Name: くも膜下出血の急性および後期後遺症の研究のためのウサギの血液シャントモデル：技術的側面 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-10-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min
Description: 学ぶウサギを用いたくも膜下出血の血液シャントモデル構築法。鎖骨下動脈カニューレーションと神経モニタリングにより、早期脳損傷と遅発性血管攣縮の病態生理を解明し、神経血管分野の重要な課題に答える。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

著者らは、初期の草稿の校正のためのローリー·フォン·Melchner、ベルン大学病院、脳神経外科、ベルン、スイス、校正のための原稿を編集しPaskusエレミヤ、ボストン小児病院、マサチューセッツ州ボストンに感謝します。私たちは、ダニエル·メトラー、DVM、マックス·ミュラー、DVM、ダニエルZalokar、およびOlgica Beslac、実験外科研究所、臨床研究科、ベルン大学、ベルン、スイスからの動物の世話、麻酔および手術支援の熟練した管理を感謝しています。私たちは、生理学的パラメータのリアルタイムデータの監視と事後処理のために、マイケルLensch、ヘッドリサーチナース、集中治療医学科、ベルン大学病院やベルン大学、ベルン、スイスに感謝します。私たちは、その優れた研究室の技術的および手術支援のため、エディンNevzati、カール·室井、そしてサロメエルハルトに感謝します。 この作品はIntensiv省によってサポートされていましたEケア医学、ベルン大学病院やベルン、ベルン、スイス、臨床研究科、ベルン、ベルン、スイスの大学の大学、Kantonsspitalアーラウ、アーラウ、スイス研究基金。私たちは、 図1および2のためのリプリント許可、エルゼビアに感謝します。

2.5計量三ヶ月齢の雌のニュージーランドウサギ - 3.5キロは、この手順のために使用された。この研究は、実験動物の管理と使用のための健康ガイドラインの国立研究所に従ってベルン、スイス（承認＃105/13）のカントンの動物管理委員会の承認を得て実施した。すべての外科的処置はベルン、スイスのベルン大学病院での臨床研究科の実験的手術研究所で、無菌条件下で行った。獣医麻酔科医は手術中におよび回復を通して動物を監視した。 1動物の準備、位置決めおよび鎖骨下動脈のカニューレ挿入<ol><li>有害に対するウサギの反応をチェックすることによって、麻酔の制御深さケタミンの筋肉内注射（30mg / kgの;ケタラール、50 mg / ml）をウサギに全身麻酔を誘導し、キシラジン（Xylapan 20 mg / mlのkgを6ミリグラム/） stimulatイオン（ 例えば、つま先のピンチ）。肯定的な応答の場合には1.7を参照してください。 </li><li>両眼の下蓋をプルダウンして、乾燥やさらなる刺激を防止するために、まぶたに軟膏を少量を適用します。 </li><li> 、20 Gbutterflyのvenflon（20 G血管カテーテル）と横方向の耳静脈にカテーテルを挿入粘着テープで固定し、0.9％塩化ナトリウム（500ミリリットル/ 24時間）およびケタミン（40ミリグラム/ kg /時間）を含む重力バッグに接続する持続静脈内（IV）麻酔用/キシラジン（4 / kg /時間）。追加の鎮痛薬を15分毎に静脈（フェンタニル、1マイクログラム/ kg）を管理します。注意：CPPの低下と関連している揮発性のガス麻酔薬、CBFを増加し、酸素が ​​脳代謝率を低下させるの回避11静脈麻酔薬が脳研究する最上重要であり、CBF、脳血管収縮、12を保存することにより、脳神経外科麻酔のためのより理想的な特性を提供する。血管攣縮。加えて、死亡率がSPONTで増加するもののaneously動物呼吸、それはより良い急性SAHのヒトの状況を模倣することがあります。 </li><li>呼気終末二酸化炭素（ETCO 2）監視を可能にする呼吸マスクを介して- （2L /分1）酸素吸入を行う。 </li><li>ウサギの腹側の三角形の配置で3チャネル心電図（ECG）.Place 3皮下電極をインストールします。具体的には、両方の手足に分布下腹部に二つの電極（鎖骨下動脈カニューレ挿入のための無菌剃らフィールドまでの距離で）右midthoracic領域上に一方の電極を配置します。 </li><li>呼吸速度に追従して、手術中の麻酔深度を15分毎に監視し、心拍数（HR）は、ECG信号から監視し、侵害刺激に対する反応。 </li><li>侵害刺激に対する肯定応答（つま先ピンチ）の場合は、ケタミンボーラスによって麻酔深度を適応させる（6ミリグラム/ kg）を静脈内およびキシラジンボーラス（0.05ミリグラム/ kg）を静脈内および/またはフェンタニル（1 MCでさらに鎮痛ボーラスグラム/ kg）を静脈内</li><li>ダウンヘッド20°に傾けると鎖骨下動脈が露出される側に対側に少し回転、ボディ温暖化プレート上の仰臥位でウサギを修正しました。 </li><li>眼軟膏を適用し、鎖骨の中央3分の周りの右胸筋の上、およびfrontal-、parietal-と後頭部頭蓋骨、首の上に、右大腿動脈の上の毛を剃ることにより、手術の領域を用意。 </li><li>防腐剤、広域スペクトル、 例えば 、ポビドンヨードで3分間の皮膚を消毒。 </li><li>無菌シートウサギをカバー。無菌条件下でさらなるすべての手順を実行し、頻繁に局所的に血管の操作や地元の感染によって動脈血管攣縮を防ぐために、HClおよび抗生物質溶液（硫酸ネオマイシン5 mg / ml）をパパベリン4％を適用します。 </li><li>局所麻酔薬（リドカイン1％の最大6ミリグラム/ kg）で胸筋潜入。胸骨皮膚切開を行い、準備を胸筋。顕微鏡を使用して、鎖骨下動脈を解剖し、露出端の周り近位および遠位合字（4-0 polyfilament縫合糸）で固定します。カテーテルを確保し、遠位に容器を連結する場所に近い端の制御に1合字にしてください。 </li><li>湾曲したmicroscissorで動脈を切開することによって鎖骨下動脈の壁に動脈切開を行い、小血管内三方活栓に逆行鎖骨下動脈にカニューレを挿入。動脈の近位部の動脈ねじれや曲がりを防ぎ、滑りや大量出血を回避するために、遠位合字に向かってダブルノット結紮によってカテーテルを固定します。 </li></ol> 2血圧や動脈血ガスモニタリング<ol><li>動脈血ガス（ABG）用の血管内カニューレは、pHが、PACO 2、のPaO 2、重炭酸塩、塩基過剰、およびSO 2、ⅱ）侵襲動脈血を分析）をiに3方コックを接続します圧力測定装置、およびiii）シャント装置。 </li><li> ABGステータスの血液サンプルを（パコ2のPaO 2）を収集し、連続的にアナログアナログ出力インタフェースを介して、標準的な心血管及び呼吸パラメータ（血圧、心拍、ECG、呼吸数および呼吸終期CO 2）と転送データを監視デジタル·コンバータ/データロガーとストア。 注：圧力が前と各セッションの後に心臓レベルでゼロにされ、シリーズが始まる前に、アナログ/デジタル変換器とデータロギングシステムの圧力校正は一回行われます。 </li></ol> 3ベースラインデジタルサブトラクション血管造影<ol><li>血管造影を校正するために、両方の下顎角にわたって外部サイジング装置（小球）を配置します。 注：これは、ベースラインの事後測定値の正確な比較を可能にし、血管径をフォローアップ。 </li><li>逆行内aでデジタルサブトラクション血管造影（DSA）を実行非イオン性イオパミドールのrterialボーラス注入カニューレを挿入し動脈を通る（0.6ミリリットル/ kgで、2秒、5ミリリットル/秒）、後者の閉塞を防止するために、生理食塩水ボーラス注射の直後にカニューレをフラッシュ。 </li><li> 5°、左前方の斜めの位置に迅速なシーケンシャル血管造影記録を使用して、椎骨システムの画像（14秒7イメージ）を取得します。 </li><li>局所麻酔薬（リドカイン1％、最大で6ミリグラム/ kg）で右総大腿動脈の周りの領域を潜入。小さな鼠径皮膚切開を行います。可視化のための顕微鏡を用いて、総大腿動脈を解剖し、露出端の周りの近位および遠位合字（4-0 polyfilament縫合）で固定します。 </li><li>動脈切開後、5-Fシースと大腿動脈にカニューレを挿入。生理食塩水でシースのサイドポートをフラッシュします。 </li><li> X線透視下でシースを通して腕頭動脈内に5-Fカテーテルを進める。目にガイドワイヤを進めるその後、ロードマップを作成します。電子椎骨システム。ステップ3.2で説明したように、DSAのための非イオン性イオパミドール（0.6ミリリットル/ kgで、2秒での5ミリリットル/秒）のボーラスを注入。 </li></ol>腹臥位に4回転<ol><li>ベースラインDSAに続いて、仰臥位から​​腹臥位にウサギを再配置する。動脈内のカテーテルの位置を操作したり、再配置しないように注意してください。 </li><li>ダウン頭を重視、30°の角度でヘッドホルダーヘッドを置きます。 </li></ol> 5。大槽穿刺<ol><li> 1分ごとに、ポビドンヨード3回で頭と首の上の皮膚を消毒し、滅菌シーツ手術領域をカバーしています。 </li><li>事前の皮膚切開や筋肉のずれなく経皮大槽内に22 Gのx 40ミリメートル小児脊髄アクセス針を挿入します。 </li><li>動物が完全に骨の外後頭隆起に沿って針を滑り落ちる前に、つま先のピンチ応答の欠如を確実にすることによって麻酔していることを確認してくださいギャップが検出されるまで;それ以上の針をプッシュしないでください。 </li><li>少数分間20°の角度で下方に傾斜したウサギの頭部に脳脊髄液の自発的な滴下を観察することによって、針の正確な位置を確認してください。 </li></ol>頭蓋内圧と脳血流のモニタリング6。インストール<ol><li>正中線皮膚や帽状切開した後、小さな手術用リトラクターを挿入します。 </li><li>嗅球とneuromonitoringデバイスを配置するための二国間の前頭場合の上、外側頭蓋骨のランドマーク（ 図1）9、 すなわちに従って頭蓋骨の正面部分の高速マイクロドリルを使用して、3ラウンドの骨切り術（直径2mm）を作る必要に応じて。次のようにバーホールの配置の座標を決定するために、ミリメートルスケールの定規を使用します。midpupillaryラインの頭蓋内圧（ICP）の監視、正中矢状線から1〜2ミリメートル;実質内レーザードップラープローブ4〜5ミリメートルの前方およびブレグマの側方（ 図1）。 </li><li>硬膜を視覚化し、細心の止血を行います。そのタンポナーデ作用により骨止血用の骨ろうを使用し、硬膜のバイポーラ凝固を使用してローカル止血を行う。 </li><li>実質内頭蓋内圧（ICP）2ミリメートルの深さまで右嗅球にヒントを監視し、キャリブレーションを配置します。 </li><li>外部クランプ·システムを使用して2レーザードップラーフローメトリ細い針プローブを置き、左右の前頭半球の両方が脳脊髄液との干渉を避けるために、正中線で、脳室系、 すなわちに横に対応したバーホールに挿入してください。 2.5mmの深さまで針プローブを配置します。 </li><li> neuromonitoringプローブを配置した後、頭蓋の流体密封を維持するために骨ろうの厚いプラグのすべてのバリ穴をシール。 </li><li>平均動脈血圧のベースラインパラメータを測定（MAP）、ICPおよびマルチパラメータモニタと4チャンネルレーザードップラー組織血灌流モニターを使用して脳血流量（CBF）。 </li></ol> 7。シャント誘導<ol><li>血液で満たされた圧力モニタリング管を介して以前にカテーテルを挿入鎖骨下動脈に、大槽内、脊髄アクセス針を接続します。血圧測定のための採血ポートに三方活栓を使用する。 NOTE：SAHの重症度は、血液の量に依存し、ほぼ脳収穫5,11時のくも膜下凝血塊の広大によって推定することができる。 </li><li>継続的SAH後少なくとも20分まで前に6分〜1Hzのサンプリングレートで、MAP、HR、心電図、呼吸数や呼吸終期CO 2を監視します。 </li><li>動物が完全に鎖骨下動脈と大槽圧力gradieによるSAHを誘導するために間にシャント接続を開く前に足指のピンチ応答の欠如を確実にすることによって麻酔していることを確認してくださいNT。 NOTE：（ たとえば 、ICPの所望のレベル）に制御SAHは、任意の時点でシャントを閉じることによって達成することができる。 </li><li>約15分の期間中に定常状態の値を記録する。 </li><li> ICPはそのピークに達した後、ICPは、ベースライン値に近い定常状態に戻るまで、所定の位置に脊椎アクセス針を保持します。 ICP高原以上10秒間維持されるか、またはICPは自然に減少した場合、シャントを閉じます。された場合</li><li> 、（連続的な出血カテーテル操作が高い罹患率と死亡率と関連し、感染率が増加しているため、鎖骨下カテーテルを含む）すべてのカテーテルを取り外し、骨ろうでバー​​ホールを差し込み、CBF細針プローブおよびICPプローブを削除した厳格な創傷洗浄を行う硫酸ネオマイシンと皮膚を縫合。 </li></ol> 8。術後管理<ol><li>手順は約2時間持続する。原因ケタミンおよびキシラジン、アニマの回復時間の半減期に約1時間 - lはかなり短いです。動物は、回復時の加熱ランプの下で保持されます。追加の流体が供給されない。この最初の術後の回復期の間、ブプレノルフィン0.02ミリグラム/ kg皮下24時間毎に8時間適用されます。 </li><li>次の72時間にわたって効果的な鎮痛のための動物の毛を剃り、首領域において12.5μgの/時間を解放する経皮フェンタニルマトリックスパッチを適用します。 </li><li>それは胸骨横臥位を維持するのに十分な意識を取り戻したまでは無人の動物を放置しないでください。 </li><li>完全に回復するまで、他の動物の会社で手術を受けた動物を返さないでください。 </li></ol> 9。3日目でDCVSを評価するために、デジタルサブトラクション血管造影をフォロー<ol><li>前述したように、ステップ1.1〜3.6を実行してください。 </li><li>ナトリウムthiopenthalの動脈内ボーラス注射（40 mgの/ kg）を（ペントタール、Ospedalia AG、Hünenberg、スイス）により動物を安楽死させる。例組織学およびimmunohistでochemistry必要とされる100センチのH 2 Oの灌流圧でRTで心臓内灌流固定を行う</li></ol>

<ol><li>Taylor, T. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lifetime+cost+of+stroke+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%3B+a+journal+of+cerebral+circulation%22%5BJournal%5D)">Lifetime cost of stroke in the United States.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 27, 1459-1466 (1996).</li>
<li>Kikkawa, Y., Kameda, K., Hirano, M., Sasaki, T., Hirano, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+feedback+regulation+of+the+receptor+activity+and+the+myofilament+Ca2%2B+sensitivity+contributes+to+increased+vascular+reactiveness+after+subarachnoid+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+cerebral+blood+flow+and+metabolism+%3A+official+journal+of+the+International+Society+of+Cerebral+Blood+Flow+and+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Impaired feedback regulation of the receptor activity and the myofilament Ca2+ sensitivity contributes to increased vascular reactiveness after subarachnoid hemorrhage.</a> Journal of cerebral blood flow and metabolism : official journal of the International Society of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 30, 1637-1650 (2010).</li>
<li>Marbacher, S., Fandino, J., Kitchen, N. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standard+intracranial+in+vivo+animal+models+of+delayed+cerebral+vasospasm%5BTitle%5D)+AND+%22British+journal+of+neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Standard intracranial in vivo animal models of delayed cerebral vasospasm.</a> British journal of neurosurgery. 24, 415-434 (2010).</li>
<li>Marbacher, S., Neuschmelting, V., Graupner, T., Jakob, S. M., Fandino, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+delayed+cerebral+vasospasm+by+continuous+intrathecal+infusion+of+glyceroltrinitrate+and+nimodipine+in+the+rabbit+model+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Intensive+care+medicine%22%5BJournal%5D)">Prevention of delayed cerebral vasospasm by continuous intrathecal infusion of glyceroltrinitrate and nimodipine in the rabbit model in vivo.</a> Intensive care medicine. 34, 932-938 (2008).</li>
<li>Zhou, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+between+one-+and+two-hemorrhage+models+of+cerebral+vasospasm+in+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Comparison between one- and two-hemorrhage models of cerebral vasospasm in rabbits.</a> Journal of neuroscience. 159, 318-324 (2007).</li>
<li>Vatter, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+course+in+the+development+of+cerebral+vasospasm+after+experimental+subarachnoid+hemorrhage%3A+clinical+and+neuroradiological+assessment+of+the+rat+double+hemorrhage+model%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Time course in the development of cerebral vasospasm after experimental subarachnoid hemorrhage: clinical and neuroradiological assessment of the rat double hemorrhage model.</a> Neurosurgery. 58, 1190-1197 (2006).</li>
<li>Lee, J. Y., Sagher, O., Keep, R., Hua, Y., Xi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+experimental+rat+models+of+early+brain+injury+after+subarachnoid+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Comparison of experimental rat models of early brain injury after subarachnoid hemorrhage.</a> Neurosurgery. 65, 331-343 (2009).</li>
<li>Marbacher, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+rabbit+model+for+the+study+of+early+brain+injury+after+subarachnoid+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neuroscience%22%5BJournal%5D)">A new rabbit model for the study of early brain injury after subarachnoid hemorrhage.</a> Journal of neuroscience. 208, 138-145 (2012).</li>
<li>Marbacher, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outer+skull+landmark-based+coordinates+for+measurement+of+cerebral+blood+flow+and+intracranial+pressure+in+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neuroscience+methods%22%5BJournal%5D)">Outer skull landmark-based coordinates for measurement of cerebral blood flow and intracranial pressure in rabbits.</a> Journal of neuroscience methods. 201, 322-326 (2011).</li>
<li>Marbacher, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extra-intracranial+blood+shunt+mimicking+aneurysm+rupture%3A+intracranial-pressure-controlled+rabbit+subarachnoid+hemorrhage+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+neuroscience%22%5BJournal%5D)">Extra-intracranial blood shunt mimicking aneurysm rupture: intracranial-pressure-controlled rabbit subarachnoid hemorrhage model.</a> Journal of neuroscience. 191, 227-233 (2010).</li>
<li>Sugawara, T., Ayer, R., Jadhav, V., Zhang, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+grading+system+evaluating+bleeding+scale+in+filament+perforation+subarachnoid+hemorrhage+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A new grading system evaluating bleeding scale in filament perforation subarachnoid hemorrhage rat model.</a> J Neurosci Methods. 167, 327-334 (2008).</li>
<li>Macdonald, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Delayed+neurological+deterioration+after+subarachnoid+haemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Neurology%22%5BJournal%5D)">Delayed neurological deterioration after subarachnoid haemorrhage.</a> Nature reviews. Neurology. 10, 44-58 (2014).</li>
<li>Zhang, Z. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Platelet-derived+growth+factor-induced+severe+and+chronic+vasoconstriction+of+cerebral+arteries%3A+proposed+growth+factor+explanation+of+cerebral+vasospasm%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Platelet-derived growth factor-induced severe and chronic vasoconstriction of cerebral arteries: proposed growth factor explanation of cerebral vasospasm.</a> Neurosurgery. 66, 728-735 (2010).</li>
<li>Laslo, A. M., Eastwood, J. D., Chen, F. X., Lee, T. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+CT+perfusion+imaging+in+subarachnoid+hemorrhage-related+vasospasm%5BTitle%5D)+AND+%22AJNR.+American+journal+of+neuroradiology%22%5BJournal%5D)">Dynamic CT perfusion imaging in subarachnoid hemorrhage-related vasospasm.</a> AJNR. American journal of neuroradiology. 27, 624-631 (2006).</li>
<li>Shao, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+tetramethylpyrazine+on+nitric+oxide%2FcGMP+signaling+after+cerebral+vasospasm+in+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research%22%5BJournal%5D)">Effects of tetramethylpyrazine on nitric oxide/cGMP signaling after cerebral vasospasm in rabbits.</a> Brain research. 1361, 67-75 (2010).</li>
<li>Bederson, J. B., Germano, I. M., Guarino, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortical+blood+flow+and+cerebral+perfusion+pressure+in+a+new+noncraniotomy+model+of+subarachnoid+hemorrhage+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%3B+a+journal+of+cerebral+circulation%22%5BJournal%5D)">Cortical blood flow and cerebral perfusion pressure in a new noncraniotomy model of subarachnoid hemorrhage in the rat.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 26, 1086-1091 (1995).</li>
<li>Veelken, J. A., Laing, R. J., Jakubowski, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Sheffield+model+of+subarachnoid+hemorrhage+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%3B+a+journal+of+cerebral+circulation%22%5BJournal%5D)">The Sheffield model of subarachnoid hemorrhage in rats.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 26, 1279-1283 (1995).</li>
<li>Zakhartchenko, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-mediated+transgenesis+in+rabbits%3A+chimeric+and+nuclear+transfer+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Biology+of+reproduction%22%5BJournal%5D)">Cell-mediated transgenesis in rabbits: chimeric and nuclear transfer animals.</a> Biology of reproduction. 84, 229-237 (2011).</li>
<li>Capecchi, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+targeting+in+mice%3A+functional+analysis+of+the+mammalian+genome+for+the+twenty-first+century%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Genetics%22%5BJournal%5D)">Gene targeting in mice: functional analysis of the mammalian genome for the twenty-first century.</a> Nature reviews. Genetics. 6, 507-512 (2005).</li>
<li>Flisikowska, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+immunoglobulin+gene+disruption+and+targeted+replacement+in+rabbit+using+zinc+finger+nucleases%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Efficient immunoglobulin gene disruption and targeted replacement in rabbit using zinc finger nucleases.</a> PloS one. 6, e21045(2011).</li>
<li>Nakajima, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+aging+on+cerebral+vasospasm+after+subarachnoid+hemorrhage+in+rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Effects of aging on cerebral vasospasm after subarachnoid hemorrhage in rabbits.</a> Stroke. 32, 620-628 (2001).</li>
</ol>

何一つ。著者は、使用された薬物、材料、または機器に対して金銭的または商業的利益を持っていません。この作業には特別な資金は提供されませんでした。著者は、提示された研究の設計と実施に対して単独で責任を負い、この研究で使用された材料と方法、または論文で指定された結果に関して利益相反を報告していません。彼らは倫理基準の順守を確認します。この研究は、実験動物の世話と使用に関する国立衛生研究所のガイドラインに従って、スイスのベルン州動物管理委員会の承認を得て実施されました (承認 #109/07 および #107/09)。

シャントモデルは、急性SAH 3,8,10後にヒトにおいて観察されたものと同様の病理を生成する。それはEBIは、悪化させるの維持、さらにはDCVS 12をトリガし、そのようなこのモデルはSAH後のEBIとDCVS相互作用を含む初期および後期DCVSフェーズ、の両方を調査するのに役立つ可能性があることが示唆されている。具体的には、DSA 13、コンピュータ断層撮影血管造影14、および経頭蓋ドップラー15を含む反復可能なin vivoでの DCVSモニタリング技術は、より小さなreadibly実験動物よりも、ウサギにおいて適用される。審査官に依存しない自発的SAHを可能にすることに加えて、モデルは、ユーザが、重症度の程度が異なるために（血液またはICPの量、および脳灌流圧の結果としての変化）を制御することができます。 最も重要なことは、非常に、一貫性のある再現性があり、病態生理学的には、このモデルの結果は、急性SAH後のイベントのコースを適応。再出血<html...

くも膜下出血（SAH）は、頻繁に永続的な神経障害や死につながる1、神経病理学的な条件を脅かす最も生命の一つです。過去の研究では、SAH 2に関連する神経障害の主要な病因として、遅延脳血管攣縮（DCVS）に焦点を当てている。しかし、血管痙攣の治療後にSAHに罹患している患者の一般的に不良な臨床転帰は、SAH 3後早期脳損傷（EBI）の影響を含めるための研究の焦点の拡大をもたらした。 SAH後の不良な臨床転帰に貢献するEBIとDCVS両方の重要性の理解は、より効果的な治療戦略の開発に不可欠である。 これまで、大槽へのシングルとダブルの自己血注入はDCVS 2-6の研究のためのSAH誘導のための標準的な方法であった。一般的に、以前の研究で使用されているが、このモデルは最も可能性の高いEBI 7誘発性SAHに関連した神経病理学主要な変更点を再現していません。対照的に、血管穿孔を部分的EBI 7の症状を模倣する重度の急性病態生理学的変化を生じることが知られている。 このレポートでは、SAHの新規ウサギモデルが記載された技術では、標準的な大槽モデルは動脈系を接続することにより適合されている。それによって、SAH誘発性病理8-10のより正確な特性評価が可能、EBIとDCVS両方の調査を可能にするように設計について説明します体外シャントを経由して鎖骨下動脈と大槽の。血流がそれによってウサギの生理機能にリンクされ、動脈血および頭蓋内圧との間の圧力勾配によって駆動される。脳内の圧力（ICP）は、拡張期血圧が等しく、シャントシステム内の血液が凝固する際の出血が停止します。ホスト＆＃を利用し8217;の生理機能を確実EBIとDCVS両方の表現型3,8-10を生産SAHのより一貫性のあるモデルにつながる、審査官依存のSAH誘導を低減します。

<table><tbody><tr><td>機器</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>手術用顕微鏡</td><td>ツァイス、イェーナ、ドイツ</td><td></td><td>ツァイス、OPMI-MD 手術用顕微鏡</td></tr><tr><td>手術機器</td><td>B. ブラウン、ドイツ</td><td></td><td>鉗子 医療番号 5; 血管はさみ 8 cm; マイクロクリップ 4 mm</td></tr><tr><td>マスク</td><td>ヒューゴ・ザックス</td><td></td><td></td></tr><tr><td>バリカン</td><td>3M 手術用クリッパー&nbsp;</td><td></td><td>スターターキット 9667A</td></tr><tr><td>ボディウォームプレート</td><td>FHC</td><td></td><td></td></tr><tr><td>血液ガス分析装置</td><td>放射計、コペンハーゲン、デンマーク</td><td>ABL 725</td><td></td></tr><tr><td>心臓モニタリング</td><td>カミノ マルチパラメータモニター、インテグラ、プレインズボロ、ニュージャージー州、米国</td><td>AP-05</td><td></td></tr><tr><td>ソフトウェア分析</td><td>BIOPAC Systems, Inc., Goleta, CA, USA</td><td></td><td>Biopac MP100 および acqKnowledge ソフトウェア、バージョン 3.8.1</td></tr><tr><td>ソフトウェア分析</td><td>ImagePro Discovery, MediaCybernetics, Silver Spring, MD, USA</td><td></td><td>Image-Pro Plus version&nbsp;</td></tr><tr><td>血管造影装置</td><td>DFP 2000 A-Toshiba</td><td>MIIXR0001EAA</td><td></td></tr><tr><td>ICPモニター</td><td>Camino Laboratories, San Diego, CA, USA</td><td></td><td>ICPモニター, Model 110-4B</td></tr><tr><td>血流モニター</td><td>Oxford Optronix Ltd., Oxford, UK</td><td></td><td>CAL KIT マイクロスフェアソリューション</td></tr><tr><td>レーザー・ドップラー流量測定法細針プローブ</td><td>Oxford Optronix Ltd., Oxford, UK</td><td></td><td>MNP110XP, 0.48 mm Diameter</td></tr><tr><td>圧力管</td><td>B. Braun, Germay</td><td></td><td>PE 1.0 mm &times; 2.0 mm</td></tr><tr><td>麻酔モニター</td><td>GE Medical Systems, Switzerland&nbsp;</td><td></td><td>Datex S5 モニター</td></tr><tr><td>材質</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>20 G 血管カテーテル</td><td>Smiths Medical</td><td></td><td>Jelco i.v. カテーテル, REF 4057</td></tr><tr><td>5.5 F 3 ルーメン中心静脈カテーテル&nbsp;</td><td>コネクタ、ターゲルスヴァンゲン、スイス</td><td></td><td>シリコンカテーテル STH-C040</td></tr><tr><td>22 G x 40 mm 針&nbsp;</td><td>Emergo Group Inc., Netherlands</td><td></td><td></td></tr><tr><td>High-speed microdrill</td><td>Stryker, Solothurn, Switzerland</td><td>5400-15&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>骨ワックス</td>エ<td>チコン、ジョンソン&Johnson,NJ, USA</td><td>ETHW31G</td><td></td></tr><tr><td>双極鉗子</td><td>Aesculap, Inc., PA, US</td><td>US349SP&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>ケタミン</td><td></td><td></td><td>任意のジェネリック製品</td></tr><tr><td>キシラジン</td><td></td><td></td><td>任意のジェネリック製品</td></tr><tr><td>ブプレノルフィン</td><td></td><td></td><td>任意のジェネリック製品</td></tr><tr><td>フェンタニル</td><td></td><td></td> 任意の<td>ジェネリック製品</td></tr><tr><td>経皮フェンタニルマトリックスパッチ&nbsp;</td><td></td><td></td><td>任意のジェネリック製品</td></tr><tr><td>リドカイン 1%&nbsp;</td><td></td><td></td><td>任意のジェネリック製品</td></tr><tr><td>4%パパベリンHCl&nbsp;</td><td></td><td></td><td>任意のジェネリック製品</td></tr><tr><td>硫酸ネオマイシン&nbsp;</td><td>Research Organics Inc., OH, USA</td><td></td><td>任意のジェネリック製品</td></tr><tr><td>ポビドンヨード&nbsp;</td><td></td><td></td><td>任意のジェネリック製品</td></tr><tr><td>0.9% 塩化</td><td></td><td></td>ナトリウム 任意の<td>ジェネリック製品</td></tr><tr><td>イオパミドール&nbsp;</td><td>Abott Laboratories, IL, USA</td><td></td><td>任意のジェネリック製品</td></tr><tr><td>3-0 吸収性縫合</td>糸 <td>Ethicon Inc., USA</td><td>VCP824G</td><td></td></tr><tr><td>5-0 非吸収性縫合</td>糸 <td>Ethicon Inc., USA</td><td>8618G</td><td></td></tr><tr><td>4-0 polyfilament sutures</td><td>Ethicon Inc., USA</td><td>VCP284G</td><td></td></tr></tbody></table>

くも膜下出血の急性および後期後遺症の研究のためのウサギの血液シャントモデル：技術的側面

The Rabbit Blood-shunt Model for the Study of Acute and Late Sequelae of Subarachnoid Hemorrhage: Technical Aspects

初期の脳損傷および遅延脳血管攣縮の両方が、くも膜下出血（SAH）後に不利な結果に貢献しています。両方の条件をシミュレートし、再現可能かつ制御可能な動物モデルは、現在、まれである。したがって、新しいモデルはSAHに起因するヒトの病態生理学的状態を模倣するために必要とされる。 このレポートでは、脳内の圧力（ICP）の制御を可能にウサギ血液シャントSAHモデルの技術的なニュアンスを説明しています。体外シャントは、動脈系と閉じた頭蓋内、検者に依存しないSAHを可能にくも膜下腔、の間に配置される。ステップバイステップの手続きの手順や必要な機器が記載されているだけでなく、技術的な検討事項最小限の死亡率および罹患率を持つモデルを生成する。この堅牢シンプルで一貫性のICP-制御SAHのウサギモデルの成功の外科的作成に必要な重要な詳細が説明されている。

SAHのウサギ血液シャントモデルは、このレポートに記載されて負傷した後、早ければ24時間として、海馬（ 図2A、B）、基底皮質（ 図2A、B）及び脳血管系（ 図2C）でEBIを生成し、特性を示している血液分布（ 図2D）8。また、モデルはSAH誘導後3日目（ 図3）10 日にDCVS重度の度に中程度をトリガします。急性SAH時の呼吸停止または重度の徐脈が原因で30％ - 死亡率は20です。ほとんどすべてのウサギは1日目からの神経学的欠損の進行悪化を示して- 。3〜10を 、その時点で動物は完全に麻酔下である。技術的な観点から、血液シャントモデルは、両方の審査官に依存せず、制御可能なSAH誘導（ 図4）が可能になります。 1再 "FO：コンテンツ幅=" "幅=" 600 "S...

ウサギの実験的な頭蓋内圧制御血液シャントくも膜下出血(SAH)モデルは、標準的な手順を組み合わせたものです - 鎖骨下動脈カニューレ挿入と経皮的槽大腸穿刺術は、SAH後のヒトの病態生理学的状態を厳密に模倣することを可能にします。私たちは、実験的なSAH作成を成功させるためのステップバイステップの指示を提示し、主要な外科的ポイントについて説明します。

Early brain injury and delayed cerebral vasospasm both contribute to unfavorable outcomes after subarachnoid hemorrhage (SAH). Reproducible and ...

この手順の全体的な目標は、ウサギの検査官に依存しない頭蓋内圧、または ICP 制御血液シャント、急性くも膜下出血、または SAH モデルを確立することです。これは、最初に鎖骨下動脈をカニューレで挿入することによって達成されます。2番目のステップでは、デジタルサブトラクション血管造影が行われ、次に神経モニタリングプローブと脊椎アクセス針が最終ステップに配置されます。脊椎アクセス針と鎖骨下動脈はシャントに接続され、検査官が誘導し、独立したICP制御の急性SAH、最終的にはICP脳血流、またはCBFおよび急性SAHに対する動物の心肺応答を監視できます。この方法は、早期の脳損傷や遅延した脳血管標本が分娩不能の転帰と死亡率にどのように寄与するかなど、神経血管分野の重要な質問に答えるのに役立つ可能性があります。動脈瘤性スービック出血後 まず、鎮静剤を投与したウサギを仰臥位に置き、前足と後足の両方を手術面に固定します。3チャンネルの心電図をそのまま取り付けます。ウサギの腹側に三角形の形に3つの皮下電極を配置します。次に、鎖骨の中央3分の1の周りの右絵筋の上のポビドンヨウ素または同様のもので皮膚を消毒し、動物を滅菌シートで覆います。局所麻酔薬で胸筋に浸潤した後、横方向の皮膚横部切開を行い、胸筋を露出させます。鎖骨下動脈が視覚化できるようになるまで、鈍的解剖によって筋線維を上下に分割します。次に、顕微鏡下で、2 つのまっすぐなマイクロ鉗子を使用して鎖骨下動脈を解剖し、遠位に結紮し、4 つの O ポリフィラメント縫合糸と湾曲したマイクロ鉗子を使用して、露出した近位端の周りに結紮糸を配置します。次に、湾曲したマイクロハサミを使用して鎖骨下動脈の壁を切開し、動脈の逆行性をカニューレします。次に、ダブルノット結紮糸でカテーテルを近位結紮糸に向けて固定し、さらに、動脈の近位部分の動脈のねじれや曲がりを防ぎ、滑りや大量出血を避けるために、ダブルノット結紮糸でカテーテルを遠位結紮糸に向けて固定します。次に、動脈血ガス分析状態の血液サンプルを収集し、標準的な心血管および呼吸器パラメータを継続的に監視します。下顎骨の角度に外部サイジング装置を配置して、血管造影を校正し、ベースラインとフォローアップ血管の直径の事後測定を正確に比較できるようにします。次に、カニューレ挿入された動脈を介して非イオン性IOP IOLの逆行性動脈内ボーラス注射を行い、すぐにカニューレを生理食塩水で洗い流して、はしごの閉塞を防ぎます。ベースラインのデジタルサブトラクション血管造影に続いて、動脈内カテーテルを操作したり再配置したりしないように注意しながら、ウサギを腹臥位に再配置します。動脈血圧モニタリングを接続し、心電図、動脈血圧、末梢酸素飽和度、呼気二酸化炭素、深部体温など、標準的な心血管および呼吸器パラメータの継続的なモニタリングを開始します。アナログ出力インターフェースを介してデータをアナログデジタルコンバーターデータロガーに転送して保存します。頭を30度の角度で下向きにホルダーに置き、頭と首の上の皮膚をポビドンヨードで3回、それぞれ1分間消毒します。新しい手術領域を滅菌シートで覆った後、正中線の皮膚を切開します。小さな外科用リトラクターを挿入して、外側の頭蓋骨のランドマークに従って3つの円形の骨切り術を行い、神経モニタリングプローブを校正します。頭蓋間圧と実質間レーザードップラー血流ニューロモニタリングチップを配置し、骨ワックスでバーの穴を塞いで頭蓋液をしっかりと保ち、頭蓋骨を閉じた状態にして、I-C-P-C-P-PとMAPの安定した状態を維持します。次に、22ゲージ40ミリメートルの小児脊椎アクセス針を経皮的に大槽に挿入します。次に、隙間が検出されるまで、針を骨の外部後頭部に沿って下にスライドさせます。うさぎの頭を20〜30度の角度で数分間下に傾けた状態で、脳脊髄液の自発的な滴下を観察して、針の正しい位置を確認します。次に、血液で満たされた圧力モニタリングチューブを使用して、大槽の脊椎アクセス針を、以前にカテーテルを挿入した鎖骨下動脈に取り付けられた三方向ストップコックに接続します。次に、鎖骨下動脈とCI大胸骨との間のシャント接続を開き、くも膜下出血を誘発します。シャントを開いた後、頭蓋内圧は拡張期血圧に近い値まで上昇し始めます。その際、頭蓋間プラトーが10秒以上維持された場合、または圧力が自然に低下した場合は、頭蓋間圧がピークに達した後にシャントを閉じ、圧力がベースライン値に近い定常状態に戻るまで脊髄アクセス針を所定の位置に保持します。最後に、脳血流の細い針と頭蓋内圧プローブを取り外します。骨の穴を骨ワックスで塞ぎ、硫酸ネオマイシンを使用して厳密な創傷洗浄を行い、皮膚を縫合します。まず、バーの穴に皮膚を縫合します。次に、ウサギを仰臥位に再配置し、鎖骨下動脈カテーテルを抜去した後、胸筋と皮膚を縫合します。本報告で報告したSAHの狂犬病性血液シャントモデルは、海馬基底皮質に早期脳損傷を生じ、損傷後24時間という早い時期に脳血管系を生じさせ、特徴的な血液分布を誘導する。さらに、このモデルは、3日目に中等度から重度の遅延脳血管痙攣を引き起こします。SAH導入後、動物が完全麻酔下にある急性SAHの時点での呼吸停止または重度の徐脈により、この手順の死亡率は約20%です。技術的な観点から見ると、この血液シャントモデルにより、検査官に依存しない制御可能なSAH導入が可能になります。この手順を試みるときは、このサブクラボン動脈をしっかりと固定し、素晴らしい車に乗って動物を再配置し、サイ胸骨鍼治療中は非常に穏やかで忍耐強くあることを覚えておくことが重要です。

the-rabbit-blood-shunt-model-for-study-acute-late-sequelae

Research

JoVE Journal

Medicine

医学

分岐人間の脳動脈瘤を模倣する動脈分岐部動脈瘤の顕微作成のための最適化手法が説明されています。静脈のポーチは、両方の総頚動脈の人工的に作られた真の分岐部に縫合する。容易に顕微技術と積極的な術後の抗凝固療法と鎮痛が最小化罹患率と高い動脈瘤の開存率につながる。...

ウサギモデルにおける顕微静脈ポーチ動脈 - 分岐瘤：技術的側面

動脈瘤性くも膜下出血（SAH）は時動脈瘤破裂くも膜下腔に発生する出血です。このイベントの罹患率と死亡率が改善された治療アプローチのために減少傾向にあったが、くも膜下出血後の脳血管攣縮のリスクは、それが数年前と同じであり続けている。脳血管攣縮の開始事象を識別するために、包括的かつ再現可能な動物モデルを確立することの重要性は、バリーが1979年に実験的脳血管攣縮モデルにおけるラットの最初の使用以来、研究の焦点となっている...

実験的くも膜下出血後の脳血管攣縮遅延を評価するための低死亡率のラットモデル

このビデオでは、くも膜下出血ラットモデルを確立する手順を示しています。麻酔をかけたラットにプローブを埋め込み、頭蓋内圧と脳血流を測定します。標的部位が特定され、針が視交叉前位置に挿入されます。その後、くも膜下腔に自家血液を注入し、頭蓋内圧を上昇させ、脳血流を減少させ、モデルを確立します。...

自家血液注射によるくも膜下出血ラットモデルの確立

ウィリス穿孔の管腔内サークルによるくも膜下出血の標準化されたマウスモデルが記載されている。血管穿孔やくも膜下出血は頭蓋内圧監視によって監視されています。さらに、種々の重要なパラメータが記録され、生理学的条件を維持するように制御される。...

くも膜下出血のマウスモデル

頭蓋内動脈瘤治療のための血管内装置の開発と試験は依然として非常に重要です。今日使用されているほとんどの動脈瘤モデルは、動脈変性壁の重要な特性または真の分岐の血行動態のいずれかを見逃している。そこで、ウサギにおける新規な動脈パウチ分岐模型の設計を目指した。...

ウサギの動脈ポーチ微小外科分岐動脈瘤モデル

我々は、このプロトコルにおいて、システルナマグナへの自家全血の二重注入による標準化されたくも膜下出血(SAH)マウスモデルを説明した。二重注入手順の高度な標準化は、死亡率に関する相対的な安全性を有するSAHの中急性モデルを表す。...

くも膜下出血のモデルとしての水槽マグナへの血液の二重直接注射

くも膜下出血は、ヒトにおける死亡率および罹患率の高い負担を負い続けている。状態とその病態生理学のさらなる研究を容易にするために、交叉前の単回注射モデルが提示されます。...

ラットモデルにおける実験的くも膜下出血を誘発するための自己血の交叉前単回注射

ここでは、血管内フィラメント穿孔によって誘導された標準化されたSAHマウスモデルを、手術後24時間で磁気共鳴画像法(MRI)と組み合わせて、正しい出血部位を確保し、他の関連する頭蓋内病変を排除する。...

くも膜下出血の血管内穿孔モデルと磁気共鳴画像法(MRI)の組み合わせ

継続的な動脈血圧記録により、さまざまな血行動態パラメータの影響を調査できます。このレポートは、脳卒中の病態生理学、さまざまな血行動態因子の影響、および新しい治療アプローチの評価を決定するための虚血性脳卒中の大型動物モデルにおける継続的な動脈血圧モニタリングの適用を示しています。...

虚血性脳卒中のウサギモデルにおける血圧のリアルタイムモニタリングと調節

我々は、神経内分泌機能と遅延の長期的、誇張された恐怖反応、PTSD患者の特性に永続的な変化を明らかにする心的外傷後ストレス障害（PTSD）のラットモデルを記述します。動物モデルとここで説明する方法は、機械論的であるが、末梢白血細胞におけるバイオマーカーと、患者で測定することができない脳核中のバイオマーカー、缶を相関させるために有用である。...

PTSDの、ニューラル血液学的および行動的相関関係を明らかにするための動物モデルにおけるバイオマーカー

学ぶウサギを用いたくも膜下出血の血液シャントモデル構築法。鎖骨下動脈カニューレーションと神経モニタリングにより、早期脳損傷と遅発性血管攣縮の病態生理を解明し、神経血管分野の重要な課題に答える。

くも膜下出血の急性および後期後遺症の研究のためのウサギの血液シャントモデル：技術的側面

さらに動画を探す