Name: No invasiva imágenes ópticas de la vasculatura linfática de un ratón (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-03-08T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 52 s
Description: Aprende a visualizar vasos linfáticos en animales pequeños mediante imagen no invasiva con fluorescencia en infrarrojo cercano. Este protocolo utiliza inyección intradérmica de un tinte fluorescente para estudiar la arquitectura y función del sistema linfático en investigación biomédica.

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Este trabajo fue apoyado por las siguientes subvenciones: a Eva Sevick NIH R01 CA128919 y NIH R01 HL092923.

Todos los estudios con animales se realizaron de conformidad con las normas de la Universidad de Texas Health Science Center (Houston, TX), Departamento de Medicina Comparada, y el Centro de Imagen Molecular después de la revisión y aprobación del protocolo por el cuidado de su respectivo Animales institucional y el empleo Comisión (IACUC) o Animal Welfare Committee (AWC). 1. Preparación de los animales 24 horas antes de la Radiología Los siguientes pasos se debe hacer (si es necesario) el día antes de exponer linfático lleva a cabo. <ol><li> Lugar animal en una caja de inducción con isoflurano y sosegado. </li><li> Una vez que el animal se encuentra en un estado de anestesia profunda (monitorizado con la maniobra de dedo del pie-pinch), animal sedado lugar en un cojín de pañal / pelusa y la nariz posición en un cono nasal conectada a gas isoflurano. </li><li> Clip todo el pelo / piel (si los hay) alrededor de la zona a explorar. </li><li> Aplicar agente depilatorio (Nair) a la zona rasurada y se deja on de la piel para un máximo de 3 minutos. </li><li> Suavemente limpie todo agente depilatorio con una gasa húmeda y caliente o una toalla de papel. </li><li> Lave suavemente la piel con agua tibia y seque suavemente el área con una gasa o toalla de papel. </li><li> Deje que los animales puedan recuperarse en una almohadilla eléctrica o bajo una lámpara de calor, y volver a su jaula. </li></ol> 2. Día de Imágenes <ol><li> Agente de formación de imágenes reconstituir con agua estéril, luego se diluye con estéril, normal (0,85%) de solución salina para alcanzar 645 mM (5 g/10 l) durante ICG o 200 mM (6,8 g/10 l) durante CABD-IRDye800. Mantener las soluciones en la oscuridad condiciones y uso dentro de las 6 horas de la reconstitución. </li><li> Lugar animal en una caja de inducción con isoflurano y sosegado. </li><li> Una vez que el animal se encuentra en un estado de anestesia profunda (controlado con la maniobra de punta-pinch), animal sedado lugar de costado sobre una plataforma de pañales / pelusa y la nariz posición en un cono de nariz conectada a gas isoflurano. </li><li> Apague las luces (por lo que la habitación esoscuro). Si es necesario, una luz de escritorio halógeno pequeña se puede utilizar para una pequeña cantidad de luz para ver inyecciones. </li><li> Usando una jeringa de insulina con una aguja de calibre 31-, inyectar ID 5 l a 50 l de ICG o CABD IRDye800-en la cara dorsal de cada pata trasera y / o en el lado izquierdo y derecho de la base de la cola, dependiendo el área de interés (véase la discusión). Cada dosis inyectada puede variar desde 0,083 hasta 1,25 mg / kg (ICG) o 0.113 a 1.7 mg / kg (CABD-IRDye800). Los volúmenes de inyección puede variar con la cepa animal y sitio de la inyección. Para los ratones atímicos, el volumen de inyección puede ser de 5 l (pata trasera) o 10 l (base de la cola). Si el animal no está en el sistema de formación de imágenes para la inyección (s), colocar al animal en el sistema de imágenes inmediatamente después de la inyección (s). </li><li> Si no se observa absorción de colorante en los vasos linfáticos, paso 2,5 tendrá que repetirse según sea necesario de acuerdo al protocolo de animales. </li><li> Una vez que se observan vasos linfáticos, cubra el sitio de la inyección con cinta eléctrico negro o negro paper. </li><li> Adquirir imágenes linfáticos de hasta 1 hora con V + software + y un animal pequeño, NIRF sistema de imágenes. (Los animales son sedados con isoflurano y las respiraciones se supervisan mientras que las imágenes están adquiriendo.) Mientras animal pequeño, generadores de imágenes NIRF están comercialmente disponibles, utilizamos un servicio personalizado, pequeños animales NIRF sistema de imagen que consiste en un diodo láser 785-nm (1005-9mm-78503 , intenso, North Brunswick, NJ) equipado con una lente asférica (C24TME-B, Thorlabs, Newton, NJ), difusor (ED1-C20, Thorlabs) y filtro (LD01-785/10-25, Semrock, Rochester, NY ) para crear un campo de excitación uniforme que ilumina el animal en una tasa de fluencia incidente de menos de 1,4 mW por centímetro cuadrado 10. Un electrón multiplicando dispositivo de carga acoplada (EMCCD, PhotonMax512, Princeton Instruments, Trenton, NJ) sistema de cámara con dos 830-nm filtros (AND11333, Andover Corp., Salem, NH) y una lente de 28-mm Nikkor (1992, Nikon, Melville, NY) se utiliza para capturar imágenes linfáticos con integración times de 200 ms para imágenes dinámicas y estáticas ms 800 para imágenes 5. Véase la figura 1 para la configuración del sistema, la tabla para obtener más detalles de cada componente, y el debate para una breve discusión de las propiedades imager clave. </li><li> Deje que los animales puedan recuperarse en una almohadilla eléctrica o bajo una lámpara de calor y volver a su jaula, o la eutanasia. </li><li> Analizar imágenes utilizando ImageJ o software MATLAB. Véase la Figura 6. </li></ol>

<ol><li>Alitalo, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+lymphatic+vasculature+in+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">The lymphatic vasculature in disease.</a> Nat. Med. 17, 1371-1380 (2011).</li>
<li>Rasmussen, J. C., Tan, I. C., Marshall, M. V., Fife, C. E., Sevick-Muraca, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lymphatic+imaging+in+humans+with+near-infrared+fluorescence%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Lymphatic imaging in humans with near-infrared fluorescence.</a> Curr. Opin. Biotechnol. 20, 74-82 (2009).</li>
<li>Rasmussen, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Lymphatic+Architecture+and+Dynamic+Transport+Imaged+Using+Near-infrared+Fluorescence%5BTitle%5D)+AND+%22Transl.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Human Lymphatic Architecture and Dynamic Transport Imaged Using Near-infrared Fluorescence.</a> Transl. Oncol. 3, 362-372 (2010).</li>
<li>Sevick-Muraca, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translation+of+near-infrared+fluorescence+imaging+technologies%3A+emerging+clinical+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Med%22%5BJournal%5D)">Translation of near-infrared fluorescence imaging technologies: emerging clinical applications.</a> Annu. Rev. Med. 63, 217-231 (2012).</li>
<li>Kwon, S., Sevick-Muraca, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+quantitative+imaging+of+lymph+function+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Lymphat.+Res.+Biol%22%5BJournal%5D)">Noninvasive quantitative imaging of lymph function in mice.</a> Lymphat. Res. Biol. 5, 219-231 (2007).</li>
<li>Kwon, S., Sevick-Muraca, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+phenotyping+with+near-infrared+fluorescence+lymphatic+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed+Opt+Express%22%5BJournal%5D)">Mouse phenotyping with near-infrared fluorescence lymphatic imaging.</a> Biomed Opt Express. 2, 1403-1411 (2011).</li>
<li>Marshall, M. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near-infrared+fluorescence+imaging+in+humans+with+indocyanine+green%3A+a+review+and+update%5BTitle%5D)+AND+%22The+Open+Surgical+Oncology+Journal%22%5BJournal%5D)">Near-infrared fluorescence imaging in humans with indocyanine green: a review and update.</a> The Open Surgical Oncology Journal. 2, 12-25 (2010).</li>
<li>Davies-Venn, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Albumin-Binding+Domain+Conjugate+for+Near-Infrared+Fluorescence+Lymphatic+Imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Imaging+Biol%22%5BJournal%5D)">Albumin-Binding Domain Conjugate for Near-Infrared Fluorescence Lymphatic Imaging.</a> Mol. Imaging Biol. , (2011).</li>
<li>Sharma, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+imaging+of+lymph+function%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Quantitative imaging of lymph function.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 292, 3109-3118 (2007).</li>
<li>Kwon, S., Sevick-Muraca, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+lymphatic+imaging+in+tumor-bearing+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Functional lymphatic imaging in tumor-bearing mice.</a> J. Immunol. Methods. 360, 167-172 (2010).</li>
<li>Karlsen, T. V., McCormack, E., Mujic, M., Tenstad, O., Wiig, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimally+invasive+quantification+of+lymph+flow+in+mice+and+rats+by+imaging+depot+clearance+of+near-infrared+albumin%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Minimally invasive quantification of lymph flow in mice and rats by imaging depot clearance of near-infrared albumin.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 302, 391-401 (2012).</li>
<li>Zhou, Q., Wood, R., Schwarz, E. M., Wang, Y. J., Xing, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near-infrared+lymphatic+imaging+demonstrates+the+dynamics+of+lymph+flow+and+lymphangiogenesis+during+the+acute+versus+chronic+phases+of+arthritis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Near-infrared lymphatic imaging demonstrates the dynamics of lymph flow and lymphangiogenesis during the acute versus chronic phases of arthritis in mice.</a> Arthritis Rheum. 62, 1881-1889 (2010).</li>
<li>Adams, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+evidence+of+lymphatic+function+improvement+after+advanced+pneumatic+compression+device+treatment+of+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Biomed.+Opt.+Express%22%5BJournal%5D)">Direct evidence of lymphatic function improvement after advanced pneumatic compression device treatment of lymphedema.</a> Biomed. Opt. Express. 1, 114-125 (2010).</li>
<li>Tan, I. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+lymphatic+contractile+function+after+manual+lymphatic+drainage+using+near-infrared+fluorescence+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Phys.+Med.+Rehabil%22%5BJournal%5D)">Assessment of lymphatic contractile function after manual lymphatic drainage using near-infrared fluorescence imaging.</a> Arch. Phys. Med. Rehabil. 92, 756-764 (2011).</li>
<li>Lapinski, P. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RASA1+maintains+the+lymphatic+vasculature+in+a+quiescent+functional+state+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">RASA1 maintains the lymphatic vasculature in a quiescent functional state in mice.</a> J. Clin. Invest. 122, 733-747 (2012).</li>
<li>Maus, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near-infrared+fluorescence+imaging+of+lymphatics+in+head+and+neck+lymphedema%5BTitle%5D)+AND+%22Head+Neck%22%5BJournal%5D)">Near-infrared fluorescence imaging of lymphatics in head and neck lymphedema.</a> Head Neck. 34, 448-453 (2012).</li>
<li>Galanzha, E. I., Tuchin, V. V., Zharov, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+small+animal+mesentery+models+for+in+vivo+flow+cytometry%2C+dynamic+microscopy%2C+and+drug+screening%5BTitle%5D)+AND+%22World+J.+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Advances in small animal mesentery models for in vivo flow cytometry, dynamic microscopy, and drug screening.</a> World J. Gastroenterol. 13, 192-218 (2007).</li>
<li>Schramm, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cervical+lymph+node+preparation%3A+a+novel+approach+to+study+lymphocyte+homing+by+intravital+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Inflammation+research+%3A+official+journal+of+the+European+Histamine+Research+Society%22%5BJournal%5D)">The cervical lymph node preparation: a novel approach to study lymphocyte homing by intravital microscopy.</a> Inflammation research : official journal of the European Histamine Research Society. 55, 160-167 (2006).</li>
<li>Hall, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+prostate+cancer+lymph+node+metastases+with+a+multimodality+contrast+agent%5BTitle%5D)+AND+%22Prostate%22%5BJournal%5D)">Imaging prostate cancer lymph node metastases with a multimodality contrast agent.</a> Prostate. 72, 129-146 (2012).</li>
<li>Zhu, B., Sevick-Muraca, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimizing+excitation+leakage+and+maximizing+measurement+sensitivity+for+molecular+imaging+with+near-infrared+fluorescence%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Innovat.+Opt.+Health+Sci%22%5BJournal%5D)">Minimizing excitation leakage and maximizing measurement sensitivity for molecular imaging with near-infrared fluorescence.</a> J. Innovat. Opt. Health Sci. 4, 301-307 (2011).</li>
</ol>

Los autores no tienen nada que revelar, pero algunos autores se muestran en una patente.

Utilizamos una costumbre, un animal pequeño NIRF sistema de imagen para capturar imágenes de los vasos linfáticos marcadas en ratones. Para construir películas de movimiento linfático, 300 o más imágenes se recogen. Para el análisis funcional de los vasos linfáticos de las películas, dos o más regiones de interés son manualmente trazada a lo largo de un vaso linfático. Las dimensiones de las ROIs se mantienen constantes para cada buque y son aproximadamente el diámetro del vaso. Mientras que la resolución espacial de lo...

<table border="1"><tbody><tr><td> Soluciones, reactivos y equipo </td><td> Empresa </td><td> Número de Catálogo </td><td> Comentarios </td></tr><tr><td> Indocianina verde (ICG) </td><td> Patheon Italia SPA </td><td> NDC 25431-424-02 </td><td> Reconstituir a 645 mM (5 g/10 l) </td></tr><tr><td> Cíclica del dominio de unión de albúmina (CABD) </td><td> Bachem </td><td> Costumbre </td><td> Reconstituir a 200 micras (6,8 g/10 l) </td></tr><tr><td> IRDye800 </td><td> Li-COR </td><td> IRDye 800CW </td><td> Reconstituir de acuerdo con las instrucciones del fabricante; conjugar con CABD a concentraciones equilmolar </td></tr><tr><td> Agua estéril </td><td> Hospira, Inc., Lake Forest, IL </td><td> NDC 0409-4887-10 </td><td></td></tr><tr><td> NAIR </td><td> Church &amp; Dwight Co.,Inc. </td><td> Tiendas Locales </td><td> <a href="http://www.nairlikeneverbefore.com" target="_blank">www.nairlikeneverbefore.com</a> </td></tr><tr><td> Imaging System (componentes a continuación) </td><td> Centro de Imagen Molecular </td><td> N / A </td><td> Custom-construido en nuestros laboratorios. </td></tr><tr><td> Multiplicador de electrones dispositivo de carga acoplada (EMCCD) de la cámara </td><td> Princeton Instruments, Trenton, NJ </td><td> Photon Max 512 </td><td></td></tr><tr><td> Nikon lente de la cámara </td><td> Nikon Inc., Melville, NY </td><td> Modelo N º 1992, Nikkor 28mm </td><td></td></tr><tr><td> Filtro óptico </td><td> Andover Corp., Salem, NH </td><td> ANDV11333 </td><td> Dos filtros paso banda 830.0/10.0 nm se utilizan en la parte frontal del objetivo </td></tr><tr><td> 785-nm láser de diodo </td><td> Intenso Ltd, North Brunswick, NJ </td><td> 1005-9MM-78503 </td><td> 500 mW de salida óptica </td></tr&gt; <tr><td> Óptica de colimación </td><td> Thorlabs, Newton, NJ </td><td> C240TME-B </td><td> Colima salida del láser antes de filtro de limpieza </td></tr><tr><td> Clean-up filtro </td><td> Semrock, Inc., Rochester, NY </td><td> LD01-785/10-25 </td><td> Elimina emisión láser en la banda de fluorescencia </td></tr><tr><td> Difusor óptico </td><td> Thorlabs, Newton, NJ </td><td> ED1-C20 </td><td> Difunde el láser sobre el animal </td></tr><tr><td> V + + </td><td> Digital Óptica, Browns Bay, Auckland, Nueva Zelanda </td><td> Versión 5.0 </td><td> Software utilizado para controlar el sistema de cámara y guardar las imágenes a la computadora. <a href="http://digitaloptics.net/" target="_blank">http://digitaloptics.net/</a> </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Software analítico Cualquiera de los siguientes paquetes de software se puede utilizar para análisis de imagen </td></tr><tr><td> ImageJ </td><td> Instituto Nacional detutos de Salud, Bethesda, MD </td><td> Versión más reciente disponible </td><td> Programas de dominio público disponible en <a href="http://rsbweb.nih.gov/ij/" target="_blank">http://rsbweb.nih.gov/ij/</a> </td></tr><tr><td> MATLAB </td><td> MathWorks, Natick, MA </td><td> Versión 2008a o más tarde </td><td> <a href="http://www.mathworks.com/" target="_blank">http://www.mathworks.com/</a> </td></tr></tbody></table>

no invasiva imágenes ópticas de la vasculatura linfática de un ratón

Non-invasive Optical Imaging of the Lymphatic Vasculature of a Mouse

El sistema linfático vascular es un componente importante del sistema circulatorio que mantiene la homeostasis de fluidos, proporciona la vigilancia inmune, y media la absorción de grasas en el intestino. Sin embargo, a pesar de su función crítica, existe una comprensión relativamente poco de cómo funciona el sistema linfático se adapta a servir a estas funciones en la salud y la enfermedad 1. Recientemente, hemos demostrado la capacidad de la arquitectura dinámicamente imagen linfático y los ganglios &quot;bombeo&quot; acción en sujetos humanos normales, así como en las personas que padecen disfunción linfática mediante la administración de un rastro en el infrarrojo cercano fluorescente (NIRF) colorante y una costumbre, Gen III- intensificado sistema de imágenes 2-4. NIRF imágenes mostraron cambios dramáticos en la arquitectura linfático y la función con la enfermedad humana. Aún no está claro cómo se producen estos cambios y nuevos modelos animales se están desarrollando para dilucidar su base genética y molecular. En este protocolo, se presenta linfático NIRF, salameda animal de formación de imágenes utilizando 5,6 verde de indocianina (ICG), un colorante que se ha utilizado durante 50 años en los seres humanos 7, y un NIRF marcada con colorante cíclico dominio de unión de albúmina (CABD-IRDye800) péptido que se une preferentemente a la albúmina humana y de ratón 8 . Aproximadamente 5,5 veces más brillante que ICG, Abd-IRDye800 tiene un perfil linfático autorización similar y se puede inyectar en dosis más pequeñas de ICG para lograr suficientes señales NIRF para formación de imágenes 8. Debido a que ambos se unen CABD-IRDye800 ICG a la albúmina y en el espacio intersticial 8, ambas pueden representar el transporte de proteínas en activo y dentro de los vasos linfáticos. Intradérmica (ID) inyecciones (l 5-50) de ICG (645 mM) o CABD-IRDye800 (200 mM) en solución salina y se administra a la cara dorsal de cada pata trasera y / o el lado izquierdo y derecho de la base de la cola de un ratón isoflurano anestesia. La concentración de colorante resultante en el animal es 83-1,250 mg / kg de ICG o 113-1,700 mg / kg paraCABD-IRDye800. Inmediatamente después de las inyecciones, las imágenes linfático funcional se lleva a cabo durante un máximo de 1 h usando un personalizado, un animal pequeño NIRF sistema de formación de imágenes. Resolución espacial Whole animales pueden representar los vasos linfáticos fluorescentes de 100 micrones o menos, y las imágenes de las estructuras de hasta 3 cm de profundidad pueden ser adquiridos 9. Las imágenes se adquieren mediante V + software + y analizados mediante el software ImageJ o MATLAB. Durante el análisis, regiones consecutivas de interés (ROIs) que abarca todo el diámetro del recipiente se dibujan a lo largo de un vaso linfático dado. Las dimensiones de cada retorno de la inversión se mantienen constantes para un buque determinado y la intensidad NIRF se mide para cada ROI para evaluar cuantitativamente &quot;paquetes&quot; de linfa en movimiento a través de los vasos.

Ejemplo de imágenes NIRF linfático en ratones Cuando ICG o CABD IRDye800-ID se inyecta en la base de la cola de un ratón normal, el conjunto de vasos linfáticos entre el sitio de la inyección en la base de la cola y el ganglio linfático inguinal (LN) debe ser visualizado inmediatamente. Poco después de la inyección (unos pocos segundos a minutos), el vaso linfático entre el LN inguinal y el LN axilar debe ser visualizado como se ve en la Figura 2. Dado que los vasos linfáticos ...

Recientemente desarrollados utilizando técnicas de imagen de fluorescencia en el infrarrojo cercano (NIRF) puede ayudar a dilucidar el papel del sistema linfático juega en la metástasis del cáncer, la respuesta inmune, la reparación de heridas, y otras enfermedades asociadas linfático.

No invasiva imágenes ópticas de la vasculatura linfática de un ratón

El sistema vascular linfático es un componente importante del sistema circulatorio que mantiene la homeostasis de los líquidos, proporciona vigilancia inmunológica y...

El objetivo general de este procedimiento es demostrar cómo obtener imágenes no invasivas de los vasos linfáticos en animales pequeños mediante un sistema de imagenología por fluorescencia en el infrarrojo cercano. Esto se logra primero reconstituyendo el colorante fluorescente a la concentración adecuada inmediatamente antes de la imagenología. A continuación, se inyecta al animal sedado el colorante por vía intradérmica en la ubicación deseada.Esto permitirá la visualización de los vasos linfáticos de interés en la etapa final. Se adquieren imágenes de los vasos y luego se analizan. En última instancia, infrarrojo cercano.La imagen fluorescente del sistema linfático puede utilizarse para demostrar y revelar la función y la arquitectura de la vasculatura linfática. Aunque este método puede proporcionar información sobre el papel que el sistema linfático desempeña en animales sanos, también puede aplicarse en una variedad de condiciones patológicas, como metástasis cancerosas, respuesta inmune aguda y crónica, cicatrización de heridas y modelos transgénicos.Modelos de trastornos asociados al sistema linfático. El día de la obtención de imágenes, comience por reconstituir incy y ver

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Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

De dos fotones de imágenes ha descubierto la motilidad de linfocitos y las interacciones celulares en el ganglio linfático en condiciones basales y durante una respuesta inmune 1. En este caso, se demuestra la transferencia adoptiva de células T, el aislamiento de los ganglios linfáticos, y la motilidad de imágenes de células CD4 + T en los ganglios linfáticos explantados.

La disección y 2-Photon imagen de los ganglios linfáticos periféricos en ratones

Una técnica para la realización de microscopía intravital del ganglio linfático inguinal (LN) se describe. Dicha técnica permite en tiempo...

Microscopia intravital de los ganglios linfáticos inguinales

Los recientes avances en microscopía de dos fotones han permitido en tiempo...

Imagen intravital del nodo linfático poplíteo ratón

Detallamos un protocolo para monitorizar el comportamiento de neutrófilos y monocitos en venas mesentéricas en estado estacionario e inflamatorio utilizando microscopía confocal intravital en ratones anestesiados.

Imaging neutrófilos y monocitos en mesentérica venas por Microscopia intravital en ratones anestesiados en Tiempo Real

Presentamos la utilidad de la proyección de imagen longitudinal en vivo en el seguimiento de los cambios morfológicos del neovascularization coroides laser-inducida en ratones.

En Vivo La proyección de imagen multimodal y análisis del modelo de neovascularización coroidea inducida por láser Mouse

Aquí, demostramos los métodos de cuantificación en vivo de la salida de leucocitos de ingenuo, inflamado y mala piel murina. Realizamos una comparación directa de dos modelos: photoconversion de aplicación y en situ FITC transdérmica. Además, demostramos la utilidad de photoconversion para el seguimiento de salida de leucocitos de tumores cutáneos.

Cuantificación de leucocitos salida vía los recipientes linfáticos de la piel murina y tumores

Este protocolo describe una técnica para tomar imágenes de diferentes poblaciones celulares en el drenaje de los ganglios linfáticos sin alteraciones en la estructura del órgano.

Visualización de la estructura de los ganglios linfáticos y la localización celular mediante la microscopía confocal Ex-Vivo

Se presenta un protocolo para bloquear el flujo linfático mediante la sutura quirúrgica de los vasos linfáticos aferentes.

Bloqueo del flujo linfático mediante la sutura de los vasos linfáticos aferentes en ratones

El manuscrito demuestra un método innovador para el estudio in vivo de la contractilidad de los vasos linfáticos cervicales y el flujo linfático en ratones, para evaluar diversas funciones fisiológicas de los vasos linfáticos cervicales (cLVs) y las estrategias terapéuticas para la modulación de los mecanismos reguladores linfáticos del drenaje y la eliminación cerebral.

Montaje reproducible para la imagen in vivo de dos fotones de la contractilidad de los vasos linfáticos cervicales y el flujo linfático en ratones

Este protocolo evalúa el drenaje linfático tras la fractura combinando imágenes de infrarrojo cercano verde de indocianina (ICG) con ultrasonidos para cuantificar la eliminación plantar de ICG y el agrandamiento de ganglios linfáticos poplíteos en ratones.

La evaluación del drenaje linfático mediante imágenes en infrarrojo cercano y ultrasonidos de ICG tras fractura

Aprende a visualizar vasos linfáticos en animales pequeños mediante imagen no invasiva con fluorescencia en infrarrojo cercano. Este protocolo utiliza inyección intradérmica de un tinte fluorescente para estudiar la arquitectura y función del sistema linfático en investigación biomédica.

No invasiva imágenes ópticas de la vasculatura linfática de un ratón

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