%2C+DG+%22Flynn%27s+Parasites+of+Laboratory+Animals%22">Flynn's Parasites of Laboratory Animals</a>. Baker, D. G. , Blackwell. 303-398 (2007).</li>
<li>Owen, D. G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aOwen%2C+DG+%22Parasites+of+Laboratory+Animals%22">Parasites of Laboratory Animals</a>. 12, Royal Society of Medicine. (1992).</li>
<li>Pritchett, K. R. Chapter 22. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPritchett%2C+KR+%22The+Mouse+in+Biomedical+Research%3A+Diseases%22">The Mouse in Biomedical Research: Diseases</a>. Fox, J. Diseases Vol. 2, Academic Press. (2007).</li>
<li>Smith, P. H., Wiles, S. E., Malone, J. B., Monahan, C. M. Chapter 1. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSmith%2C+PH+%22Flynn%27s+Parasites+of+Laboratory+Animals%22">Flynn's Parasites of Laboratory Animals</a>. Baker, D. G. , Blackwell. 1-13 (2007).</li>
<li>Wasson, K. Chapter 21. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWasson%2C+K+%22The+Mouse+in+Biomedical+Research%3A+Diseases%22">The Mouse in Biomedical Research: Diseases</a>. Fox, J. Vol. 2, Academic Press. 517-550 (2007).</li>
</ol>

De auteurs zijn alle medewerkers van de Charles River, een leverancier van diagnostische tests en reagentia, met inbegrip van de tests hierboven beschreven.

Bij het werken in een laboratorium, moet de veiligheid altijd een bron van zorg. Vergeet niet de juiste beschermingsmiddelen te dragen bij het werken met dieren en om uw werkplek schoon met een desinfecterend middel voor en na. Deze methoden zijn vooral bedoeld om eventuele parasieten van het laboratorium knaagdieren te vinden in de onderzochte locaties, dat wil zeggen, ze kunnen detecteren exotische of uiterst zeldzaam parasieten als de meer gebruikelijke draadwormen en vacht mijten. Hoewel ze zijn eveneens van toepassing op andere soorten, misschien wilde knaagdieren hebben extra parasieten op locaties zoals lever, subcutis en de hersenen, niet geëvalueerd door de bovenstaande methoden.

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagens naam </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> Snijplank </td><td> Thermo Electron Corp </td><td> Cat # 36114 </td><td></td></tr><tr><td> Een klein schaartje </td><td> ROBOZ </td><td> RS-5910, G204 </td><td> 23mm bladen, 3,5 &quot;lengte, recht </td></tr><tr><td> Medium schaar </td><td> ROBOZ </td><td> RS-6808, G207 </td><td> 5 &quot; </td></tr><tr><td> Tang-Gebogen </td><td> ROBOZ </td><td> RS-8254 (M1/21004) </td><td> 4.5 &quot;, gekarteld, lichte curve </td></tr><tr><td> Tang-Microdissecting </td><td> ROBOZ </td><td> RS-5238 </td><td> Hudson-(Ewald) </td></tr><tr><td> Tang-weefsel Forceps </td><td> ROBOZ </td><td> RS-8160 </td><td> Rat tand </td></tr><tr><td> Metalen probe </td><td> VWR </td><td> Cat # 25778-000 </td><td></td></tr><tr><td> Arterieklem </td><td> Voordeel </td><td> V97-48 </td><td></td></tr><tr><td> Applicator sticks </td><td> Puritein </td><td> 6IN Applicators, Ref # 807 </td><td></td></tr><tr><td> Dissectiemicroscoop </td><td> Olympus </td><td> SZ51, Schott, ACE1 </td><td></td></tr><tr><td> Petrischaal </td><td> VWR </td><td> 100mm, Cat # 3401PDNL </td><td></td></tr><tr><td> Dekglaasjes </td><td> VWR </td><td> Micro afdekglas, Cat # 48366-067 </td><td></td></tr><tr><td> Dia&#39;s </td><td> VWR </td><td> VistaVision objectglaasjes Cat # 16004-368 </td><td></td></tr><tr><td> Entnaald </td><td> VWR </td><td> Cat # 50815-040 </td><td></td></tr><tr><td> Lichtmicroscoop </td><td> Olympus </td><td> Model # BX41TF </td><td></td></tr><tr><td> Laboratorium oven </td><td> Quincy Lab Inc </td><td> Model 10 Lab Oven </td><td></td></tr><tr><td> Centrifuge </td><td> Beckman Coulter </td><td> Allegra X-12R </td><td></td></tr><tr><td> Vortexer </td><td> VWR </td><td> Mini-Vortexer </td><td></td></tr><tr><td> Reageerbuis </td><td> Kimble-Chase </td><td> 15 ml voor eenmalig centrifugebuis, Cat # 73790-15 </td><td></td></tr><tr><td> Dekglaasjes </td><td> VWR </td><td> Kunststof microscoop dekglaasjes, 22mm, Cat # 48376-049 </td><td></td></tr><tr><td> Witte caps </td><td> VWR </td><td> Cat # 60869-089 </td><td></td></tr><tr><td> Jodium </td><td> Rowley biochemische instituut </td><td> Cat # SO-364 </td><td></td></tr><tr><td> Zinksulfaat </td><td> Sigma Aldrich </td><td> Kat # 1000917519, Z4750-500G </td><td></td></tr><tr><td> Sucrose </td><td> Mallinckrodt Chemicals </td><td> Cat # 8360-06 </td><td></td></tr><tr><td> Fenol </td><td> EMD </td><td> Cat # PX0510-1 </td><td></td></tr><tr><td> Plakband </td><td> Staples </td><td> Onzichtbare tape, Cat # 504712 </td><td></td></tr><tr><td> Minerale olie </td><td> Mallickrodt </td><td> Cat # 6358 </td><td></td></tr></tbody></table>

diagnose van ecto-en endoparasieten bij laboratoriumratten en muizen

Diagnosis of Ecto- and Endoparasites in Laboratory Rats and Mice

Interne en externe parasieten blijft een belangrijke zorg in het laboratorium knaagdieren faciliteiten, en vele onderzoeksfaciliteiten haven een aantal geparasiteerd dieren. Alvorens een onderzoek van dieren op parasieten, moeten twee dingen worden overwogen. Een: wat gebruik wordt gemaakt van de verzamelde informatie, en twee: die test is het meest geschikt is. Wetende dat de dieren geparasiteerd kan iets zijn dat de faciliteit accepteert, maar er is vaak een noodzaak om dieren te behandelen en daarna naar de effectiviteit van behandeling te bepalen. Parasieten kunnen worden gedetecteerd in dieren via verschillende technieken, met inbegrip van monsters genomen van live of gedood dieren. Historisch gezien, de proeven met de grootste diagnostische gevoeligheid die nodig euthanasie van het dier, hoewel PCR heeft het mogelijk zeer gevoelige testen op verschillende soorten parasieten. Dit artikel toont aan procedures voor de detectie van endo-en ectoparasieten bij muizen en ratten. Dezelfde procedures zijn van toepassing op andere knaagdieren, hoewel de soort van de gevonden parasieten zullen verschillen.

Dit artikel beschrijft de verschillende procedures voor het screenen van ratten en muizen te detecteren endo-of ectoparasitism. Verschillende diagnostische assays zal worden aangetoond, zowel die geschikt zijn voor gebruik op levende dieren en die gebruikt worden na euthanasie van het dier. Foto&#39;s om te helpen bij de identificatie van de rat en muis parasieten zal worden opgenomen.

Diagnose van Ecto-en endoparasieten bij laboratoriumratten en muizen

Interne en externe parasieten blijven een aanzienlijk probleem in laboratoriumfaciliteiten voor knaagdieren, en veel onderzoeksinstituten huisvesten in 어느 mate geparasiteerde ...

Het algemene doel van deze procedure is om vast te stellen of er parasieten aanwezig zijn in laboratoriumratten of -muizen. Dit kan op verschillende manieren worden bereikt, waaronder onderzoek van de vacht en huid, onderzoek van de feces en onderzoek van de darminhoud. Uiteindelijk kunnen er resultaten worden verkregen die via routinematig onderzoek van deze monsters belangrijke informatie geven over de algehele gezondheid van de kolonie.Een visuele demonstratie van deze methoden is cruciaal, aangezien een parasitaire infectie over het hoofd gezien kan worden als deze niet grondig en zorgvuldig worden uitgevoerd. Over het algemeen zullen mensen die nieuw zijn met deze methoden moeite hebben, omdat parasieten verkeerd geïdentificeerd kunnen worden, zelfs wanneer de technieken correct worden uitgevoerd.De methoden die we zullen demonstreren, kunnen helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen over de gezondheidstoestand van de ratten en muizen die voor uw onderzoek worden gebruikt. Bereid, voorafgaand aan het afnemen van vacht- en perianale monsters, minstens twee glazen objectglaasjes per dier voor met druppels minerale olie. Til de betreffende muis uit de kooi en plaats deze op de binnenkant van het omgekeerde koideksel.Houd de muis bij de staart vast. Breng een stuk cellofaanplakband van vijf centimeter stevig aan op het perineum en het perianale gebied van de muis. Bij een succesvolle uitvoering moet er haar aan de tape blijven kleven.Blijf het dier fixeren en pak de vacht vast met een pincet. Pluk voorzichtig vachtmonsters van het scapulagebied, de ventrale cervicale regio, het axillaire gebied, het inguinale gebied en de dorsale kruisregio. Plaats deze monsters op vijf centimeter lange stukken cellofaanplakband.Breng bij het nemen van elk monster de tape met de plakzijde naar beneden aan op een objectglas. Zodra alle monsters zijn genomen, wordt op elk monster opnieuw een druppel minerale olie aangebracht en worden er dekglasplaatjes geplaatst. Bij het onderzoeken van de perianale preparaten is het onwaarschijnlijk dat eieren van andere parasieten dan S. facia zullen worden gevonden.Verzamel voor fecale analyse twee tot vijf pellets van elk dier of uit de kooi. Als de monsters extreem droog zijn, bevochtig deze dan met 500 µL 0,9% saline. Plaats de monsters in een pillenbuisje van 10 ml of in een apparaat voor fecale flotatie.Plaats het opvangbuisje in de Petrischaal en vul het buisje voor een kwart met een dens flotationmedium. Prak en roer vervolgens de feces in de oplossing in het buisje totdat er geen grote stukken meer overblijven. Voeg flotationmedium toe totdat er een meniscus boven de rand van het buisje wordt gevormd.Plaats vervolgens het dekglas op de meniscus en incubeer het vial gedurende 15 minuten bij kamertemperatuur. Tijdens de incubatie stijgen de parasieten, eieren, proteasomen en oasen op en hechten deze zich aan het dekglas, dat vervolgens op een objectglas wordt gemonteerd voor verdere analyse. Deze assay kan worden uitgevoerd in iets eenvoudigs als een medicijnflesje.Als er geen vriezers beschikbaar zijn, begin dan met het verzamelen van twee tot 10 fecale pellets per dier, en rehydrateer deze bij uitdroging in 500 µL 0,9% zoutoplossing. Vul een glazen centrifugebuis van 15 mL voor een kwart met een dichte flotatielosuning en meng het monster. Sluit de glazen buis af met een plastic klikdop en vortex het mengsel gedurende 15 tot 30 seconden totdat het een homogeen uiterlijk heeft.Voeg nu extra flotatie-oplossing toe aan elke monsterbuis om een lichte positieve meniscus te vormen. Plaats een plastic dekglas op elke buis en zorg ervoor dat dit volledig contact maakt met de rand van de buis.Reinig de buis met een wattenstaafje voor een optimale afdichting. Centrifugeer vervolgens de buizen en dekglasjes gedurende 10 minuten. Indien er dekglasjes verloren zijn gegaan of gebroken zijn, vervang deze dan en kantel de buizen voorzichtig zodat de meniscus het nieuwe dekglasje raakt.Verwijder vervolgens alle dekglasjes en plaats deze op een gelabelde, schone glazen microscoopdia. Een jodiumkleuring helpt bij de identificatie van cysten bij een geneerstheerde of geëuthanaseerde dier. Trim de rugbeharing nabij de basis van de staart en de temporale regio van de kop, of rondom elke huidlaesie of andere te schrapen locatie, en schraap de huid diep met het scalpmes in de tegenovergestelde richting van de haargroei.Dit erodeert de epidermis. Veeg het mesje schoon in minerale olie die op een gelabelde objectglas is aangebracht. Voeg indien nodig een extra druppel olie toe.Voordat het monster met een glazen dekglas wordt afgedekt, wordt een geëuthanaseerd dier op een schoon dissectiebord geplaatst en wordt de buikwand bij het genitale gebied met een pincet opgetild. Maak vervolgens met een schaar voorzichtig een incisie in de ventrale buikwand van het genitale gebied tot aan de basis van de ribbenkast en verwijder de huid en spieren om de darmen bloot te leggen. Neem daarna een gedeelte van het caecum en het duodenum op in het deksel van een Petrischaal.Maak een lengtesnede in elk darmsegment. Om het slijmvlies bloot te leggen, plaatst u twee druppels 0,9% zoutoplossing op een enkel gelabeld objectglas. Schraap vervolgens met een gesteriliseerde entlus het slijmvlies van het duodenum af en plaats het schraapsel in één druppel zoutoplossing.Herhaal het proces door een monster van het caecum naar de andere druppel over te brengen. Verwijder de resterende darmen. Begin bij het duodenum en ga door tot aan het colon descendens.Breng de darmen over naar de bodem van een Petri-schaal van 100 milliliter. Gebruik een schaar om de darmen in kleinere secties te knippen. Voeg voldoende kraanwater aan de schaal toe om het verzamelde weefsel net te bedekken.Incubeer het monster-mengsel bij 35 tot 40 °C gedurende minimaal 10 minuten. Dit zal de luminale helmen vrijmaken en blootstellen terwijl het gemacerateerde darmmonster incubeert. Gebruik fasecontrastmicroscopie om de duodenale monsters en SQL-monsters op parasieten te onderzoeken.Nadat de incubatie van het volledige darmmonster is voltooid, wordt de inhoud van de petrischaal onder een dissectiemicroscoop onderzocht. Voer met behulp van een sonde een grondige inspectie uit. Spoelwormen zullen zichtbaar zijn als kleine, witte, haarachtige wormen.Lintwormen zullen zichtbaar zijn als gesegmenteerde platwormen. Verzamel alle wormen of verdachte materialen met een kleine pincet en monteer deze op een objectglas. Voor verdere examinatie onder een lichtmicroscoop plaatst u de geëuthanaseerde muis of rat direct op de tafel van een dissectiemicroscoop onder het 10 x objectief; gebruik een applicatiestaafje om de haren te scheiden en observeer de basis van de haarschachten.Ectoparasieten kunnen lijken op roos of een gele wasachtige ophoping aan de basis van een haarschacht of direct op de huid. Zoek minimaal naar ectoparasieten in de craniale regio, alsofals in de inguinale en axillaire regio's.Controleer zorgvuldig tussen de ogen, tussen de schouderbladen en onder de kaak. Gebruik een kleine pincet om eventuele ectoparasieten en andere verdachte materialen over te brengen naar een objectglas.Monteer ze in minerale olie voor identificatie. Deze procedures zullen veel voorkomende parasieten aan het licht brengen. Hier zijn enkele voorbeelden.Dit zijn SE-facia-eieren gevonden in perineale tape-monsters. In een vachtprop werd de mijt myopia musculi aangetroffen via een faecale centrifugatiepreparaat. Dit zijn picis-tetter-eieren.Bij dit direct onderzoek van het darmslijmvlies kan een trioni worden waargenomen; onderzoek van gemacerde darmen onthulde deze volwassen spoelwormen. Zodra men deze techniek beheerst, kan dit volledige onderzoek op parasieten in minder dan een uur worden voltooid. Na het bekijken van deze video zou u een goed inzicht hebben in het uitvoeren van verschillende onderzoeken naar parasieten bij ratten en muizen. Vergeet niet dat sommige van deze parasieten kunnen worden overgedragen op mensen.Volg altijd de basisregels voor laboratoriumveiligheid.

diagnosis-of-ecto-and-endoparasites-in-laboratory-rats-and-mice

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie en Infectie

Trichuris Muris-infectie is een intestinale model van de Th2-immuniteit, waar resistente muizen genereren van een beschermende Th2 respons en vatbaar zijn muizen het genereren van een pathologische Th1 respons.

Trichuris Muris Infectie: Een model van type 2 immuniteit en ontsteking in de darm

Dit artikel beschrijft de procedures voor het uitvoeren van een elementaire post-mortem onderzoek van een muis of rat, en de verzameling van fundamentele organen, maar ook meer uitdagend soorten monsters uit voor histologische, microbiologische en PCR evaluatie.

Diagnostische autopsie en Selected Tissue en Sample Collection bij ratten en muizen

De ziekte van Lyme is de meest gerapporteerde vector overgedragen ziekte in Noord-Amerika. De verwekker, Borrelia burgdorferi is een spirocheet bacterie overgedragen door Ixodes teken. Transmissie en detectie van infectie bij diermodellen wordt geoptimaliseerd door het gebruik van teek voeding, die hier beschreven.

Voederen van Ticks on Animals voor Transmissie en Xenodiagnosis in Lyme Disease Research

We beschrijven methoden voor longitudinaal bewaken van de werkzaamheid van therapieën voor de behandeling van colonische pathologieën bij muizen met behulp van een star endoscoop. Dit protocol kan gemakkelijk worden gebruikt voor de karakterisering van de therapeutische respons van een individuele tumor in levende muizen en ook voor het monitoren van mogelijke ziekterecidieven.

Niet-invasieve evaluatie van de werkzaamheid van nieuwe therapieën voor Intestinale Pathologieën gebruik van een serieel Endoscopische Imaging van levende muizen

Als gevolg van de opvallende gelijkenissen van de levenscyclus en de biologie van knaagdieren malariaparasieten voor menselijke malariaparasieten, knaagdieren malaria modellen zijn onmisbaar geworden voor malaria onderzoek. Hierin hebben we enkele van de belangrijkste technieken gestandaardiseerd die worden gebruikt in de fenotypische analyse van wild-type en transgene knaagdier malaria soorten.

Fenotypische analyse van knaagdieren malaria parasiet asexual en seksuele bloed stadia en muggen stadia

We hebben een eenvoudig en veelzijdig systeem harde teken waardplanten laboratorium konijnen ontwikkeld. Ons niet-moeizame protocol gebruikt gemakkelijk toegankelijke materialen en kan worden aangepast afhankelijk van de vereisten van de verschillende experimentele instellingen. De methode kunt comfortabel toezicht en/of bemonstering van teken tijdens de gehele periode van de voeding.

Een veelzijdig Model van harde teek besmetting op laboratorium konijnen

Dit protocol voert een methode van verandering van de kooi voor ratten via clickertraining. Ratten leren het gewenste gedrag niet alleen door directe opleiding, maar ook door observationele leren. De uitvoering van dit protocol snel en gemakkelijk kan helpen om welzijn en hygiëne in knaagdier faciliteiten te verbeteren.

Met behulp van Clicker Training en sociale waarneming te leren ratten vrijwillig overstappen kooien

Fijne naald aspiratie is een techniek, waarbij cellen worden verkregen uit een laesie of orgaan met behulp van een dunne naald. Aspirated materiaal is besmeurd, gekleurd en onderzocht onder een Microscoop voor diagnose of gebruikt voor moleculaire biologie, cytometrie of in vitro analyse. Het is goedkope, eenvoudig, snel en veroorzaakt een minimaal trauma.

Detectie van Extravasculaire Trypanosoma -parasieten door fijne naald aspiratie

Strongyloides ratti is een parasitaire nematode die voorbijgaande infecties veroorzaakt bij laboratoriummuizen, die weefselmigrerende en darmlevensstadia vertonen. Hier presenteren we een protocol voor het in stand houden van de parasietcyclus bij ratten en experimentele infectie van muizen, inclusief kwantificering van parasieten in het hoofd, de longen en de darmen.

Experimentele infectie van muizen met de parasitaire nematode Strongyloides ratti

Hier beschrijven we de orthotope rat achterste ledematen transplantatie procedure, die lijkt te zijn de gouden...

Orthotope Hind-Limb Transplantatie bij ratten

Leer diagnostische methoden voor ecto- en endoparasieten bij laboratoriumratten en muizen. Deze technieken omvatten onderzoek van vacht, feces en darminhoud om de gezondheid van dierkolonies te waarborgen.

Diagnose van Ecto-en endoparasieten bij laboratoriumratten en muizen

Meer video's verkennen