Name: Nanomanipulación de Soltero moléculas de ARN por Pinzas Ópticas (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-08-20T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 59 s
Description: Aprende a manipular moléculas individuales de ARN con pinzas ópticas para estudiar su plegamiento mecánico. Este método revela dinámicas estructurales de ARN con resolución de piconewtons y nanómetros.

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Este trabajo fue apoyado por una subvención de la NSF (MCB-1054449) y un premio del Programa de Investigación Piloto interdisciplinario colaborativo del Instituto de ARN de la Universidad de Albany a PTXL.

1 Preparación de ARN Moléculas por Single-molécula Tweezing <ol><li> La clonación de la secuencia de interés. Clonar la secuencia de ADN correspondiente a la estructura de ARN en un vector. </li><li> Síntesis y purificación de la plantilla de la transcripción. Sintetizar una plantilla de transcripción por PCR. [Lugar de la tabla 1 aquí] A continuación, purificar los productos de PCR utilizando un kit de purificación de PCR, y concentrar la muestra de&gt; 200 ng / l. Debido a que el ADN purificado se utiliza para la transcripción, RNasa libre de agua se debe utilizar en las etapas de elución y concentración. </li><li> Transcripción in vitro. Sintetizar ARN por transcripción in vitro a 37 ° C durante la noche para maximizar el rendimiento de ARN. [Lugar de la tabla 2 aquí] Después de la transcripción, añadir 1 l de DNasa I para digerir el molde de ADN durante 15 minutos a 37 ° C. Se purifica el ARN utilizando una columna de centrifugación de sílice. </li><li> Síntesis de la manija biotinilado A. En primer lugar, producir el mango no modificada A por PCR usando los cebadores Af y Ar y HCl concEntrate el ADN amplificado a&gt; 200 ng / l. A continuación, incorporar modificaciones de biotina en el producto de PCR usando una reacción de extensión del cebador. [Lugar de la tabla 3 aquí] NOTA: El mango biotinilada (biotina-HA) se puede utilizar directamente en el recocido sin purificación. A medida que la biotina-HA ha de recocido con el ARN, es fundamental utilizar RNasa libre de agua en ambas etapas. </li><li> Síntesis del mango modificado digoxigenina B. Sintetizar digoxigenina modificado mango B (dig-HB) por PCR usando el cebador Bf y oligo modificado digoxigenina-Dig-Br (Figura 3). A continuación, purificar el producto de PCR y concentrar la muestra a&gt; 200 ng / l. </li><li> Hibridación de ARN a los mangos. Recocer el ARN con asas. [lugar los cuadros 4 y 5 aquí] </li><li> Purificar muestra recocida. Añadir 3 volúmenes de etanol de la muestra recocida y mezclar bien. Guarde la mezcla a -70 ° C durante al menos 1 hora. Centrifugar a 15.800 xg y desechar el sobrenadante. Secar la pella utilizando un liofilizador. Disolver el precipitado en100 l de agua libre de RNasa. NOTA: La muestra está listo para ser utilizado y se puede almacenar a -20 ° C. </li></ol> 2. Calibración y Operación de las pinzas ópticas <ol><li> Calibrar Tamaño de píxel de monitor de vídeo <ol><li> Utilice la trampa óptica para atrapar un cordón con diámetro conocido (tamaño estándar). </li><li> Capturar imágenes de un cordón atrapado usando un software de imagen (Figura 4). </li><li> Determinar el diámetro de la perla usando el software de imágenes basada en el método centroide. </li><li> Repita este procedimiento para determinar diámetros de granos de diferente tamaño. </li><li> Montar los diámetros medidos y conocidas de las perlas mediante una regresión lineal para obtener el tamaño físico de un píxel. </li></ol></li><li> Verifique Distancia Calibración <ol><li> Utilice la trampa óptica para atrapar un cordón. </li><li> Determine la posición de píxel de su centro de gravedad por el software de captura de imágenes y grabar su posición usando los Minitweezers. </li><li> Dirigir el talón a dife<html> alquilar posiciones y repetir la determinación de la posición. </li><li> Convertir las posiciones X e Y de la perla de los píxeles a la unidad de m usando el tamaño de píxel calibrado. </li><li> Comparar la X e Y entre las posiciones medidas por vídeo y por los Minitweezers. Los dos conjuntos de valores deben estar de acuerdo. A medida que la resolución de la imagen es de&gt; 0,1 m, mover el grano más de 1 m entre las medidas para asegurar la exactitud. Si la calibración de la distancia no es comparable a la que está almacenada en los Minitweezers, vuelva a calibrar el instrumento. </li></ol></li><li> Trampa Rigidez Calibración <ol><li> Capturar un cordón usando la trampa óptica y mantenerla quieta. </li><li> Registre la fuerza de la trampa usando una adquisición de datos rápida derivación a una velocidad&gt; 5 kHz durante 3 segundos. </li><li> Generar un espectro de potencia de la grabación del movimiento de talón utilizando el software. Montar el espectro de potencia de un Lorentz (Figura 5) 38: 542 / 51542eq1.jpg &quot;width =&quot; 200 &quot;/&gt; (Eq. 1) en la que S (f) es la potencia en la frecuencia de f, f c es la frecuencia de corte, y S 0 es la potencia asintótica. La frecuencia de esquina, f c, es la frecuencia donde el poder de movimiento térmico ha disminuido a la mitad del valor asintótico. Como f c varía con la potencia del láser y el tamaño del grano, calibre cada talón atrapados individualmente. </li><li> Calcular la constante de resorte de la trampa, κ, desde f c: <img alt="Ecuación 2" fo:content-width="1in" src="/files/ftp_upload/51542/51542eq2.jpg" width="100" /> (Ec. 2) en la que γ es el coeficiente de arrastre de la perla (. ecuación 3). Utilice la constante del resorte para determinar los cambios de extensión de un ARN de cambio vigente. </li></ol></li><li> Prueba de la Ley de Stokes <ol><li> Capturar un cordón usando la trampa óptica. Mueva el talón hacia atrás y la fuerza a diferente velocidad. </li><li> Registre el movimiento del talón y forzar utilizando los Minitweezers. </li><li> Calcular el radio de la perla. NOTA: La fuerza de rozamiento, F d, generada por el movimiento de una partícula esférica en un fluido puede ser descrita por la ley de Stokes: <img alt="Ecuación 3" fo:content-width="1.5in" src="/files/ftp_upload/51542/51542eq3.jpg" width="150" /> (. La ecuación 3) en la que r es el radio de la esfera, v es la velocidad, y h es la viscosidad dinámica del fluido, que se puede encontrar en las tablas de referencia. El uso de la fuerza medida como F d, el radio de la perla puede ser calculado usando la ecuación. 3 (Figura 6) y debe estar de acuerdo con el determinado por el software de adquisición de imágenes. Prueba de la ley de Stokes pone a prueba de manera efectiva las calibraciones y el rendimiento del instrumento en general. </li></ol></li></ol> 3. Nanomanipulación de Soltero moléculas de ARN <ol><li> Hacer fluidos. <ol><li> Taladre seis agujeros (2 mm de diámetro cada uno) en una cubierta de vidrio No. 2 (Figura 7a) y cortar tres ranuras (ancho de 2 mm) en la cinta de doble cara poliimida (Figura 7b) usando un grabador láser. </li><li> Hacer una cámara de flujo intercalando dos de vidrio cubierta con dos capas de cinta de doble cara Kapton. Inserte una micropipeta y dos tubos de derivación entre la cinta (Figura 7c). </li><li> Montar la cámara de flujo sobre una estructura de metal, haciendo coincidir los agujeros de fluidos (Figura 7d). </li><li> Conecte los canales fluidos de la cámara a 10 ml jeringas llenas con tampón de elección a través de tubos de polietileno (Figura 7e). </li><li> Montar toda la cámara sobre las pinzas ópticas entre los dos objetivos. Asegúrese de que el lado frontal de la cámara con los canales fluídicos se enfrenta a la derecha. Repliegue el objetivo correcto y conecte las clavijas de bronce del bastidor (Figura 7e) para agujeros de montaje en tél pinzas. Apriete los tornillos para fijar la posición de la cámara. </li></ol></li><li> La mezcla de la muestra y perlas de recocido. Mezclar la muestra recocida con perlas recubiertas con anti-digoxigenina (DIG-perlas), y dejar que la mezcla para permanecer a temperatura ambiente durante 5-10 min. Típicamente, 1 l de muestra recocida se mezcla con 5 l DIG-perlas en 1 ml de tampón. NOTA: La cantidad de los granos que se carga en la cámara de flujo se debe elegir para asegurar una cantidad razonable de las cuentas que se entregarán a partir del tubo de derivación. La relación de la muestra recocida a las perlas no se puede cuantificar fácilmente. En un caso ideal, la mayoría de los granos no tienen ARN de tal manera que sólo una pequeña fracción de las perlas puede tener sólo una molécula de ARN por perla. Como las muestras recocidas y la suspensión de cuentas son difíciles de cuantificar, la mejor y única manera actualmente es variar la proporción de mezcla y probar la mezcla de las pinzas. </li><li> Entregar perlas para el sitio de reacción en la cámara de flujo (es decir, unos pocos micrómetros en la parte superior de la micropipette punta, Figura 7c). <ol><li> Cargue una suspensión de perlas recubiertas con estreptavidina (strep-perlas) en una jeringa de 1 ml. </li><li> Conectar la jeringa al tubo de fluido que conduce a la parte inferior del canal de la cámara de flujo (Figura 7a). </li><li> Empuje la jeringa a fluir los estreptococos-cuentas en la cámara. </li><li> Mueva toda la cámara utilizando el software de control del motor para colocar la trampa óptica cerca de la abertura del tubo de derivación inferior (Figura 7b). Entonces operar la trampa óptica por un trackball para capturar un strep-perla. </li><li> Mueva el cordón cerca de la punta de la micropipeta mediante el software de control del motor. </li><li> Tire de la jeringa conectada a la micropipeta a chupar la gota sobre la micropipeta. </li><li> Aplicar flujo presionando suavemente la jeringa para el canal central para eliminar perlas de Strep-extra. </li><li> Del mismo modo, suministrar la mezcla de la muestra y los dig-cuentas (véase el paso 3.2) en el canal superior de la cámara. </li><li> Capturar una dig-talón y lo acercan a la strep-grano utilizando la trampa óptica. </li><li> Limpie el canal central mediante la aplicación de flujo. NOTA: El estreptocócica y DIG-cuentas son elegidos para ser de diferentes tamaños para que puedan distinguirse visualmente bajo la visión microscópica (Figura 4). </li></ol></li><li> Pesca &quot;una sola molécula de inmovilización entre un par de talones. <ol><li> Coloque la dig-bead verticalmente en la parte superior de la Strep-talón (Figura 4). </li><li> Mueva la dig-talón hacia el strep-grano dirigiendo la trampa. Abra una ventana gráfica fuerza-distancia en el ordenador para visualizar los cambios de fuerza. </li><li> Tras el contacto de los dos talones, mover la dig-bead verticalmente lejos de la Strep-perla. </li><li> Si no se realiza ningún contacto específico, la fuerza se mantiene casi cero. Si los dos talones están conectados por las moléculas, la fuerza aumenta significativamente cuando los dos talones separados. Este procedimiento, conocido comúnmente como &quot;pesca&quot;, es a menudo perfOrmed varias veces en cada par de talones para encontrar un amarre efectivo de una sola molécula. </li></ol></li></ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

<html> Modificación y resolución de problemas en la preparación de muestras Tweezing Elección de clonación del vector. Aunque el esquema general descrito aquí (Figura 3) no requiere un vector de clonación especial, se prefiere el vector no tener T7 intrínseca o promotor T3 para la facilidad de la transcripción de tal manera que un promotor puede ser introducido a través de PCR en las posiciones deseadas. Secuencia y l...

El desarrollo de la técnica de las pinzas ópticas mucho tiempo se ha acompañado de su aplicación en la investigación biológica. Cuando el efecto de atrapamiento óptico fue descubierto por primera vez, Arthur Ashkin observó que las bacterias en el agua contaminada podrían quedar atrapados en el foco de láser 1. Desde entonces, las bacterias trapping se ha convertido en una, divertido experimento no intencional para las generaciones de estudiantes biofísica, así como una herramienta de investigación serio para estudiar la fisiología microbiana 2,3. La técnica de captura óptica utiliza rayo láser enfocado para inmovilizar un objeto microscópico 1. Prácticamente, una Trampa de láser funciona como un resorte óptico, que también mide la fuerza (F) en el objeto atrapado por su desplazamiento desde el centro de la trampa (Delta X). Dentro de un corto rango, F = κ x Delta X, en κ es la constante del resorte de la trampa. La trampa óptica se puede utilizar para ejercer la fuerza en picoNewton (PN) a una precisión microsobjeto copic y medir su posición con nanómetros (nm) de precisión. En las últimas dos décadas, las pinzas ópticas se han convertido en una de las técnicas de una sola molécula más utilizados en biofísica. La técnica se ha empleado para estudiar el plegado y la mecánica de ADN 4-6, 7-9 ARN, y proteínas 10,11. Las pinzas ópticas también se han utilizado para observar la replicación del ADN 12, la transcripción del RNA 13, y la síntesis de proteínas 14,15, así como muchos otros eventos biomoleculares 16-18. Se emplean enfoques sola molécula en investigación estructural ARN principalmente para explorar el paisaje de energía plegable resistente de ARN. Una secuencia de ARN normalmente puede plegarse en múltiples estructuras estables, mutuamente excluyentes, debido a la composición química y de pelado de base de reglas simples de ARN. Durante mucho tiempo se ha sabido que el ARN polimorfismo estructural, como la que se produce en riboswitches 19,20, juega un papel importante en la regulación génica. Una recent encuesta en todo el genoma ha revelado que las variaciones de temperatura de hasta unos pocos grados influyen en gran medida la estructura y la síntesis de proteínas de una gran parte del transcriptoma celular 21. Este ejemplo sugiere que el papel biológico de ARN plegables alternativa es tal vez más importante y generalizada que se suponía. Polimorfismo estructural, sin embargo, plantea un desafío para los enfoques bioquímicos y biofísicos tradicionales, que examinan las propiedades promedio de muchas moléculas. Por ejemplo, el &quot;on&quot; y conformaciones &quot;off&quot; de un riboswitch son mutuamente excluyentes. Una estructura de un promedio de derivado de estructuras heterogéneas no es probable que se asemejan a cualquiera de los confórmeros biológicamente relevantes. Por otra parte, ARN no traducido del ARNm y generalmente se forman estructuras. Su interacción con las proteínas y ARNs reguladores comúnmente requiere despliegue de la estructura existente como parte de la interacción. Por lo tanto, el estudio de RNA de desplegamiento / replegamiento se convierte en un pertinentecuestión de la biología de ARN. Para afrontar este reto, el enfoque de una sola molécula se ha empleado para desentrañar ARN polimorfismo estructural mediante el estudio de una molécula a la vez 22-27. En comparación con el método de fluorescencia de una sola molécula popular, pinzas basados ​​despliegue mecánico ofrece la ventaja de que las conformaciones de las moléculas individuales se pueden manipular por la fuerza aplicada y ser medidos con precisión nanométrica. Esta capacidad nanomanipulación puede ser utilizado para controlar el despliegue / plegado de dominios estructurales individuales tales que el plegado jerárquica de un gran ARN puede ser disecado 28. Alternativamente, una sola hebra puede ser dirigida a plegarse en uno de varios confórmeros; o una estructura existente puede ser inducida mecánicamente a replegarse en una conformación diferente 29. Bajo condiciones biológicas, una estructura de ARN puede ser alterado al cambiar la temperatura o la unión del ligando. La capacidad de manipular directamente s molecularestructure abre un nuevo espacio de estudio estructural del ARN. En principio, otras técnicas mecánicas, tales como microscopio de fuerza atómica y pinzas magnéticas, también se pueden utilizar para estudiar el plegado de las moléculas de ARN individuales. Sin embargo, tales aplicaciones se limitan en gran parte debido a la relativamente baja resolución espacial 30. El empleo de pinzas ópticas permite estructuras de ARN que se desplegaron por la fuerza mecánica. La ventaja de mecánica despliegue es varias veces. La fuerza puede ser utilizado para desplegar tanto estructuras secundarias y terciarias, mientras que los iones de metal y ligando inducida plegado se limitan principalmente a estructuras terciarias. La temperatura y la desnaturalizante pueden afectar significativamente las actividades de agua y solutos. En contraste, la fuerza se aplica localmente para perturbar las estructuras moleculares; el efecto de la fuerza sobre el medio ambiente circundante es despreciable. Además, se utiliza mejor de fusión térmico para estudiar la termodinámica de plegado de las pequeñas estructuras de ARN,mientras que las pinzas ópticas se han utilizado para estudiar las estructuras de ARN con diversos tamaños, que van desde un tetraloop horquilla de siete pares de bases 28 a un ribozima 400-31 nucleótidos. Además, las estructuras de ARN se pueden desplegar mecánicamente a temperaturas mesófilas. En contraste, se desarrolle ARN en un experimento de fusión térmica, la temperatura se eleva típicamente muy por encima de las temperaturas fisiológicas, lo que aumenta significativamente la hidrólisis de ARN, especialmente en presencia de iones Mg 2 +. Es importante señalar que el efecto mecánico de la fuerza depende de cómo se aplica a una estructura. La fuerza aplicada inclina el plegado panorama energético. Por ejemplo, cuando se aplica una fuerza a una horquilla, los pares de bases se rompen secuencialmente, uno a la vez (Figura 1a). El tenedor rasga progresa a lo largo del eje de la hélice, que es perpendicular a la fuerza aplicada. En contraste, cuando un complejo mínima besos está bajo tensión, los dos besarpares de bases, que son paralelas a la fuerza aplicada, comparten la carga de fuerza (figura 1b). Las diferentes geometrías de la horquilla y besar complejo relativa al resultado fuerza aplicada en su diferente respuesta mecánica, que puede ser utilizado para distinguir plegado secundaria y terciaria 28,32. El aspecto teórico de la mecánica despliegue ha sido revisado previamente 8,9,30. Este trabajo describe los enfoques básicos para configurar y realizar una sola molécula de ensayo de desarrollo mecánico. Configuración Experimental. En nuestro experimento tracción mecánica, la muestra de ARN para la depilación con pinzas consiste en el ARN de interés flanqueada por dos asas de doble hebra de ADN / ARN (Figura 2) 7. La molécula entera puede ser atado a dos perlas de micras de tamaño con recubrimiento de superficie (Spherotech) a través de estreptavidina-biotina y digoxigenina interacciones anticuerpo-anti-digoxigenina, respectivamente. Un grano está en manos de un tr óptico de medición de fuerzaap, mientras que el otro se mantiene en la punta de una micropipeta. La distancia relativa entre las perlas se puede cambiar por cualquiera de dirigir la trampa o mover la micropipeta. Usando este enfoque, una sola molécula de ARN tethering las perlas puede ser estirado y relajado. Preparación de las muestras. La síntesis de RNA de muestras para la depilación con pinzas incluye algunos pasos (Figura 3). En primer lugar, la secuencia de ADN correspondiente al ARN de interés se clona primero en un vector plasmídico. A continuación, tres reacciones de PCR se llevan a cabo para generar las dos asas y una plantilla para la transcripción. La plantilla de la transcripción abarca las regiones de la manija y las secuencias insertadas. El ARN de longitud completa se sintetiza por transcripción in vitro. Por último, el ARN y las manijas modificados químicamente son recocidos juntos para generar las moléculas para la depilación con pinzas. Calibración y Operación de pinzas. El diseño básico de la utilización Minitweezersd en este trabajo se desprende que de las pinzas ópticas de doble haz 33. Con muchas mejoras, los Minitweezers mostrar una estabilidad extraordinaria en comparación con las pinzas ópticas primera generación. Un número de grupos de investigación en varios países utilizan las Minitweezers en sus investigaciones de una sola molécula 14,15,34-37. Los detalles de construcción, calibración y operación del dispositivo, incluyendo videos de instrucción, están disponibles en el sitio web &quot;Pinzas Lab&quot; (http://tweezerslab.unipr.it). Aquí, las mejoras y los procedimientos de calibración que deban llevarse a cabo en bases diarias se describen en detalle.

<table><tbody><tr><td>Pinzas minitweezers</td><td>Steven B. Smith Engineering</td><td></td><td><a href="http://tweezerslab.unipr.it/">http://tweezerslab.unipr.it</a>Tarjeta de</td></tr> <tr><td>adquisición de datos</td><td>Tarjeta de vídeo USB-6351</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>de National Instruments Software</td><td>de programación PCI-1407</td><td></td></tr><tr><td>Labview de</td> National <td>Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>NI Vision Builder</td><td>National Instruments</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Grabador láser</td><td>Sistemas láser Epilogue</td><td>Zing-16</td><td></td></tr><tr><td>Kit de purificación PCR</td><td>Qiagen</td><td>28104</td><td></td></tr><tr><td>Kit MEGAscript T7</td><td>Life Technologies</td><td>AM1334</td><td></td></tr><tr><td>Kit MEGAclear</td><td>Life Technologies</td><td>AM1908</td><td></td></tr><tr><td>Biotina-11-UTP</td><td>Thermo Fisher</td><td></td><td></td>FERR0081</tr><tr><td>ADN polimerasa T4</td><td>New England Labs</td><td>M0203</td><td></td></tr><tr><td>Microesfera recubierta de estreptavidina</td><td>Spherotech</td><td>SVP-20-5</td><td></td></tr><tr><td>Microesfera recubierta de antidigoxigenina</td><td>Spherotech</td><td>DIGP-20-2</td><td></td></tr><tr><td>Microesferas estándar de tamaño</td><td>Spherotech</td><td>PPS-6K</td><td></td></tr><tr><td>Cinta Kapton</td><td>Kaptontape.com</td><td>KPPTDE-1</td><td></td></tr><tr><td>Nº 2 cubreobjetos</td><td>Thermo Fisher</td><td>12-543D</td><td></td></tr></tbody></table>

nanomanipulación de soltero moléculas de arn por pinzas Ópticas

Nanomanipulation of Single RNA Molecules by Optical Tweezers

Una gran parte del genoma humano se transcribe pero no se traduce. En esta era post genómica, las funciones de regulación de ARN se ha demostrado ser cada vez más importante. Como la función del ARN a menudo depende de su capacidad para adoptar estructuras alternativas, es difícil predecir de ARN estructuras tridimensionales directamente de secuencia. Single-molécula se acerca mostrar potenciales para resolver el problema de la ARN polimorfismo estructural mediante el control de las estructuras moleculares de una molécula a la vez. Este trabajo presenta un método para manipular con precisión el plegamiento y la estructura de las moléculas de ARN individuales utilizando pinzas ópticas. En primer lugar, los métodos para sintetizar moléculas adecuadas para una sola molécula trabajo mecánico se describen. Se discuten, varios procedimientos de calibración siguientes para garantizar las operaciones propias de las pinzas ópticas. A continuación, se explican varios experimentos. Para demostrar la utilidad de la técnica, los resultados de desplegar mecánicamente horquillas de ARN y un único ARN kissing complejo se utilizan como evidencia. En estos ejemplos, se utilizó la técnica nanomanipulación para estudiar el plegado de cada dominio estructural, incluyendo secundaria y terciaria, de forma independiente. Por último, se discuten las limitaciones y futuras aplicaciones del método.

Limitado por el espacio, nanomanipulación de moléculas de ARN individuales se demuestra mostrando sólo ejemplos mecánicos se desarrollan de ARN horquillas y un ARN con estructura terciaria. Manipular Individual horquilla moléculas Una vez que se estableció una correa de sujeción entre las perlas, la extensión y la fuerza de sujeción en el se pueden manipular usando un protocolo definido por el usuario. Cuatro protocolos de manipulación comunes so...

Las pinzas ópticas se han utilizado para estudiar el plegamiento del ARN estirando moléculas individuales desde sus extremos 5' y 3'. Aquí se describen los procedimientos comunes para sintetizar moléculas de ARN para pinzas, la calibración del instrumento y los métodos para manipular moléculas individuales.

Nanomanipulación de Soltero moléculas de ARN por Pinzas Ópticas

A large portion of the human genome is transcribed but not translated. In this post genomic era, regulatory functions of RNA have been shown to be ...

El objetivo general del siguiente experimento es demostrar un experimento de despliegue mecánico a nivel de molécula individual sobre una estructura de ARN. En el primer paso, se construye una cámara de flujo y se monta en el instrumento. En el segundo paso, se mezclan perlas de tamaño micrométrico con la muestra de ARN de interés, y luego se cargan en la cámara de flujo las dos perlas de diferente tamaño.Finalmente, la cámara de flujo y la trampa óptica pueden utilizarse para guiar las perlas hacia el contacto entre sí y evaluar una variedad de interacciones a nivel de molécula individual. En última instancia, esta técnica de manipulación nano puede emplearse para estudiar el plegamiento del ARN a niveles estructurales secundarios y terciarios. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en el campo del plegamiento del ARN, como ¿cómo se pliega y despliega una molécula de ARN?¿Cómo transita entre diferentes conformaciones en respuesta a un cambio ambiental? ¿Y cómo interactúa con otras moléculas? El experimento de hoy será realizado por mi estudiante de posgrado, el Sr. Williams Stevenson, para construir una cámara de flujo, comience perforando seis orificios de dos milím

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