A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
דרוסופילים Larval IHC
English
Share
Overview
אימונוהיסטוכימיה (IHC) היא טכניקה המשמשת להדמיית נוכחותם ומיקוםם של חלבונים בתוך רקמות. זחלי Drosophila נוחים במיוחד ל- IHC בגלל הקלות שבה ניתן לעבד אותם להכתמה. בנוסף, הזחלים שקופים, כלומר ניתן לדמיין רקמות מסוימות ללא צורך בבית חיטוי.
ב- IHC, חלבונים מזוהים בסופו של דבר עם נוגדנים שנקשרים במיוחד ל”אפיטופים “בתוך חלבון העניין. על מנת לשמר אפיטופים אלה, יש לתקן רקמות לפני הכתם. יתר על כן, על מנת נוגדנים לחדור ממברנות, תאים חייבים להיות חלחל עם חומרי ניקוי. מאמר וידאו זה מציע תצוגה מפורטת של ריאגנטים, כלים ונהלים הדרושים להכתמת רקמות זחל ניתחו, כולל שלבי קיבעון, חסימה והכתמה. כמו כן מוצגת הדגמה של טכניקות הרכבה על רקמות למיקרוסקופיה פלואורסצנטית. לבסוף, דוגמאות למגוון הרחב של יישומים לטכניקות אלה (וכמה וריאציות עליהם) מסופקות.
Procedure
Drosophila melanogaster הוא אורגניזם מודל נחקר נרחב בשל צדדיות שלה ואת המתקן של שימוש. אימונוהיסטוכימיה המבוצעת על תכשירי זחל Drosophila היא שיטה שלא יסולא בפז שיכולה לספק מידע על נוכחות, מיקום, ולוקליזציה משותפת של חלבונים. וידאו זה יכסה את השיטות החיוניות עבור ניתוח, קיבעון, חסימה, הרכ…
Disclosures
No conflicts of interest declared.
Transcript
Tags
Drosophila MelanogasterModel OrganismImmunohistochemistryDrosophila Larval IHCDrosophilaLarval PreparationsProteinsDissectionFixationBlockingMountingAntibodiesVisualizationPhosphate Buffered Saline (PBS)OrgansSaline SolutionPHFormaldehyde-based SolutionPreservationEnzymatic BreakdownWashing StepsImmunostaining ProcessTriton-X100
Cite This
JoVE Science Education Database. JoVE Science Education. Drosophila Larval IHC. JoVE, Cambridge, MA, (2023).
