Name: Produção e Detecção de Espécies Reativas de Oxigênio (ROS) em Câncer (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-11-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 17 s
Description: Aprenda a detectar espécies reativas de oxigênio em culturas celulares usando corantes fluorescentes, ensaios colorimétricos e luminiscentes. Estes métodos permitem avaliar o estresse oxidativo e o estado redox celular.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Este trabalho foi financiado pelo National Institutes of Health (CA142664).

1. Detecção de ROS usando carboxi-H 2 DCFDA Carboxi-H 2 DCFDA não é fluorescente, mas na presença de ROS, quando este reagente é oxidado, torna-se verde fluorescente. <ol><li> Imediatamente antes da utilização, prepare uma solução estoque fresca de DCFDA 2 carboxi-H em dimetilsulfóxido estéril (DMSO) ou etanol 100%. Evite descongelar múltiplos / congelar os ciclos de sua tintura. </li><li> Lavar as células com tampão HEPES solução de sal (HBSS) ou tampão fosfato (PBS) para remover os vestígios do meio original. </li><li> Carregar as células com o corante (dye eo controle, cf seção de nota). Neste ensaio usamos Jurkat, uma linha de células humanas de leucemia. Use carboxi-H 2 DCFDA em uma concentração final de 1 Hm em meio de cultura com soro normal reduzida (2%). </li><li> Incubar as culturas por 30 minutos no escuro, em uma incubadora convencional (37 ° C, 5% de CO2). Descartar todas as soluções de corante não utilizados. </li><li> Remover carboxi-H 2 DCFDA contendo meio e lavar duas vezes com HBSS ou PBS. A partir deste passo em frente, proteger as células da luz. </li><li> Adicione meio fresco contendo sua droga de escolha para o carboxi-H 2 DCFDA células-carregados e incubar conforme desejado. Para este exemplo, usamos H 2 O 2 (0,03%) por 1 hora. </li><li> Avaliar ROS por analisar imediatamente suas células por citometria de fluxo através do canal de FL1 (fluorescência verde), ou pelo leitor de placas de fluorescência, ou por microscopia de fluorescência. A fluorescência pode ser detectada por meio de excitação e emissão comprimentos de onda que são apropriadas para fluorescência verde. </li></ol> Nota: Os controlos devem incluir carboxi-H 2 DCFDA-carregado células não tratadas e imaculada células não tratadas. Carboxi-H 2 DCFDA é conhecido por detectar peróxidos mas também pode ser oxidado pelo ROS outros. Este reagente também pode ser modificado por outros meios, a oxidação de corante controle insensível como a 5 - (e-6)-carboxi-2 ', 7'-dichlorofluorescein diacetato (carboxi-DCFDA) deve ser incluído no teste. 2. Medição da produção de óxido nítrico (NO) Você vai precisar de sulfanilamida e N-1-napthylethylenediamine dicloridrato (NED) soluções e padrão de nitrito. Este ensaio é chamado de ensaio de Griess. NED solução: faça uma solução de 0,1% do N-1-napthylethylenediamine dicloridrato diluída em solução estéril water.Sulfanilamide: Faça uma solução de 1% sulfanilamida diluídos em ácido fosfórico 5%. Padrão de nitrito: Diluir o padrão de nitrito de sódio 0,1 M de ações para 100μM em meio estéril, fazer uma diluição em série no mesmo meio. Condições de armazenamento: Loja de produtos químicos, conforme indicado pelo fabricante à temperatura ambiente. Quando reconstituído, NED e soluções Sulfanilamida são armazenados imediatamente após o uso, a 4 ° C, no escuro, e por um máximo de 3 meses. <ol><li> Cultura de células em um prato de 96 poços,use triplicatas para cada condição, e incluem controles adequados de acordo com suas experiências. </li><li> Tratar células para induzir a produção de NO. Em nosso experimento utilizamos lipopolissacarídeo (LPS) (100 ng / ml) e IL-4 recombinante para o tratamento de nossas células. Neste protocolo, foram utilizados 264,7 RAW, um rato linha de células de macrófagos (Mouse linhagem de células leucêmicas monócitos macrófagos). </li><li> No dia do ensaio, colocar ambos os reagentes à temperatura ambiente. </li><li> Girar seu prato, colher sobrenadantes de células e transferência 50μl para uma placa de 96 novas também. Prepare limitando poços de diluição da solução estoque padrão para fazer uma curva padrão. </li><li> Adicionar 50μl de solução de sulfanilamida a cada amostra e controle bem e misture bem. </li><li> Incubar à temperatura ambiente por 10 minutos no escuro. </li><li> Adicionar 50μl de N-1 napthylethylenediamine solução de dicloridrato de cada amostra e controle bem e misture bem. </li><li> Incubar à temperatura ambiente por 10 minutos no escuro. </li><li> Medida absorbance imediatamente, usando um leitor de placas com filtro de comprimentos de onda entre 520nm e 550nm. </li></ol> Se você utilizar diferentes placa / prato tamanhos, use 1/1/1 volume para cada solução e sobrenadante da amostra. A cor violeta vai aparecer nos poços positivos. Resultados obtidos com o padrão irá ajudá-lo a verificar a estabilidade de suas soluções. 3. Detecção de ROS ação: proteínas oxidadas Um método diferente para identificar a produção de ROS é olhar para os resultados finais, detectando a oxidação de proteínas. De fato, ROS modificar glutationa, um antioxidante que é expresso na maioria das células e desempenha um papel protetor contra ROS. Após a oxidação por ROS, modificação da glutationa reduzida (GSH) os resultados do grupo (tiol) sulfidrila de sua cisteína estar ligada a uma segunda glutationa através de uma ponte dissulfeto. Isso leva à formação de uma proteína dimerizada (GSSG proteína oxidada). GSH pode ser restaurada através de modificação de GSSG pela glutationa reductase da enzima. O aumento da relação GSSG / GSH reflete o estresse oxidativo. O ensaio a seguir é baseado na detecção e quantificação destas proteínas oxidadas. Este método não é seletivo para ROS específicos, mas sim detectar os efeitos do NO, H 2 O 2, O 2 - e outras ROS. Aqui medimos a quantidade total de oxidada (GSSG) e reduzida (GSH) a glutationa usando sinais bioluminescente. <ol><li> Semente de suas células em uma placa de 96 poços (branco / transparente, fundo plano), como de costume. Para nosso experimento, foi utilizado 1x10 4 células por poço de aderentes Raw 264,7 e A549 e células Jurkat suspensão. Dependendo do tamanho de suas células, estes números podem ser ajustados. Recomendamos para as células placa aderente um dia antes do teste para permitir que eles atribuem ao prato. Suficiente poços devem estar preparados para a detecção da proteína oxidada e reduzida, bem como para "apenas médio" ecélulas não tratadas como controle. Use triplicatas para todas as condições. </li><li> Tratar as células com o seu medicamento para o tempo necessário. Aqui nós tratamos as células Jurkat e células A549 por 1h com H 2 O 2 (a 5mM e 2,5 mm, respectivamente). Raw 264,7 células foram tratadas com 200ng/ml de LPS por 16 h. Durante este tempo de incubação, trazer todos os seus reagentes à temperatura ambiente (RT). Faça todos os reagentes não mais que 30 minutos antes de realizar o teste. A tabela abaixo mostra os volumes de reagentes por poço. Quando possível, é importante para remover a mídia que contém o agente redutor antes de prosseguir com o teste. </li></ol><table border="1"><tbody><tr><td rowspan="2"></td><td colspan="2"> Células aderentes </td><td colspan="2"> Células em suspensão </td></tr><tr><td> Lise Glu totais </td><td> Oxidado Lise Glu </td><td> Lise Glu totais </td><td> Oxidado Lise Glu </td></tr><tr><td> NEM, 25mm </td><td> nenhum </td><td> 0.5μl </td><td> nenhum </td><td> 0.5μl </td></tr><tr><td> Luciferina-NT </td><td> 1 ml </td><td> 1 ml </td><td> 1 ml </td><td> 1 ml </td></tr><tr><td> Tampão de Lise passiva, 5X </td><td> 10μl </td><td> 10μl </td><td> 10μl </td><td> 10μl </td></tr><tr><td> Água destilada </td><td> 39.0μl </td><td> 38.5μl </td><td> 14μl </td><td> 13.5μl </td></tr><tr><td> Volume final por poço </td><td> 50μl </td><td> 50μl </td><td> 25μl </td><td> 25μl </td></tr></tbody></table><ol start="3"><li> Remova o meio de poços com células aderentes. Não remova o meio de poços com células em suspensão. </li><li> Adicionar reagente de lise glutationa reduzida ou reagente de lise glutationa oxidada correspondentes aos poços e agitar por 5 minutos em temperatura ambiente. </li><li> Adicionar o reagente geração luciferina e incubate por 30 minutos em temperatura ambiente. </li><li> Adicione o reagente de detecção Luciferina e incubar por 15 minutos em temperatura ambiente. </li><li> Leia o sinal bioluminescente no tempo de integração de 0,25-1 segundo por bem utilizar um leitor de placas luminômetro. </li></ol><table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Células aderentes </td><td> Células em suspensão </td></tr><tr><td> Número de células por poço </td><td> 1x10 4 </td><td> 1x10 4 </td></tr><tr><td> Suspensão celular por drogas + bem </td><td> 100 l, para ser removido antes de 3,4 </td><td> 25μl, para não ser removido </td></tr><tr><td> Reagente de Lise glutationa reduzida </td><td> 50 ul </td><td> 25μl </td></tr><tr><td> Reagente de Lise Glutationa oxidada </td><td> 50 ul </td><td> 25μl </td></tr><tr><td> Luciferina Reagente Generation </td><td> 50 ul </td><td> 50 ul </td></tr><tr><td> Luciferina Reagente de Detecção </td><td> 100 l </td><td> 100 l </td></tr></tbody></table> 4. Resultados representativos: <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/3357/3357fig1.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Detecção figura 1 do ROS usando carboxi-H2DCFDA corante. Células Jurkat (linhagem de células humanas de leucemia) tratados com H 2 O 2 foram comparados com os não tratados células. ROS induz a modificação de DCFDA 2 carboxi-H que fluoresce verde como detectada por citometria de fluxo, o pico fluorescentes em H 2 O 2 células tratadas mudança em comparação com os picos nos controles (H 2 O 2 células tratadas marcadas com corante de oxidação insensível e não tratados com células coradas com DCFDA 2 carboxi-H). Resultados confirmam a presença de ROS em células tratadas. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/3357/3357fig2.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2 Detecção de of NO utilizando reagentes Griess. RAW 264,7 células (mouse macrófagos) foram tratados com LPS e IL-4. Um aumento significativo na produção de NO foi detectada em células tratadas em relação ao controle de células não tratadas. <table border="1"><tbody><tr><td> Linhagens de células </td><td> Não tratados </td><td> Tratado </td></tr><tr><td> Raw 264,7 </td><td> 13,0 </td><td> 8,3 </td></tr><tr><td> A549 </td><td> 21,6 </td><td> 10,5 </td></tr><tr><td> Jurkat </td><td> 5,2 </td><td> 2,8 </td></tr></tbody></table> Detecção tabela 1 de ROS mediada oxidação de proteínas. RAW 264,7 células foram tratadas com LPS, Jurkat e A549 (câncer de pulmão humano), as células foram tratadas com H 2 O 2. Os resultados são expressos como a razão reduzida (GSH) / oxidada (GSSG) glutationa. Rácios mais baixos de glutationa (GSH) / (GSSG) foram detectados em células tratadas em comparação comcontrole de células não tratadas, revelando que as proteínas foram mais oxidado em células tratadas.

<ol><li>Guzik, T. J., Korbut, R., Adamek-Guzik, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitric+oxide+and+superoxide+in+inflammation+and+immune+regulation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Nitric oxide and superoxide in inflammation and immune regulation.</a> J Physiol Pharmacol. 54, 469-487 (2003).</li>
<li>Perl, A., Gergely, P., Banki, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitochondrial+dysfunction+in+T+cells+of+patients+with+systemic+lupus+erythematosus%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Mitochondrial dysfunction in T cells of patients with systemic lupus erythematosus.</a> Int Rev Immunol. 23, 293-313 (2004).</li>
<li>Valko, M., Leibfritz, D., Moncol, J., Cronin, M. T., Mazur, M., Telser, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Free+radicals+and+antioxidants+in+normal+physiological+functions+and+human+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biochem+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Free radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease.</a> Int J Biochem Cell Biol. 39, 44-84 (2007).</li>
<li>Droge, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Free+radicals+in+the+physiological+control+of+cell+function%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Free radicals in the physiological control of cell function.</a> Physiol Rev. 82, 47-95 (2002).</li>
<li>Nakamura, K., Yube, K., Miyatake, A., Cambier, J. C., Hirashima, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Involvement+of+CD4+D3-D4+membrane+proximal+extracellular+domain+for+the+inhibitory+effect+of+oxidative+stress+on+activation-induced+CD4+down-regulation+and+its+possible+role+for+T+cell+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Immunol%22%5BJournal%5D)">Involvement of CD4 D3-D4 membrane proximal extracellular domain for the inhibitory effect of oxidative stress on activation-induced CD4 down-regulation and its possible role for T cell activation.</a> Mol Immunol. 39, 909-921 (2003).</li>
<li>Los, M., Droge, W., Stricker, K., Baeuerle, P. A., Schulze-Osthoff, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogen+peroxide+as+a+potent+activator+of+T+lymphocyte+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Hydrogen peroxide as a potent activator of T lymphocyte functions.</a> Eur J Immunol. 25, 159-165 (1995).</li>
<li>Deem, T. L., Cook-Mills, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+cell+adhesion+molecule+1+%28VCAM-1%29+activation+of+endothelial+cell+matrix+metalloproteinases%3A+role+of+reactive+oxygen+species%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Vascular cell adhesion molecule 1 (VCAM-1) activation of endothelial cell matrix metalloproteinases: role of reactive oxygen species.</a> Blood. 104, 2385-2393 (2004).</li>
<li>Pacher, P., Beckman, J. S., Liaudet, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nitric+oxide+and+peroxynitrite+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Nitric oxide and peroxynitrite in health and disease.</a> Physiol Rev. 87, 315-424 (2007).</li>
<li>Griendling, K. K., Sorescu, D., Lassegue, B., Ushio-Fukai, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+protein+kinase+activity+and+gene+expression+by+reactive+oxygen+species+and+their+role+in+vascular+physiology+and+pathophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22Arterioscler+Thromb+Vasc+Biol%22%5BJournal%5D)">Modulation of protein kinase activity and gene expression by reactive oxygen species and their role in vascular physiology and pathophysiology.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 20, 2175-2183 (2000).</li>
<li>Loh, K., Deng, H., Fukushima, A., Cai, X., Boivin, B., Galic, S., Bruce, C., Shields, B. J., Skiba, B., Ooms, L. M., Stepto, N., Wu, B., Mitchell, C. A., Tonks, N. K., Watt, M. J., Febbraio, M. A., Crack, P. J., Andrikopoulos, S., Tiganis, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reactive+oxygen+species+enhance+insulin+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Metab%22%5BJournal%5D)">Reactive oxygen species enhance insulin sensitivity.</a> Cell Metab. 10, 260-272 (2009).</li>
<li>Goldstein, B. J., Mahadev, K., Wu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Redox+paradox%3A+insulin+action+is+facilitated+by+insulin-stimulated+reactive+oxygen+species+with+multiple+potential+signaling+targets%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Redox paradox: insulin action is facilitated by insulin-stimulated reactive oxygen species with multiple potential signaling targets.</a> Diabetes. 54, 311-321 (2005).</li>
</ol>

Recebemos o apoio da Promega para esta publicação.

Várias situações patológicas como doenças inflamatórias, câncer, isquemia / reperfusão, e também tratamentos como a radioterapia ou quimioterapia (cisplatina ou seja) induzem a superprodução de ROS. Assim, a detecção e medição dos níveis de ROS é importante em muitos básica, estudos pré-clínicos e clínicos. No entanto, ROS têm semi-vidas muito curtas e pode ser complicado de detectar. Aqui, propomos testes simples que são usados ​​rotineiramente e amplamente aceites para a detecção de produção de radicais livres em célu...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nome do reagente </th><th> Companhia </th><th> Número de catálogo </th><th> Comments (opcional) </th></tr><tr><td> 5 - (e-6)-carboxi-2 &#39;, 7&#39;-diacetato diclorofluoresceína (carboxi-DCFDA) </td><td> Sondas moleculares </td><td> C369 </td><td> controle </td></tr><tr><td> carboxi-H 2 DCFDA </td><td> Sondas moleculares </td><td> C400 </td><td></td></tr><tr><td> Sulfanilamida </td><td> Sigma </td><td> S9251-100G </td><td></td></tr><tr><td> N-1-napthylethylenediamine dicloridrato </td><td> Sigma </td><td> N9125-10G </td><td></td></tr><tr><td> Padrão de nitrito </td><td> Sigma </td><td> 237213-100G </td><td></td></tr><tr><td> GSH / GSSG-Glo Assay </td><td> Promega </td><td> V6612 </td><td> Para quantificar oxidado, reduzido ou oxidado / glutationa reduzida </td></tr></tbody>
</table>

produção e detecção de espécies reativas de oxigênio (ros) em câncer

Production and Detection of Reactive Oxygen Species (ROS) in Cancers

Espécies reativas de oxigênio incluir um número de moléculas que danificam o DNA e RNA e oxidar proteínas e lipídios (peroxydation lipídica). Estas moléculas reativas de oxigênio contêm um e incluem H 2 O 2 (peróxido de hidrogênio), NO (óxido nítrico), O 2 - (ânion óxido), peroxinitrito (ONOO -), ácido hydrochlorous (HOCl) e radical hidroxila (OH -) . Espécies oxidativas são produzidos não apenas em situações patológicas (câncer, reperfusão isquêmica /, patologias neurológicas e cardiovasculares, doenças infecciosas, doenças inflamatórias 1, doenças auto-imunes 2, etc ...), mas também em situações fisiológicas (não patológicas), tais como o metabolismo celular 3 , 4. De fato, ROS desempenham um papel importante em muitas vias de sinalização celular (proliferação, ativação de células 5, 6, 7 migração etc.). ROS pode ser prejudicial (então é referido como&quot;Stress oxidativo e nitrosativo&quot;) quando produzida em quantidades elevadas nos compartimentos intracelulares e células geralmente respondem a ROS por upregulating antioxidantes como a superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT), glutationa peroxidase (GPx) e glutationa (GSH), que protege convertendo-los perigosos radicais livres em moléculas inofensivas (água, por exemplo). Vitaminas C e E também têm sido descritos como scavengers ROS (antioxidantes). Os radicais livres são benéficos em pequenas quantidades 3. Macrófagos e neutrófilos mediada por resposta imune envolvem a produção e liberação de NO, que inibe vírus, patógenos e da proliferação do tumor 8. NO também reage com ROS outros e, assim, também tem um papel como um desintoxicante (scavenger ROS). Finalmente NO age em navios para regular o fluxo de sangue que é importante para a adaptação do músculo ao exercício prolongado 9, 10. Várias publicações têm demonstrado também que ROS estão envolvidas na sens insulinaitivity 11, 12. Vários métodos para avaliar a produção de ROS estão disponíveis. Neste artigo, propomos vários ensaios simples, rápido e acessível, estes ensaios têm sido validados por muitas publicações e são usados ​​rotineiramente para detectar ROS ou dos seus efeitos em células de mamíferos. Embora alguns desses ensaios detectar múltiplas ROS, outros detectam apenas um único ROS.

Aqui nós propor métodos simples para testar e avaliar a presença de espécies reativas de oxigênio nas células.

Produção e Detecção de Espécies Reativas de Oxigênio (ROS) em Câncer

As espécies reativas de oxigênio incluem diversas moléculas que danificam o DNA e o RNA e oxidam proteínas e lipídios (peroxidação lipídica). Essas reativas...

O objetivo deste experimento é detectar a presença de espécies reativas de oxigênio em culturas celulares. Isso é realizado primeiramente detectando as espécies reativas de oxigênio com o uso de um corante fluorescente. Em seguida, os níveis de óxido nítrico nas células são medidos utilizando um ensaio colorimétrico.Por fim, o efeito das espécies reativas de oxigênio é determinado pela detecção da redução ou oxidação da glutationa utilizando um ensaio luminométrico. Meu nome é Danu. Sou pesquisador no laboratório de Patrizia Yoda, e vou demonstrar este procedimento.O carboxi H₂DCFDA é não fluorescente, mas na presença de espécies reativas de oxigênio, este reagente é oxidado e fluoresce imediatamente com cor verde antes do uso. Prepare uma solução estoque fresca de carboxi H₂DCFDA em DMSO estéril ou etanol 100%. Lave as células com solução salina tamponada com HEPES ou solução salina tamponada com fosfato para remover vestígios do meio original.Neste ensaio, utilizamos a linhagem celular de leucemia humana jerk cat. Após centrifugação, descarte o sobrenadante e sobrecarregue as células com o corante em uma concentração final de um micromolar em meio de cultura comum com soro reduzi

production-and-detection-of-reactive-oxygen-species-ros-in-cancers

Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Este vídeo descreve o protocolo para detecção de espécies reativas de oxigênio (ROS) celulares totais usando diacetato de 2',7'-diclorodihidrofluoresceína (DCFH-DA). Este método ajuda a visualizar a localização de ROS nas células aderentes usando um microscópio de fluorescência e quantificar ainda mais a intensidade de ROS com um leitor de placa de fluorescência.

Detecção de ROS com coloração DCFH-DA: Medindo ROS totais em linhagens de células de câncer colorretal

ROS intracelular foi mostrado para jogar um papel importante na indução da senescência celular. Aqui, descrevemos um ensaio sensível para quantificação dos níveis ROS durante a senescência celular. Nós também fornecemos protocolos para avaliar o fenótipo secretor associada a senescência, que alegadamente contribui para várias desordens relacionadas com a idade.

Uma medida quantitativa de espécies reativas de oxigênio e senescência-associado fenótipo secretor em fibroblastos humanos normais durante a senescência induzida pelo Oncogene

Descrevemos um não-invasivo na vivo de imagem protocolo que é simplificada e custo-benefício, utilizando o L-012, um analógico-luminol quimioluminescente, para visualizar e quantificar as espécies reativas de oxigênio (ROS) geradas em um modelo do rato excisional ferido.

Na Vivo Imagens de espécies reativas de oxigênio em um Murine ferida modelo

Este estudo demonstra o uso da citometria de fluxo para detectar a produção de (ROS) de espécies reativas de oxigênio resultantes da ativação do FcγR. Esse método pode ser usado para avaliar as mudanças no antimicrobial e redox função dos fagócitos em resposta aos complexos imunes, opsonized microorganismos ou direto FcγR cross-linking de sinalização.

Fluxo Cytometric medição da produção de ROS em macrófagos em resposta a FcγR cross-linking

Nós descrevemos um método para usar a citometria do fluxo do multiparâmetro para detectar a espécie reactiva mitochondrial do oxigênio (ROS) em pilhas hematopoietic saudáveis murino da haste e do progenitor (hspcs) e nas pilhas da leucemia de um modelo do rato da leucemia Myeloid aguda (AML) conduzida por MLL-AF9.

Análise Citométrica de fluxo de espécies reativas de oxigênio mitocondrial em células tronco e progenitoras hematopoiéticas Murinas e leucemia acionada por MLL-AF9

Aqui, apresentamos um protocolo para detectar espécies totais de oxigênio reativa celular (ROS) usando diacetato de 2',7'-diclorodihifluoresceína (DCFH-DA). Este método pode visualizar a localização ros celular em células aderentes com um microscópio de fluorescência e quantificar a intensidade ros com um leitor de placas de fluorescência. Este protocolo é simples, eficiente e econômico.

Detecção de Espécies totais de oxigênio reativo em células aderentes por 2',7'-Dichlorodihydrofluorescein Diacetate Staining

O objetivo deste protocolo é induzir a produção transitória in vivo de níveis não letais de espécies reativas de oxigênio (EROs) na pele de camundongos, promovendo ainda mais respostas fisiológicas no tecido.

Estimulação de nichos de células-tronco e regeneração tecidual em pele de camundongo por fotogeração dependente de protoporfirina IX comutável de espécies reativas de oxigênio in situ

Aqui, propomos um protocolo sistematizado, acessível e reprodutível para detectar espécies de oxigênio reativa celular (ROS) usando uma sonda diacetato de 2′,7′-diclorofluoresceína (DCFH-DA) em células gliais Müller (MGCs). Este método quantifica os níveis ros celulares totais com um citómetro de fluxo. Este protocolo é muito fácil de usar, adequado e reprodutível.

Quantificação de espécies reativas de oxigênio usando 2′,7′-Sonda diacetato de diclorofluoresceína e flução-citometria em células gliais Müller

Aqui, descrevemos um método para a detecção em tempo real da produção de espécies reativas de oxigênio (EROs) apoplásicas em tecidos de arroz em resposta imune desencadeada por padrão molecular associado a patógenos. Este método é simples, padronizado e gera resultados altamente reprodutíveis em condições controladas.

Detecção em Tempo Real da Produção de Espécies Reativas de Oxigênio na Resposta Imune em Arroz com Ensaio de Quimioluminescência

Este protocolo descreve um novo método para quantificar espécies reativas de oxigênio (ROS) intracelulares usando diidroetídio (DHE) como sonda de fluorescência usando uma abordagem de triagem de alto rendimento. O protocolo descreve os métodos para avaliação quantitativa das espécies reativas de oxigênio (EROs) intracelulares nas três diferentes linhagens celulares de carcinoma hepatocelular.

Avaliação de triagem de alto rendimento da geração de espécies reativas de oxigênio (ROS) usando corante de fluorescência Dihidroetídio (DHE)

Aprenda a detectar espécies reativas de oxigênio em culturas celulares usando corantes fluorescentes, ensaios colorimétricos e luminiscentes. Estes métodos permitem avaliar o estresse oxidativo e o estado redox celular.

Produção e Detecção de Espécies Reativas de Oxigênio (ROS) em Câncer

Explorar mais vídeos