Name: Limbus-Ansatz-Subretinale Injektion von viralen Vektoren für die Gentherapie bei Mäusen Retinapigmentepithel (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-08-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 48 s
Description: Erfahren Sie die subretinale Injektionstechnik für Gentherapie im retinalen Pigmentepithel von Mäusen. Diese Methode ermöglicht effektiven Gentransfer mit viralen Vektoren für ophthalmologische Forschung.

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Diese Studie wurde von der Seoul National University Research Grant (800-20140542) unterstützt, der Pioneer Research Program der NRF / MEST (2012-0009544) und die Bio-Signalanalyse-Technologie-Innovations-Programm der NRF / MEST (2009-0090895), und die Gewährung von NRF / MEST (2015M3A9E6028949).

Alle Tierversuche wurden in Übereinstimmung mit der Association for Research in Vision and Ophthalmology Erklärung für die Nutzung von Tieren in Ophthalmic und Vision Research durchgeführt und die Richtlinien und Vorschriften von der Seoul National University Institutional Animal Care und Verwenden Committee und Seoul National dargelegt Universitätsklinikum Biosafety Committee. 1. Vorbereiten Injection Kit und Virale Vektoren <ol><li> Bereiten Sie die Mikroliter-Spritze mit einer 33 G stumpfen Nadel sterilisiert mit Ethylenoxid-Gas ausgestattet. Verdünnt den viralen Vektoren in PBS zur adäquaten Titer im Mikroröhre (dh 1 × 10 6 TU / ul). Spülen Sie die Spritze mehrmals mit viralen Vektoren, jede toten Raum in der Spritze zu entfernen. </li></ol> 2. Subretinale Injektion von viralen Vektoren <ol><li> Betäuben den erwachsenen Mäusen (dh, 6-8 Wochen alt) mit einer intraperitonealen Injektion der Mischung aus tiletamine und Zolazepam (1: 1, 2,25 mg / kg Körpergewicht) und Xylazin-Hydrochlorid (0,7 mg / kg Körpergewicht) oder eine alternative geeignete Anästhesie Regimes. </li><li> Erweitern sich die Schüler mit einem Auge Tropfen Phenylephrin 0,5% und 0,5% Tropicamid. </li><li> Bereiten Sie den Mikroliterspritze durch das Laden mit 1,5 bis 2 &amp; mgr; l von viralen Vektoren. </li><li> Öffnen Sie das Augenlid und stehen den Blick auf den Äquator zum bequemen Injektion freizulegen und sich auf unter dem Operationsmikroskop. Aufrechterhaltung der vorstehende Augenposition bis Beendigung der Injektion oder Verschiebung der Nadel während der Injektion ein. Um den Augapfel fest zu halten, legen Sie die Finger außerhalb des Augenhöhlenrand. </li><li> Einen Tropfen Augen viskoelastische Lösung, um die Hornhautoberfläche. </li><li> Setzen Sie einen kleinen runden Deckglas auf der Oberseite der Hornhaut, um die Netzhaut zu visualisieren. </li><li> Stechen ein kleines Loch an leichten hinter dem Limbus mit einer sterilen Nadel 30 G 1/2 für die weitere subretinale Injektion. Machen Sie das Loch unterlegen for das rechte Auge und überlegen für das linke Auge für die Bequemlichkeit. HINWEIS: Wenn das Loch an zeitliche oder Nasen gemacht, ist es schwer, durch das Augenlid nach der Injektion bedeckt sein. Punktion sollte etwas hinter dem Limbus, die Limbusgefäßen, die entlang des Limbus ausgeführt und kann leicht erkannt werden, zu vermeiden. Seien Sie vorsichtig, schlagen Sie das Objektiv mit Nadel und gleichzeitig die Punktion zu vermeiden. Nicht die gesamte Kegel der Nadel legen nicht auf Linsenpunktion zu vermeiden. </li><li> Legen Sie die 33 G stumpfen Nadel der Mikroliterspritze durch die Pre-Stichloch und nähern sich die Nadel in den subretinalen Raum bis zu dem Punkt, wenn mild Widerstand zu spüren ist. HINWEIS: Bei den subretinalen Injektion, der beste Ansatz Winkel der Nadel ist etwa 45 Grad gegen Iris Ebene und die stumpfe Nadel sollte nach hinten in Richtung peripapillären Bereich geschoben werden. Gepunktete Quadrat angezeigt die vorgeschlagene Nadel Weg über den Glaskörperraum für den subretinalen injection in 1. HINWEIS: Es wird kein Widerstand fühlte, als Piercing (oder Weitergabe) die Netzhautschichten, wie sie sind sehr weich. Somit wird das erste Gefühl einer leichten Widerstand zeigt an, dass die Nadel die RPE-Schicht bereits berührt wurde und die Einführung der Nadel gestoppt werden sollte. Achten Sie darauf, Skleragewebe mit Überdruck durchdringen, weil die Nadel in das Potenzial subretinalen Raum platziert werden. Wenn die Nadel in die Lederhautgewebe durch übermäßige Macht, tritt sie in den äußeren Augen orbitalen Bereiche ohne Widerstand. (Dieser Schritt ist kritisch) </li></ol><img alt="Abbildung 1" src="/files/ftp_upload/53030/53030fig1.jpg" /> Abbildung 1. Schematische Darstellung der Subretinale Injection. H &amp; E gefärbten Querschnitt der Maus Auge Darstellung der Strukturen mit einer Nadel Weg für den subretinalen Injektion markiert (eine gepunktete Quadrat). Vergrößerung: 40x, Maßstabsbalken:<html> 500 &amp; mgr; m. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53030/53030fig1large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Figur zu sehen.</a> <ol start="9"><li> Injizieren Sie den viralen Vektoren (dh 1 x 10 6 TU / ul) vorsichtig in den subretinalen Raum ohne Zittern um unerwünschte Gewebeschäden zu vermeiden und vorsichtig ziehen Sie die Nadel. Halten Sie den Augapfel fest während der Injektion, wie in 2.4 beschrieben. </li><li> Beachten Sie die Bildung von subretinalen Bläschen nach Injektion unter Operationsmikroskop, um sicherzustellen, gibt es keine Netzhautblutungen. </li></ol><img alt="Figur 2" src="/files/ftp_upload/53030/53030fig2.jpg" /> Abbildung 2. Subretinale Belb Formation ohne Netzhautblutungen. Mikroskopische Ansicht des subretinalen belb nach dem subretinalen Injektion unter Operationsmikroskop zeigt erfolgreiche bleb Bildung ohne Netzhautblutungen.m / files / ftp_upload / 53030 / 53030fig2large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Figur zu sehen. <ol start="11"><li> Schließen Sie vorsichtig das Augenlid auf die Injektionsstelle für selbstdicht decken. Bringen Sie die Maus mit nach Hause Käfig und am Leben zu erhalten, bis die Auswertung. Hinweis: Nach dem die Forscher erhalten den Verfahren verwendet werden, können sie die wiederholbare Ergebnisse mit Schnellverfahren durch Überspringen Sie diese Schritte erhalten (2,5, 6 und 10) </li></ol> 3. Bewertung der Wirksamkeit von Gentransfer in Retinapigmentepithel <ol start="1"><li> Opfern die Mäuse in der CO 2 Kammer. Entkernen die Augen mit einer Schere. </li><li> Fixieren die Augen in der 4% Paraformaldehyd-Lösung bei 4 ° C für mindestens 1 Stunde bis einige Tage. </li><li> Besorgen Sie sich die Hornhaut mit feinen Pinzetten und Punktion der Hornhaut mit Mikro-Schere. Entfernen Sie die Hornhaut nach scissoring entlang des Limbus. Nehmen Sie den Objektiv mit einer Pinzette. </li><li> Schneiden Sie die Ziliarkörper mit micro-Schere ermöglicht Netzhautablösung. Ziehen Sie die gesamte Netzhaut von der RPE / Aderhaut / Lederhaut-Komplex. Schneiden Sie den RPE / Aderhaut / Lederhaut-Komplex radial von der Peripherie zum Zentrum in der Nähe des Sehnervs mehrmals, um 4 bis 8 Blätter für flache Montage machen. </li><li> Klappen Sie den RPE / Aderhaut / Lederhaut-Komplex zu RPE Seite nach unten zu machen, und schneiden Sie die verbleibenden Gewebe an der skleralen Seite einschließlich der Muskeln, Bindehaut und Sehnerv. Dieser Schritt ist wichtig, um eine flache RPE / Aderhaut / Lederhaut-Komplex zu machen, weil der verbleibende Gewebe macht die komplexe uneben. </li><li> Inkubieren Sie die Anlage mit primären und sekundären Antikörpers für Ihre spezielle Forschungszwecke (optional, siehe die Referenzen für detaillierte Methoden). Flach montieren RPE / Aderhaut / Lederhaut-Komplexe auf dem Objektträger und absorbieren die PBS mit einem saugfähigen Schwamm. </li><li> In 30 ul Montagelösung und legen Sie das Deckglas. Beachten Sie die Probe für die Wirksamkeit von Vektor-Lieferung unter Fluoreszenzmikroskop. Bewahren Sie die Proben inder Kühlschrank zur weiteren Beobachtung. </li></ol>

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<li>Rolling, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+therapeutic+prospects+in+early+onset+of+severe+retinal+dystrophy%3A+restoration+of+vision+in+RPE65+Briard+dogs+using+an+AAV+serotype+4+vector+that+specifically+targets+the+retinal+pigmented+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Bull+Mem+Acad+R+Med+Belg%22%5BJournal%5D)">Gene therapeutic prospects in early onset of severe retinal dystrophy: restoration of vision in RPE65 Briard dogs using an AAV serotype 4 vector that specifically targets the retinal pigmented epithelium.</a> Bull Mem Acad R Med Belg. 161 (10-12), 497-508 (2006).</li>
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<li>Alexander, J. J., Hauswirth, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adeno-associated+viral+vectors+and+the+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Adv+Exp+Med+Biol%22%5BJournal%5D)">Adeno-associated viral vectors and the retina.</a> Adv Exp Med Biol. 613, 121-128 (2008).</li>
<li>Puche, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+and+environmental+factors+associated+with+reticular+pseudodrusen+in+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Retina%22%5BJournal%5D)">Genetic and environmental factors associated with reticular pseudodrusen in age-related macular degeneration.</a> Retina. 33 (5), 998-1004 (2013).</li>
<li>Campochiaro, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+transfer+for+neovascular+age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Gene transfer for neovascular age-related macular degeneration.</a> Hum Gene Ther. 22 (5), 523-529 (2011).</li>
<li>Park, S. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+amyloid+beta+alters+the+tight+junction+of+retinal+pigment+epithelium+in+5XFAD+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Aging%22%5BJournal%5D)">Intracellular amyloid beta alters the tight junction of retinal pigment epithelium in 5XFAD mice.</a> Neurobiol Aging. 35 (9), 2013-2020 (2014).</li>
<li>Shin, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+cleavage+of+amyloid+beta+by+a+viral+protease+NIa+prevents+amyloid+beta-mediated+cytotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Intracellular cleavage of amyloid beta by a viral protease NIa prevents amyloid beta-mediated cytotoxicity.</a> PLoS One. 9 (6), e98650(2014).</li>
</ol>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

In diesem Video-Artikel beschrieben wir die Limbus-Ansatz subretinalen Injektionstechnik im Detail mit den repräsentativen Ergebnissen der RPE / Aderhaut / Lederhaut Flachmontage. Dies ist eine einfache und bequeme Technik zum subretinalen Injektion von viralen Vektoren in RPE. Direkte Visualisierung bleb Bildung während der Injektion ist ein wichtiger Schritt für die pünktliche Lieferung für die Anfänger. Es gibt einige subretinalen Injektionstechniken in Blatt eingeführt of Visualized Experiments 8-10. Subr...

In der Augenheilkunde hat die Gentherapie als Behandlungsmethode in monogenen geerbt Retinopathien entstanden. Es vererbt Retinopathien mit Genen im retinalen Pigmentepithel (RPE), einschließlich Leber angeborene amurosis 1,2, Retinitis pigmentosa 3 und choroideremia 4 verbunden. Das Forschungsfeld der Gentherapie erweitert in beiden präklinischen Studien und klinischen Studien unter Verwendung von viralen Vektoren, wie Adeno-assoziierte Virus (AAV), Lentiviren (LV) und Adenovirus (Ad) 5. Verschiedene virale Vektoren haben unterschiedliche Tropismus in der Netzhaut. Für eine sichere und wirksame Gentherapie, virale Vektoren sollten sorgfältig entsprechend Zielzellen und Zielgene ausgewählt werden. Die Route der Genübertragung ist auch wichtig für eine effektive Genübertragung an Zielzellen, so sollte es sorgfältig und ausgewählt werden. Die beiden am häufigsten verwendeten Methoden zur intraokularen Abgabe von viralen Vektoren sind SUBRETinal Einspritzung und intravitreale Injektion 6. Letztere, intravitreale Injektion, wurde weit verbreitet für die Arzneimittelabgabe verwendet werden, um CNV in feuchten altersbedingten Makuladegeneration (AMD) und Makulaödem bei diabetischer Retinopathie 7 behandeln. Intravitreale Route bietet Exposition viraler Vektoren zu glasigen und inneren Retina, sondern die Diffusion der Vektoren äußeren Netzhaut begrenzt ist. Auf der anderen Seite stellt die subretinale Route direkte Lieferung von viralen Vektoren zum Potential Raum zwischen Retina und RPE, Induzieren einer lokalisierten Bläschen. Daher wird subretinalen Injektion momentan als ein effizienter Weg für die gezielte Photorezeptorzellen und RPE. In Bezug auf die chirurgischen Ansatz, Pars plana als einen sicheren Bereich für die intravitreale Injektion gewählt, um Netzhautschäden in menschlichen Patienten zu vermeiden. Durch einfaches Ändern dieses Konzept für Mäuse, wir könnten virale Vektoren subretinal oder intravireally via Limbus-Ansatz zu injizieren. In diesem VideoArtikel zeigen wir eine einfache und bequeme Methode der subretinalen Injektion von viralen Vektoren in Mäuse RPE. Nach Einzelpunktion bei posterior zu Limbus mit einer 30 G 1/2 Nadel wird ein 33 G stumpfen Nadel ausgestattet Mikroliterspritze in den subretinalen Raum über den Limbus Einstichstelle eingeführt. Die viralen Vektoren 1,5-2 ul Volumen auf das Potential Raum zwischen Retina und RPE Induzieren subretinalen Bläschen injiziert. Dieser Vorgang kann unter direkter Sicht mit Operationsmikroskop durchgeführt werden. Wiederholte Praxis werden reproduzierbare Ergebnisse auch ohne direkte Visualisierung der Bläschenbildung zu gewährleisten. Dies soll dazu dienen, um eine genaue und zeitsparende Experimente zur subretinalen Gentransfer in Mäusen RPE durchzuführen.

<table><tbody><tr><td>PINZETTE DUMONT #5 11cm DUMOSTAR 0,1 x 0,06 mm TIPS</td><td>WPI</td><td>500233</td><td></td></tr><tr><td>VANNAS Schere F/S, 105 mm</td><td>WPI</td><td>555583S</td><td></td></tr><tr><td>33 G Blunt Nadel</td><td>WPI</td><td>NF33BL-2</td><td></td></tr><tr><td>NanoFil Spritze, 10 Mikroliter</td><td>WPI</td><td>NANOFIL</td><td></td></tr><tr><td>RPE-KIT</td><td>WPI</td><td>RPE-KIT</td><td>Für einfache Einhandinjektion</td></tr><tr><td>30 G x 1/2 (0,3 mm x 13 mm) BD PrecisionGlideTM Nadel</td><td>BD</td><td>305107</td><td>Initialpunktion für subretinale</td></tr><tr><td>Injektion Mikroskop-Deckglas (Nr. 1 3 mm Durchmesser)</td><td>Warner Instruments</td><td>64-0720&nbsp; (CS-3R)</td><td></td></tr><tr><td>Leica Operationsmikroskop</td><td>Leica</td><td>LM M80</td><td></td></tr><tr><td>Fluoresecein Mikroskop</td><td>Nikon</td><td>Eclipse 80i</td><td></td></tr><tr><td>Lentivirus</td><td>Thermo scientific</td><td>TMO. LV-Ctr</td><td>Zur Verdünnung von Vektoren</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Gibco</td><td>10010-015</td><td>Zur Verdünnung</td></tr> von <tr><td>Vektoren Troperin (Phenylephrin 0,5% - Tropicamid 0,5%)</td><td>Hanmi</td><td></td><td>Zur Dilatation</td></tr><tr><td>Proparacainhydrochlorid Ophthalmische Lösung USP, 0,5% (steril)</td><td>Bausch& Lomb</td><td></td><td>Für topische Anästhesie</td></tr><tr><td>Healon GV OVD</td><td>Abbott Medical Optics Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zoletil 50 (Tiletin Hypochlorid und Zolazepam Hypochlorid)</td><td>Virbac</td><td></td><td>Für die Allgemeinanästhesie</td></tr><tr><td>Rompun Injektion (Xylazin HCl)</td><td>Bayer</td><td></td><td>Für die Vollnarkose</td></tr></tbody></table>

limbus-ansatz-subretinale injektion von viralen vektoren für die gentherapie bei mäusen retinapigmentepithel

Limbal Approach-Subretinal Injection of Viral Vectors for Gene Therapy in Mice Retinal Pigment Epithelium

Das Auge ist ein kleines und geschlossenes Organ, was es zu einem idealen Ziel für die Gentherapie macht. In jüngster Zeit wurden verschiedene Strategien für die Gentherapie bei Retinopathien angewendet, bei denen nicht-virale und virale Genverabreichung an die Netzhaut und das retinale Pigmentepithel (RPE) verwendet werden. Die subretinale Injektion ist der beste Ansatz, um virale Vektoren direkt an RPE-Zellen zu liefern. Vor der klinischen Erprobung einer Gentherapie ist es unumgänglich, die Wirksamkeit der Therapie in Tiermodellen verschiedener Retinopathien zu validieren. So wird die subretinale Injektion bei Mäusen zu einer grundlegenden Technik für eine okuläre Gentherapie. In diesem Protokoll stellen wir die einfache und replizierbare Technik zur subretinalen Injektion von viralen Vektoren in experimentelle Mäuse zur Verfügung. Diese Technik ist modifiziert von der intravitrealen Injektion, die in Augenkliniken weit verbreitet ist. Die repräsentativen Ergebnisse der RPE/Aderhaut/Skleral-Komplex-Flat-Mount werden dazu beitragen, die Wirksamkeit dieser Technik zu verstehen und das Volumen und den Titer der viralen Vektoren an das Ausmaß der Gentransduktion anzupassen.

Um die Wirksamkeit der subretinalen Injektion auf virale Gen-Transduktion durch dieses Protokoll zu bewerten, haben wir im Handel erhältlich LV Vektoren mit CMV-Promotors exprimieren, sowohl GFP und RFP für den Indikator. Augen wurden nach der jeweiligen Zeitperiode nach dem Forschungszweck ausgeschält. Für die repräsentative Ergebnisse wurden die Augen 10 Wochen und 20 Wochen nach der subretinalen Injektion enukleiert. Nach vollständiger Entfernung der Netzhaut mit dem oben beschriebenen Verfahren wurde die Wohnung Ber...

Die subretinale Injektion ist eine chirurgische Technik zur effektiven Genabgabe an das retinale Pigmentepithel im Mausauge. Hier beschreiben wir eine einfache und replizierbare Methode zur subretinalen Injektion von viralen Vektoren in retinales Pigmentepithel bei Versuchsmäusen.

Limbus-Ansatz-Subretinale Injektion von viralen Vektoren für die Gentherapie bei Mäusen Retinapigmentepithel

The eye is a small and enclosed organ which makes it an ideal target for gene therapy. Recently various strategies have been applied to gene therapy in ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, ein Zielgen in das retinale Pigmentepithel einer lebenden Maus einzubringen. Dies wird erreicht, indem zunächst das Augenlid geöffnet und der Augapfel vorgeschoben wird, um den Äquator freizulegen. Die nächsten Schritte bestehen darin, ein kleines Loch hinter der Limbus zu erzeugen.Injizieren Sie die viralen Vektoren mittels einer abgestumpften Nadel in den subretinalen Raum und beobachten Sie die Bildung einer subretinalen Blase. Abschließend wird die Expression der fluoreszenten Marker, die durch das injizierte Virus in das retinale Pigmentepithel gebracht wurden, mittels Immunfluoreszenzmikroskopie nachgewiesen. Dies ist eine EEG- und praktische Technik zur subretinalen Injektion von viralen Vektoren in das retinale Pigment.Die visuelle Demonstration dieser Methode ist entscheidend, da die subretinale Injektionsprobe für die Lunge schwierig ist, besonders für Anfänger. Bereiten Sie zunächst eine Mikroliterspritze mit einer stumpfen Nadel der Größe 33 vor, die mittels Ethylenoxidgas sterilisiert wurde.Bereiten Sie als Nächstes eine Verdünnung der viralen Vektoren in PBS in einem Mikrozentrifugenröhrchen mit etwa einer Millio

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Research

Forschung

JoVE Journal

Neuroscience

Neurowissenschaften

Diese Operationstechnik veranschaulicht die Injektion von Gentherapie-Vektoren und Stammzellen in den subretinalen Raum des Auges Maus.

Subretinalen Injektion von Vektoren für die Gentherapie und Stammzellen in die Maus Eye

Quelle: Park, S. W., et al. Limbaler Zugang-Subretinale Injektion von viralen Vektoren für die Gentherapie im retinalen Pigmentepithel von Mäusen. J. Vis. Exp. (2015)Das Video beschreibt die Methode zur subretinalen Injektion von viralen Vektoren in das retinale Pigmentepithel (RPE) in einem Mausmodell. Es beschreibt das Verfahren von der Anästhesie und der Augenvorbereitung bis hin zur präzisen lentiviralen Vektorverabreichung, um die Genintegration und -expression im RPE sicherzustellen.

Subretinale Injektion von viralen Vektoren in das retinale Pigmentepithel in einem Mausmodell

Hier präsentieren wir ein von der Community akzeptiertes Protokoll im Multimedia-Format für die subretinale Injektion eines Bolus von RPE-Zellen in Ratten und Mäuse. Dieser Ansatz kann zur Bestimmung von Rettungspotenzialen, Sicherheitsprofilen und Überlebenskapazitäten von transplantierten RPE-Zellen nach Implantation in Tiermodellen der Netzhautdegeneration verwendet werden.

Darstellende Subretinale Injektionen in Nagetiere zu retinalen Pigmentepithelzellen in Suspension liefern

Subretinale Injektionen sind die gebräuchlichste Technik zur Verabreichung großer therapeutischer Wirkstoffe wie Proteine und viraler Vektoren an Photorezeptoren und das retinale Pigmentepithel. Eine alternative Methode bei Mäusen, die erfolgreich auf den subretinalen Raum mit minimalen Kollateralschäden und schnellen Erholungszeiten abzielt, wird hier beschrieben.

Eine Alternative und Validated Injektionsmethode für den Zugriff auf den subretinalen Raum<i&gt; über</i&gt; A Transcleral dorsalen Zugang

Hier zeigen wir einen neuartigen Ansatz zur Verwendung von hochauflösenden spectral-Domain optische Kohärenztomographie (HR-SD-OCT) Lieferung der Gen-Therapie-Agenten in den subretinalen Raum zu unterstützen, beurteilen seine areal Abdeckung und Photorezeptor Vitalität zu charakterisieren.

Höchste Auflösung Maus optische Kohärenztomographie, intraokulare Injektion in die retinale Gentherapie Forschung unterstützen

In diesem Manuskript wird die subkonjunktivale Injektion als gültige Vektorabgabemethode für Augengewebe bei Mäusen unter Verwendung eines Injektionssystems demonstriert, das aus einer Infusions-/Entnahmespritzenpumpe und einer gasdichten herausnehmbaren Spritze in Verbindung mit Mikroinjektionsnadeln besteht. Dieses Injektionssystem ist auch für andere intraokulare Verabreichungswege anpassbar.

Subkonjunktivale Verabreichung von Adeno-assoziierten Virusvektoren in Kleintiermodellen

Intravitreale Injektionen wurden im Schafauge mit dem Ziel durchgeführt, eine viral vermittelte Gentherapie an die Netzhaut zu verabreichen.

Intravitreale Injektionen in das Schafauge

Dieses Protokoll stellt einen transpupillengesteuerten transskleralen Ansatz zur sicheren und präzisen Verabreichung subretinaler zellulärer Transplantate mit einer geringen Rate an chirurgischen Komplikationen bei Mäuseempfängern mit oder ohne Netzhautdegeneration dar.

Transpupillengesteuerte transsklerale Transplantation von subretinalen Transplantaten in einem retinalen Degenerations-Mausmodell

Wir beschreiben ein detailliertes Protokoll für die Präparation von post-kryokonservierten hESC-abgeleiteten Photorezeptor-Vorläuferzellen und die subretinale Verabreichung dieser Zellen in rd10-Mäusen .

Subretinale Verabreichung von Photorezeptor-Vorläuferzellen aus humanen embryonalen Stammzellen in rd10-Mäusen

Subretinale Injektionen sind eine unverzichtbare Technik für die präklinische Entwicklung von Therapeutika für Photorezeptor- und RPE-Erkrankungen. Wir beschreiben eine optimierte transsklerale subretinale Injektionstechnik bei Mäusen, die die intraoperativen Erfolgsraten verbessert und Netzhautschäden minimiert.

Optimierte minimal-invasive transsklerale subretinale Injektionstechnik in der Maus

Erfahren Sie die subretinale Injektionstechnik für Gentherapie im retinalen Pigmentepithel von Mäusen. Diese Methode ermöglicht effektiven Gentransfer mit viralen Vektoren für ophthalmologische Forschung.

Limbus-Ansatz-Subretinale Injektion von viralen Vektoren für die Gentherapie bei Mäusen Retinapigmentepithel

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