Name: マウス網膜を使用してCNSにおける血管再生の評価 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-06-23T18:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 32 s
Description: 学ぶマウス網膜を用いたCNS血管再生評価法。酸素誘導網膜症モデルで硝子体内投与と蛍光造影を行い、虚血後の機能的血管再形成メカニズムを解明する。神経血管治療戦略の開発に貢献します。

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PSは、網膜細胞生物学のカナダの研究の椅子とアルコン研究所新研究者賞を取得しています。この作品は、カナダ衛生研究所（221478）からの補助金によって支えられて、カナダ糖尿病協会（OG -3 - 11から3329-PS）、自然科学とカナダの工学研究会（418637）及び財団ファイティング失明カナダ。サポートも網状のもの·デ·ルシェルシュエンサンテ·デ·ラ·ビジョン·デュ·ケベックから提供された。

倫理声明：すべての動物実験は、眼科と視覚研究と動物ケアのカナダの協議会での動物の使用に関するビジョンと眼科の研究のための協会（ARVO）文によって確立された動物のケアのガイドラインを遵守しています。 1。酸素誘起網膜症（OIR） <ol><li>レコードP0と仔マウスの誕生日。 </li><li>十分な量範囲を確保するためのO 2に入ると動物のすべての重みを記録します。注：P17でC57BL / 6マウスでは、体重は最大ネバダ32 5と7.5グラムの間の範囲であるべきである。環境の一貫性を維持するためには、（遺伝的に改変されたマウス、ならびに実験的治療を受けたマウスの場合）を対照として同腹仔を使用することが推奨される。ウイルスベクターの効果を評価する際に、1は、ウイルスの親和性を考慮し、ウイルスにより配信導入遺伝子の完全な発現に十分な時間を与える必要があります。急速に発現するウイルスこのような第3 世代のレンチウイルス24、25のようなベクターは、33をお勧めします。 </li><li> P7（C57BL / 6または所望の歪み）と5日間27、75％のO 2に設定した酸素室に母親の育成CD1の場所の仔マウス。環境湿度と温度は、O 2の曝露を通じて一定に保持した。注：O 2の中央源を備えた研究施設が理想的であり、空のO 2のタンクの面倒な交換を制限する。トランスジェニックまたはノックアウトマウスを操作すると、その対照および実験マウスを確保することが重要である同じ系統30、29内の遺伝的ドリフトを制限するために、同じベンダーから取得する。 </li><li> P12で、酸素室からマウスを削除し、O 2を周囲の動物を返す。 </li></ol>インナー網膜に化合物を送達するため2。硝子体内注射 （WH薬理化合物または組換えタンパク質の効果を評価JA） <ol><li> P14で、酸素2L /分（または任意の動物保護委員会が承認した麻酔薬）中の2％イソフルランでマウスを麻酔。麻酔の有効性を検証するために、連続してピンセットで尾、リア足と耳をつまむ。 </li><li>その腹の上でマウスを置きます。 </li><li>面取りプルガラス針を取り付けた10μlの滅菌注射器を用いて、45°の、眼の後輪部に研究されて化合物またはビヒクル（生理食塩水）を含有する溶液1μlの最大容量の注入を行うレンズを避け、角度。注：プルガラス針は、エポキシ樹脂のドロップを使用して、注射器に取り付けられている。 </li><li>マウスの眼に綿棒で潤滑眼軟膏（理想的には、抗生物質を含む）の低下を適用します。 </li><li>母親の育成に戻ってケージにマウスを返します。次いで、マウスを慎重に再まで監視されるカバーされ、完全に歩行可能。 </li></ol> 蛍光眼底血管造影による血管灌流およびバリア機能の3。評価（整合性） <ol><li>酸素2L /分（または任意の動物保護委員会が承認した麻酔薬）中の2％イソフルランでマウスを麻酔。麻酔の有効性を検証するために、連続してピンセットで尾、リア足と耳をつまむ。注：再生が評価されるときには、典型的には、P17で行われる。また、搬出分析をP19とP21に血管の完全性を時間をかけて維持されるかどうかを判断する。 </li><li>麻酔をかけた後、マウスの重量を量る。 </li><li>解剖ハサミで正中腹部切開を行います。注：解剖の機器は定期的にチェックし、シャープにする必要があります。 </li><li>横方向にリブをカットし、鉗子を用いて胸郭を上げる。注：これは、心臓への損傷を回避するために横方向にできるだけカットする必要がある。 </li><li> peripを除去した後心臓からheral組織、止血鉗子で下行大動脈をクランプする。 </li><li>ゆっくりと25 Gの針を用いて、左心室にフルオレセイン - デキストランを注入する。注：血管バリア機能が検討されている場合は、容器の完全性が損なわれたときに血管から漏出するように、70 kDaのフルオレセイン - デキストランが使用される。治験責任医師は、血管をキャストしたい場合は、2のMDAフルオレセイン - デキストランが使用される。重要なステップ：1）、均質な配分を確保するために遠心フルオレセイン - デキストラン、上清を注入する、2）血管収縮を防止するために、加温しフルオレセイン - デキストラン溶液を注入し、3）その循環時間は、過剰の4分いけない。 </li><li>営業はさみで注射後のマウス2分の首。 </li></ol> 4。除核と注視注意：血管再生の速度を評価する際に、まず、P12で、さらに、P14とP17に網膜を収集します。サンプリングされた時点の数を増やす血行再建24の速度をより正確に決定するためにs。 <ol><li>マウスの頭を傾け、その横に置きます。 </li><li>皮膚や解剖ハサミを使用して、目をカバーするまぶたを削除します。 </li><li>アイの下に湾曲した鉗子を置き、静かに視神経が切断されるまで、それを引き出します。 </li><li>その反対側にマウスの頭を回して、同じ手順（4.2および4.3ステップ）を行う。 </li><li>固定液の良好な浸透を確実にするために、30 G針を用いて眼の前房に穴を穿刺する。 </li><li> 4％パラホルムアルデヒド（PFA）を含有するチューブに目を移し、室温で1時間固定する。 </li><li> PFAを削除し、氷冷PBSの溶液で目を4回洗う。 </li></ol> 5。網膜解剖<ol><li>冷PBSを含むペトリ皿にマウスの眼を置き、実体顕微鏡下で網膜の解剖を行う。 </li><li>顕微解剖SCIと眼の周囲の余分な脂肪/組織を除去ssors。 </li><li>マイクロ解剖はさみで角膜を切り取ります。 </li><li>鉗子の2ペアを使用して、細かく視神経に向かって離れて周辺から強膜を剥離して廃棄します。 </li><li>ピンセットでレンズ（角膜の下に白っぽいボール）をつまんで、アイカップからそれを抽出します。支持体として、鉗子の1ペアを使用し、他のグリップに、慎重にレンズを高め、削除してください。 </li><li>小さなブラシ（サイズ0）とピンセットを用いて、網膜の内側から硝子体血管を切り離します。 </li><li>ピンセットを用いて視神経乳頭に接続硝子体血管のバンドルを削除します。 </li><li>移転前染色手順を開始する氷上でPBSと場所を含む2ミリリットルの微量遠心管に網膜を解剖した。 </li></ol> 6。網膜血管染色<ol><li> 1 mMのCaCl 2を含むPBS中の蛍光結合された-イソレクチンB4（ローダミンレクチンまたはその他）の溶液中で4℃で穏やかに振盪しながら一晩を解剖した網膜をインキュベート</サブ&gt;（2 mg / mlのイソレクチンB4液の1:100希釈を推奨）。全体染色手順の間に、アルミ箔や光から保護するために、不透明なホイルでチューブをカバーしています。 </li><li>次の日に、染色溶液を除去し、室温で10分間PBSで3回網膜を洗浄する。 </li></ol>網膜フラットマウントの7。準備<ol><li>顕微鏡スライド上に、光受容側ダウン網膜を転送し、4つの等しいサイズの象限に網膜を分割するために、外科用メスを使用して、4つの深い等距離放射状の切開を行う。それが動かないように切開中に、ブラシで網膜を引き締める。 </li><li> PBSに浸した2つのブラシを使用して、慎重に象限の感光体側ダウンを平坦化し、光退色を防止するために媒体を実装する際に網膜を浸す。その後、慎重に圧力を印加し、気泡がカバースリップの下に蓄積しないことを確認することなしにマウントされ、網膜の表面にカバースリップを置く。&lt;/李&gt; </ol>前に説明した31のような8。イメージングとVasoobliterationの定量（VO）と血管新生（NV） <ol><li> 10Xの倍率でエピ蛍光顕微鏡を用いて固定した網膜全体の画像を撮る。 </li><li>写真編集ソフトウェアで網膜像を開いて、一緒にステッチ、総網膜面積、および無血管面積を測定する。領域をピクセル単位で表すことができる。 </li><li>総網膜領域の画素数で無血管領域の画素数で除して、VOの程度を決定。 </li><li> 31が説明されているように、全網膜領域の画素数で、NVの画素数で除して、NVの程度を決定。 </li></ol>

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<li>Chia, R., Achilli, F., Festing, M. F., Fisher, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+origins+and+uses+of+mouse+outbred+stocks%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">The origins and uses of mouse outbred stocks.</a> Nat Genet. 37, 1181-1186 (2005).</li>
<li>Jenuth, J. P., Peterson, A. C., Shoubridge, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tissue-specific+selection+for+different+mtDNA+genotypes+in+heteroplasmic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Genet%22%5BJournal%5D)">Tissue-specific selection for different mtDNA genotypes in heteroplasmic mice.</a> Nat Genet. 16, 93-95 (1997).</li>
<li>Mattapallil, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Rd8+mutation+of+the+Crb1+gene+is+present+in+vendor+lines+of+C57BL%2F6N+mice+and+embryonic+stem+cells%2C+and+confounds+ocular+induced+mutant+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22Investigative+ophthalmolog.%2C+%26+visual+science%22%5BJournal%5D)">The Rd8 mutation of the Crb1 gene is present in vendor lines of C57BL/6N mice and embryonic stem cells, and confounds ocular induced mutant phenotypes.</a> Investigative ophthalmolog., & visual science. 53, 2921-2927 (2012).</li>
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著者らは、開示することは何もありません。

虚血性神経組織内に新しい健全な血管の成長を刺激するための最も効果的な方法は何ですか？それが干渉し、血管再生を天然加速させる治療的に有効である？虚血性網膜症や脳卒中などの神経の虚血性の病変では、血管の変性が低下し、神経機能35-38に関連している。したがって、疾患の初期/即時セグメントの間に、地域微小循環を回復、早期の傷害に対抗することは有益性を実証することができる。眼の文脈では、虚血性網膜の血管再生を加速させる実験パラダイムは、病的な新生血管形成21〜25、34、したがって、このアプローチのメリットはさらに調査を減らす。 20年前に導入されて以来、OIRモデル27は、網膜血管新生研究30に革命をもたらしました。ここでは、将来の戦略を研究するために、このモデルのために追加のアプリケーションを提供虚血性網膜の生理的血管再生を調節するegies。理想的な動物モデルは、ヒトの病態生理学に近い、高い再現性、迅速な実行と、理想的には、低コストなどのいくつかの項目を包含するべきである。...

CNSの発達、神経、免疫細胞および血管を通して適切な組織灌流を確認し、感覚情報1-5の伝送を可能にするために顕著に結合されたネットワークを確立する。不十分な組織の酸素と妥協代謝供給や血管のシステムの結果の内訳は、ますます神経変性疾患6の病因に重要な貢献者として認識されている。血管ドロップアウトし、脳内の神経血管装置の劣化は、例えば、血管性認知症、脳7の白質の血管病変や動脈および小血管8の狭窄症、アルツハイマー病と関連している。さらに、障害、血管バリア機能9は、多発性硬化症および筋萎縮性側索硬化症10寄与すると考えられる。 まばゆいばかりの、このプロトコルで説明網膜モデルに直接関係の糖尿病性網膜症、未熟児11と12の網膜症などの疾患は、13早期血管変性の位相によって特徴付けられる。神経血管網膜上のその後の虚血性ストレスは、おそらく再、元に戻すの酸素とエネルギー供給14〜16への代償性反応として開始過度および病理学的血管新生の第二段階をトリガします。疾患の進行の中心となる虚血性ストレスを克服するための魅力的な戦略は、特異的に神経網膜（ 図2および図3）の虚血区域に官能血管網を復元することである。制御血管新生反応を誘発することは直感に反するような抗VEGF類のような抗血管新生療法が適応の治療として考慮される条件として出くわすことがあります。しかし、このアプローチの有効性の証拠は、搭載されている。 ischemの例では、「生理​​的のような「増強する血管の成長ICの網膜症は、エレガントな内皮前駆細胞17、食事、ω-3多価不飽和脂肪酸の増加、他の血管新生因子18、骨髄前駆細胞19の注入、NADPHオキシダーゼ誘導されるアポトーシス20の阻害のミュラー細胞に発現VEGF誘発性ダウンレギュレーションの阻害の導入により実証されている酸摂取21、トリプトファンtRNA合成22のカルボキシル末端断片、およびグリア細胞23の保護のために、VEGFまたはFGF-2の直接投与による治療。また、我々は、虚血性網膜症でそのようなセマフォリンまたはネトリンなどの古典的な神経ガイダンスキューを調節する網膜内の健康な血管の血管再生を加速し、その結果、病的血管新生24,25を低減することを実証した。直接的な臨床的関連性のため、前述の動物実験のいくつかは、血管の再を促進するという証拠を提供する網膜症の初期の虚血性段階の間に発生が大幅に可能性虚血性負荷の低減を通じて、視力を脅かす前網膜新生血管19、23、24、26を減らすことができます。 機能的な血管の再生を刺激治療戦略を考案することは、血管生物学者のための重要な課題である。ここでは、網膜内の血管の再成長を調節する方策を探求するために、酸素誘発性網膜症（OIR）のマウスモデルを用いた実験系を記述する。 Smith らによって開発された。1994年27で、このモデルは、人間の増殖性網膜症のためのプロキシとして機能し、P12まで75％のO 2にP7の仔マウスを暴露し、その後、周囲の部屋のO 2 -緊張します（ 図に子犬を再導入することからなる1）。このパラダイムは緩く未熟児が換気されているシナリオを模倣O 2で。高濃度酸素への仔マウスの露出は、網膜毛細血管や微小血管の変性を誘発し、最大VO領域は48時間後（P9）に達しているが、血管閉塞（VO）の再現性のある区域は、一般的に、P12でのO 2の終了時に評価し得O 2 28への暴露。マウスでは、無血管のVOゾーンは自然に室内空気への再導入、最終的には、VOゾーンは完全に再血管化された（ 図2）は、次の週に渡って再生成します。 OIRを受けたマウスの室内空気への再導入は、典型的には、抗血管新生治療パラダイムの有効性を判断するために評価される前網膜血管新生（NV）（P17で最大）を引き起こす。その純粋な形では、OIRモデルは、酸素によって誘導される血管変性を評価し、破壊的な前網膜新生血管29〜31の範囲を決定するために、高度に再現性があり、定量化可能なツールを提供しています。 <p classは= &quot;jove_content&quot;&gt; CNS血管再生を調節する種々の探索的治療パラダイムは、薬理学的化合物の使用、遺伝子治療、遺伝子欠失などを含むOIRモデルを用いて調べることができる。血管の再成長に影響を与える特定のアプローチの傾向は、P12（高酸素を終了後に最大VO）およびp17（最大ネバダ州）間のウィンドウ内で段階的に評価する。病理学上のNV治療結果の評価は、迅速かつ容易に並行して決定することができ、十分にスタールら30、31により記載されている。ここでは、薬理学的化合物、将来の治療薬、ウイルスベクターによって神経網膜内の生理的血行再建術の変調を調査するか、トランスジェニックやノックアウトマウスでの候補遺伝子の影響を研究するために、簡単なステップバイステップの手順を提供する。

<table><tbody><tr><td>C57Bl/6マウス(他の系統を使用することもできます;血管新生反応は系統によって異なります)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CD1授乳中の母親</td><td>選択</td><td></td><td></td>のベンダー</tr><tr><td>手術用ハサミ ストレート</td><td>ワールド精密機器</td><td>14192</td><td></td></tr><tr><td>解剖ハサミ ストレート</td><td>ワールド精密機器</td><td>14393</td><td></td></tr><tr><td>バンナスアイハサミ</td><td>ハーバード装置</td><td>72-8483</td><td></td></tr><tr><td>虹彩鉗子、湾曲、鋸歯状</td><td>世界精密機器</td><td>15915</td><td></td></tr><tr><td>ブラシ 362R サイズ 0</td><td>ダイナスティ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>デュモン鉗子 #3; ストレート</td><td>世界精密機器</td><td>500338</td><td></td></tr><tr><td>外科用ブレード、サイズ 10</td><td>バード・パーカー</td><td>371110</td><td></td></tr><tr><td>ローダミン・グリフォニア (バンデイラエア)Simplicifolia Lectin I</td><td>Vector Laboratories, Inc</td><td>RL-1102</td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡スライド</td><td>VWR</td><td>16004-368</td><td></td></tr><tr><td>Fluoromount G</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>17984-25</td><td></td></tr><tr><td>Zeiss Axio Observer Z1 逆相・蛍光顕微鏡</td><td>Zeiss</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Leica MZ9.5 実体顕微鏡</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>フルオレセインイソチシアネート-デキストラン、70000</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>46945</td><td></td></tr></tbody></table>

マウス網膜を使用してcnsにおける血管再生の評価

Assessment of Vascular Regeneration in the CNS Using the Mouse Retina

げっ歯類の網膜は、おそらく中枢神経系（CNS）内の神経血管の相互作用を調査するためにここで最もアクセスしやすい哺乳動物系である。これは、ますます認識されているように、アルツハイマー病、多発性硬化症、および血管妥協の筋萎縮性側索硬化症などのいくつかの要素が存在する神経変性疾患。また、小児および労働年齢人口（未熟児及び糖尿病性網膜症の網膜症、それぞれ）の失明の最も顕著な原因は、生理的な血管の再成長の血管変性や障害によって特徴づけられる。この技術的論文の目的は、網膜におけるCNSの血管再生を研究するための詳細なプロトコルを提供することです。この方法は、虚血性損傷後の血管増殖の故障につながる分子メカニズムを解明するために用いることができる。また、健康的な血管叢を加速し、回復させる可能性のある治療法を検討することができます。調査結果はobtainedは記載されたアプローチを使用して、糖尿病又は未熟児網膜症と虚血の治療手段を提供し、場合によってはCNSの他の血管障害の利益を得ることができる。

OIRモデルは広く、網膜に酸素誘発性血管変性及び虚血誘導病的な新生血管形成を研究するために使用されており、眼疾患27、29、30のために現在用いられ、抗血管新生治療の開発に尽力してきました。このモデルを用いて得られた知見は緩く、例えば30未熟児の網膜症および増殖性糖尿病網膜症などの虚血性網膜症に外挿することができる。 ここでは、血管の再生を研究するため、このモデルの代替使用を提示する。我々は最近、私たちの研究室で出版された虚血性網膜を再生させる戦略の例について説明する。発表研究では、持続的な神経細胞の虚血が小胞体（ER）ストレスとそのエフェクターリボヌクレアーゼIRE1α、古典の神経ガイダンスキューネトリン1のmRNAを切断の1つを介して活性化させることを実証している。我々はショーネトリン-1の眼内送達は、網膜骨髄細胞中の修復、血管形成のプログラムを刺激するので、活性挿抜25の後の神経組織の血管再生を加速させる。また、我々は、IRE1αのレンチウイルス媒介サイレンを使用して加速し、血管再生の例を提供する。 ...

げっ歯類の網膜は、長い脳へのアクセス可能なウィンドウとして認識されている。この技術的な論文では、虚血性損傷後の中枢神経系内の血管再生の故障につながるメカニズムを研究するために、酸素誘発性網膜症のマウスモデルを採用しているプロトコルを提供する。説明したシステムはまた、網膜およびCNS内の機能の血管の成長を促進するための戦略を探求するために利用することができる。

マウス網膜を使用してCNSにおける血管再生の評価

The rodent retina is perhaps the most accessible mammalian system in which to investigate neurovascular interplay within the central nervous system (CNS). ...

本手順の全体的な目的は、虚血性損傷後の網膜および中枢神経系（CNS）内において、機能的な血管の再成長を促進するための戦略を探索することです。これは、まず酸素誘発網膜症のマウスモデルを用いることで達成されます。次に、硝子体注射によって化合物を眼内に投与します。次に、フルオレセイン血管造影により、血管灌流とバリア機能を確認します。最終ステップは、眼球を摘出し、網膜を分離することです。その後、網膜を染色および封入し、イメージングを行います。最終的に、免疫蛍光顕微鏡を用いて、硝子体内治療後または遺伝子改変マウスにおける血管再生成率を評価します。本手法で提示する系は、中枢神経系内の血管再生成を評価するための、再現性が高く簡便なシステムを提供します。これはSmithの酸素誘発網膜症モデルに基づいており、中枢神経系内の虚血を改善するための治療戦略を設計する際に非常に有用です。本手法は、中枢神経系（CNS）における血管の機能的な再生を促進または抑制する分子メカニズムに関する重要な疑問を解決するのに役立ちます。また、遺伝子や薬理学的化合物の影響を研究したり、血管増殖を開始させる病理学的メカニズムを解明したりするために利用できます。眼疾患に加えて、この手法は脳や脊髄などの他の中枢神経系（CNS）領域にも応用可能です。マウス幼仔の硝子体へ化合物を正常に注入し、新鮮な幼仔を慎重に扱うには習熟が必要です。まず、生後7日（P7）のマウス幼仔と、CD1系の授乳中の母マウスを75%酸素に設定した酸素チャンバーに入れます。5日後、動物をチャンバーから出し、通常の飼育条件に戻します。次に、P12またはP14で、内 retinal 層へ化合物を送達するために硝子体注射を行います。マウスを麻酔した後、鉗子で尾、後肢、耳を順につまみ、麻酔の効果を確認します。エポキシ樹脂で10 µLシリンジに固定した、先端を斜めにカットした引き伸ばしガラス針をあらかじめ準備しておきます。眼球の後方輪部を注入部位として特定します。針を45度の角度で挿入し、目的の化合物を注入します。眼に軟膏を塗布した後、マウスを代理母のいるケージに戻します。血管収縮を防ぐため、フルオレセインデキストラン溶液を遠心分離し、上清を回収します。注入前にフルオレセインデキストラン溶液を温めてください。次に、麻酔下にあるマウスの鎮静深度を確認します。準備が整ったら、解剖用鋏を用いて腹部正中に切開を加えます。胸郭を開き、心臓周囲の組織を除去した後、下行大動脈をクランプします。加温したフルオレセインデキストリンを満たした25ゲージの針を左心室に挿入し、溶液を灌流させます。注入から2分以内に動物を首切りし、頭部を横向きに置きます。解剖用ハサミを用いて、眼を覆っている皮膚と眼瞼を除去します。次に、曲がった鉗子を眼の下に配置し、視神経が切断されるまでゆっく

assessment-of-vascular-regeneration-in-the-cns-using-the-mouse-retina

Research

JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

出典: Portela-Lomba, M., et.al. 成人軸索再生のインビトロモデルとしての、嗅覚被覆グリアを用いた軸索化ラット網膜神経節ニューロンの共培養。J. Vis.

軸索切開ラット網膜神経節ニューロンにおける軸索再生のイメージングと定量化

新生児マウスの網膜は血管新生を調節する別の遺伝子や薬剤の役割の調査を可能にし、血管新生のよく特徴付け生理学的モデルを提供...

血管新生を調査するために新生児マウス網膜の全体のマウント免疫蛍光染色<em生体内で&gt;</em

このビデオでは、ナイーブマウス視覚投影の造影MRイメージングのための急性視神経挫滅損傷および慢性視神経変性に関連視神経変性の繰り返しと縦のin vivo試験では、臨床3 Tスキャナを使用して、方法を示しているノックアウトマウス（P50 KO）。...

マウスにおける造影MRIによる視神経線維の整合性in vivoイメージング

血管再生を視覚化するために使用されるツールは、血管の樹木を対比するための方法を必要とします。このフィルムは、血管樹の最適なコントラストを達成し、μCTおよび組織学的シリアル切片を使用して得られた標本の詳細な分析から生じる潜在的な利点を示すために使用される繊細な注入技術を示しています。...

正常マウスで70％肝切除後の血管と実質再生の可視化

マウスのレーザー誘発脈絡膜新生血管の形態学的変化のフォロー...

生体内でマルチ モーダル イメージングとマウス レーザー誘発脈絡膜新生血管モデルの解析

in vivoイメージングは、健康と疾患における生物学の研究のための強力なツールです。このプロトコルは、標準的な2光子顕微鏡によるマウス網膜の経瞳孔イメージングについて説明しています。また、網膜の複数の細胞コホートを蛍光標識するためのさまざまなin...

経瞳孔二光子マウス網膜のin vivoイメージング

このプロトコルは、マウス網膜フラットマウントの調製および免疫蛍光染色および分析のための詳細な方法を記載する。マウスの仔に対するフルオレセイン眼底造影(FFA)の使用および画像処理についても詳細に説明されている。...

酸素誘発網膜症マウスモデルにおける網膜血管の動的成長のモニタリング

この記事では、実装網膜製剤全体に対する確立された再現性のあるレクチン染色アッセイと、増殖性および不拡散性網膜症において頻繁に変化する血管パラメータの定量的測定に必要なプロトコルについて説明する。...

不拡散性網膜症を有するマウスの全型網膜における血管パラメータの定量化

ここでは、網膜静脈閉塞(RVO)の研究におけるフルオレセイン血管造影(FA)および光干渉断層撮影(OCT)画像の3つのデータ解析プロトコルを紹介します。...

生体内 再現性を促進するためのマウス網膜における血管損傷の読み出し

このプロトコルは、外植片のエレクトロポレーションを使用してマウスの網膜を生体内でのシス調節エレメント（例えば、エンハンサー/プロモーター）の活性を定量化するための簡単​​で安価な方法を説明します。...

の活動の定量化シス</em植片エレクトロポレーションによってマウス網膜で>調節エレメント

学ぶマウス網膜を用いたCNS血管再生評価法。酸素誘導網膜症モデルで硝子体内投与と蛍光造影を行い、虚血後の機能的血管再形成メカニズムを解明する。神経血管治療戦略の開発に貢献します。

マウス網膜を使用してCNSにおける血管再生の評価

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