Name: Differentiatie van de SH-SY5Y Human Neuroblastoom Cell Line (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-02-17T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: Leer een betrouwbare methode voor het differentiëren van SH-SY5Y neuroblastoomcellen naar volledig functionele neuronen voor in vitro toepassingen in neurobiologie en neurovirologie.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

We zijn dankbaar voor de bijdragen van Yolanda Tafuri bij het optimaliseren van de omstandigheden voor SH-SY5Y differentiatie, en voor de steun van Dr. Lynn Enquist, in wiens lab dit werk werd geïnitieerd. Y. Tafuri leverde de afbeeldingen die in Figuur 3 zijn getoond. Dit werk werd ondersteund door het NIH-NIAID Virus Pathogens Resource (ViPR) Bioinformatics Resource Center (MLS en L. Enquist) en K22 AI095384 (MLS).

1. Algemene overwegingen <ol><li> Zie de tabel van Materialen / Apparatuur voor een lijst van noodzakelijke reagentia. Voer alle stappen onder strikte aseptische omstandigheden. </li><li> Gebruik warmte geïnactiveerd foetaal runderserum (hiFBS) voor alle media voorbereidingen die FBS bevatten. Aan hitte-geïnactiveerd, warm een 50 ml aliquot van FBS bij 56 ° C gedurende 30 min, omkeren elke 10 minuten (zie ook tabel 1). Opmerking: Als FBS wordt zonder warmte-inactivatie, het epitheel fenotype sneller verloopt gedurende kweken van SH-SY5Y-cellen. </li><li> Voor gebruik, zodat media opwarmen en equilibreren in een incubator op een juiste pH balans voor elke stap stellen. Bijvoorbeeld, 50 ml medium duurt ongeveer een uur om volledig evenwicht (pH 7, 37 ° C, 5% CO2). Opmerking: Dit protocol maakt gebruik van een tweestaps splitting die gedeeltelijk gedifferentieerde SH-SY5Y-cellen worden getrypsiniseerd en opnieuw uitgeplaat vereist. Dit is een stressvolleWerkwijze deze bijzonder kwetsbare cellen. Daarom is het belangrijk om de cellen in trypsine geïncubeerd een minimale hoeveelheid tijd. Dit zal zorgen voor de preferentiële lift-off van neuronen, waardoor epitheel-achtige cellen nog steeds verbonden aan het gerecht. </li><li> Voer trituratie van gedifferentieerde cellen langzaam met een 10 ml plastic pipet met de tip tegen de onderzijde van de conische buis met de cellen. Voer wrijven bij een lage snelheid, boven en beneden niet meer dan vijf keer. </li></ol> 2. Passage van SH-SY5Y Maintenance Cultures <ol><li> Split onderhoud kweken wanneer de cellen 70-80% confluentie hebben bereikt, en niet meer dan 10 tot 15 passages. Culturen moeten meestal worden gepasseerd om de 3-5 dagen (uitgaande kweken niet meer dan 5-voudig verdund in splitting). </li><li> Om passage cellen van een T-75 kolf, zuigen uit de media en spoel na met ongeveer 10 ml 1x PBS. Let op: Het is niet raadzaam het splitsen van de SH-SY5Y onderhoud culturen further dan 1: 5 tijdens passage, want dit kan ertoe leiden dat de cellen te wijten sterven om lage confluentie. </li><li> Zuig PBS, en voeg vervolgens 2,5 ml 0,05% trypsine-EDTA (1x). </li><li> Incubeer in incubator 2-3 min en kantel voorzichtig cellen los van het oppervlak van de kolf. </li><li> Voeg 10 ml Basic Growth Media (zie tabel 2) en vermaal 1-2 keer. </li><li> Spin down gedurende 2 min bij 1000 xg aspiraat media, dan resuspendeer pellet in 5 ml groeimedia Basic. </li><li> Verdun cellen van 1: 3 tot 1: 5 in een totaal volume van 20 ml normale plating in T-75 kolf en tellen en dienblad differentiatie (punt 5). </li></ol> 3. Het invriezen van SH-SY5Y Cells <ol><li> Freeze vroege passages van SH-SY5Y neuroblastoomcellen in Basic groeimedia aangevuld met 5% (v / v) DMSO. </li><li> Aanvankelijk bevriezen bij -80 ° C gedurende 24 uur, vervolgens over vloeibare stikstof voor langdurige opslag. Opmerking: Ter referentie, een confluente (75-85%), T-75 kolf zal opleveren vijf1 ml porties van SH-SY5Y cellen voor invriezen. Elk van deze porties moet overal 2-5 miljoen cellen in totaal bevatten. </li></ol> 4. Dooi en cultuur gedifferentieerde SH-SY5Y Neuroblastoom Cellen <ol><li> Bereid Basic Growth Media. </li><li> Snel ontdooien bevroren cellen in een 37 ° C waterbad (ongeveer 2 min). </li><li> Resuspendeer cellen in 9 ml Basic groeimedia in een 15 ml conische buis en centrifugeer gedurende 2 min bij 1000 x g. </li><li> Zuig het supernatant terwijl ze voorzichtig de gepelleteerde cellen, en voorzichtig resuspendeer cellen niet te storen in 10 ml Basic Growth Media. </li><li> Plaat cellen op een T-25 kolf of 60 mm 2 gerecht. </li><li> De volgende dag, media vervangen om dode huidcellen te verwijderen. </li></ol> 5. Dag 0: Plating Cellen voor differentiatie <ol><li> Zie Figuur 1 voor de differentiatie schema. </li><li> Spoel ongedifferentieerde cellen met 1x PBS, aspireren, en vervolgens met behulp van trypsinize 1-2 ml opgewarmd1x 0,05% trypsine-EDTA. </li><li> Wanneer cellen in trypsine, incubeer gedurende ongeveer 3 minuten in een incubator. </li><li> Quench trypsine door toevoeging van 10 ml Basic groeimedia, spoel de zijkanten van de kolf of schaal en zacht tritureer 1-3 keer. Breng de inhoud met een 15 ml conische buis. </li><li> Centrifuge gedurende 2 minuten bij 1000 x g, en zuig de media terwijl ze voorzichtig de pellet te verstoren. </li><li> Resuspendeer pellet in 5 ml Basic Groei Media en vermaal 1-3 keer. </li><li> Aantal cellen met een hemocytometer, verdun behulp Basic groeimedia tot 50.000 cellen / ml. </li><li> Plaat 2 ml cellen per 35 mm schotel 2 voor een totaal van 100.000 cellen per schaal en weer plaatsen incubator. </li></ol> 6. Dag 1: Change Media (Differentiatie Media # 1) <ol><li> Aliquot 50 ml Differentiatie media # 1 (zie tabel 2) en incuberen in een 37 ° C waterbad. </li><li> Wanneer media wordt opgewarmd, laat het evenwicht in een incubator (37° C, 5% CO2) gedurende ten minste één uur om een juiste pH balans vóór gebruik vast te stellen. </li><li> Voeg retinoïnezuur (RA) (zie tabel 1) tot verwarmd en geëquilibreerd media direct voor het toevoegen media gerechten. Opmerking: Retinoïnezuur is lichtgevoelig en moet worden bewaard in een donkere fles bij 4 ° C </li><li> Zuig voorzichtig uit oude media en gooi ze weg. </li><li> Voeg 2 ml Differentiatie media # 1 met RA per 35 mm 2 gerecht en terug te keren naar incubator. </li></ol> 7. Dag 3: Change Media (Differentiatie Media # 1) <ol><li> Herhaal Sectie 6 (stappen 1-5) </li></ol> 8. Dag 5: Change Media (Differentiatie Media # 1) <ol><li> Herhaal Sectie 6 (stappen 1-5) </li></ol> 9. Dag 7: Split Cells 1: 1 <ol><li> Voeg RA naar opgewarmd en in evenwicht gebracht Differentiatie Media # 1 onmiddellijk voor het toevoegen van media aan gerechten. </li><li> Zuig voorzichtig uit oude media en gooi ze weg. </li><li> Voeg 200 ulverwarmd 0,05% trypsine EDTA 1x per 35 mm schotel 2 en warm in incubator ongeveer 2-3 minuten of totdat cellen zichtbaar opgetild de plaat als waargenomen onder een microscoop. </li><li> Doof de trypsine door toevoeging van 2 ml Differentiatie media # 1 met RA per 35 mm 2 dish en het gebruik van de media om te spoelen resterende neuronale cellen van de plaat. Vervolgens transfer inhoud aan een 50 ml conische buis. Opmerking: Tijdens behandeling met trypsine stappen, niet trypsinize te veel gerechten tegelijk. Dit draagt ​​ertoe bij neuronale kweken worden geïncubeerd in trypsine niet te lang, die cytotoxisch kan zijn. </li><li> Combineer de inhoud van maximaal 10 gerechten in de 50 ml conische buis en voorzichtig vermaal langzaam op en neer niet meer dan vijf keer met een 10 ml plastic pipet. </li><li> Aliquot 2 ml celsuspensie in vers 35 mm 2 gerechten en terug te keren naar incubator. </li></ol> 10. Dag 8: Change Media (Differentiatie Media # 2) <ol><li> Voeg RA (zie &lt;strong&gt; tabel 1) om opgewarmd en in evenwicht gebracht media onmiddellijk voor het toevoegen van media aan gerechten. </li><li> Zuig voorzichtig uit oude media en gooi ze weg. </li><li> Voeg langzaam 2 ml Differentiatie Media # 2 (zie tabel 2) met RA per 35 mm 2 gerecht en terug te keren naar incubator. Niet laten neuronen worden blootgesteld aan lucht gedurende een langere tijd omdat zij snel uitdrogen. </li></ol> 11. Dag 9: Bereid extracellulaire matrix (ECM) Coated Gerechten <ol><li> Dooi een flacon van de ECM-oplossing op ijs en verdund 1: 100 in koud DMEM. </li><li> Verdeel 2 ml van het mengsel in elke 35 mm 2 gerecht en zorgen voor de hele onderkant van de schotel is bedekt. </li><li> Plaats in een incubator (37 ° C, 5% CO2) gedurende 1 uur of overnacht. </li><li> Zuig het mengsel en laat aan de lucht drogen voor ongeveer 1 uur in een kap. Bewaar bij kamertemperatuur gedurende maximaal 2 maanden. </li></ol> 12. Dag 10: Transfer Cells opECM beklede platen 1: 1 <ol><li> Voeg RA (zie tabel 1) tot verwarmd en geëquilibreerd media direct voor het toevoegen media gerechten. </li><li> Zuig voorzichtig uit de media en gooi. </li><li> Voeg 200 ul trypsine verwarmd tot elke 35 mm schaal en 2 laten incuberen bij kamertemperatuur gedurende ongeveer 1-2 minuten of tot neuronen zichtbaar opgetild uit de schaal zoals waargenomen onder een microscoop. Opmerking: Voer deze stap behandeling met trypsine bij kamertemperatuur om niet over-neuronen geïncubeerd met trypsine en schade veroorzaken. Neuronen bevrijden van platen veel sneller dan epitheel-achtige cellen in dit stadium. </li><li> Doof de trypsine door toevoeging van 2 ml Differentiatie media # 2 per 35 mm 2 schaal en gebruik maken van de media te spoelen resterende neuronale cellen van de plaat. Vervolgens transfer inhoud aan een 50 ml conische buis. </li><li> Combineer de inhoud van maximaal 10 gerechten in de 50 ml conische buis en voorzichtig vermaal langzaam op en neer niet meer dan vijf keer meteen 10 ml plastic pipet. </li><li> Verdeel 2 ml celsuspensie in-ECM-gecoate 35 mm 2 gerechten en terug te keren naar incubator. </li></ol> 13. Dag 11: Change Media (Differentiatie Media # 3) <ol><li> Voeg RA (zie tabel 1) tot verwarmd en geëquilibreerd media direct voor het toevoegen media gerechten. </li><li> Zuig voorzichtig uit oude media en gooi ze weg. </li><li> Voeg langzaam 2 ml Differentiatie media # 3 (zie tabel 2) met RA per 35 mm schaal 2 en terug naar incubator. Niet laten neuronen worden blootgesteld aan lucht gedurende een langere tijd. </li></ol> 14. Dag 14: Change Media (Differentiatie Media # 3) <ol><li> Herhaal Section 13 (stap 1-3) </li></ol> 15. Dag 17: Laatste Media Change (Differentiatie Media # 3) <ol><li> Herhaal Section 13 (stap 1-3) </li></ol> 16. Dag 18: neuronale culturen Ready to Use <ol><li> Verander media frisse Diffdifferentiatie Media # 3 met RA om de 3 dagen voor de gezondheid neuron te behouden. Opmerking: De cellen moeten worden onderscheiden in neuronen en vertonen een neuronaal fenotype. Culturen zijn meestal stabiel tot 14 dagen na terminale differentiatie echter duur van neuron levensvatbaarheid afhankelijk passage aantal ongedifferentieerde cellen bij het begin van differentiatie. Hogere passage nummers op gedifferentieerde neuronen met een kortere gebruiksduur. </li></ol>

<ol><li>Christensen, J., Steain, M., Slobedman, B., Abendroth, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiated+Neuroblastoma+Cells+Provide+a+Highly+Efficient+Model+for+Studies+of+Productive+Varicella-Zoster+Virus+Infection+of+Neuronal+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Differentiated Neuroblastoma Cells Provide a Highly Efficient Model for Studies of Productive Varicella-Zoster Virus Infection of Neuronal Cells.</a> Journal of Virology. 85 (16), 8436-8442 (2011).</li>
<li>Gimenez-Cassina, A., Lim, F., Diaz-Nido, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+a+human+neuroblastoma+into+neuron-like+cells+increases+their+susceptibility+to+transduction+by+herpesviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Research%22%5BJournal%5D)">Differentiation of a human neuroblastoma into neuron-like cells increases their susceptibility to transduction by herpesviral vectors.</a> Journal of Neuroscience Research. 84 (4), 755-767 (2006).</li>
<li>Biedler, J. L., Roffler-Tarlov, S., Schachner, M., Freedman, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+Neurotransmitter+Synthesis+by+Human+Neuroblastoma+Cell+Lines+and+Clones%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Multiple Neurotransmitter Synthesis by Human Neuroblastoma Cell Lines and Clones.</a> Cancer Research. 38 (11 Pt 1), 3751-3757 (1978).</li>
<li>Encinas, M., Iglesias, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sequential+Treatment+of+SH-SY5Y+Cells+with+Retinoic+Acid+and+Brain-Derived+Neurotrophic+Factor+Gives+Rise+to+Fully+Differentiated%2C+Neurotrophic+Factor-Dependent%2C+Human+Neuron-Like+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neurochemistry%22%5BJournal%5D)">Sequential Treatment of SH-SY5Y Cells with Retinoic Acid and Brain-Derived Neurotrophic Factor Gives Rise to Fully Differentiated, Neurotrophic Factor-Dependent, Human Neuron-Like Cells.</a> Journal of Neurochemistry. 75 (3), 991-1003 (2000).</li>
<li>Otey, C. A., Boukhelifa, M., Maness, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((B35+neuroblastoma+cells%3A+an+easily+transfected%2C+cultured+cell+model+of+central+nervous+system+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">B35 neuroblastoma cells: an easily transfected, cultured cell model of central nervous system neurons.</a> Methods in Cell Biology. 71, 287-304 (2003).</li>
<li>LePage, K. T., Dickey, R. W., Gerwick, W. H., Jester, E. L., Murray, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+the+use+of+neuro-2a+neuroblastoma+cells+versus+intact+neurons+in+primary+culture+for+neurotoxicity+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Reviews+in+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">On the use of neuro-2a neuroblastoma cells versus intact neurons in primary culture for neurotoxicity studies.</a> Critical Reviews in Neurobiology. 17 (1), 27-50 (2005).</li>
<li>Shafer, T. J., Atchison, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmitter%2C+ion+channel+and+receptor+properties+of+pheochromocytoma+%28PC12%29+cells%3A+a+model+for+neurotoxicological+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicology%22%5BJournal%5D)">Transmitter, ion channel and receptor properties of pheochromocytoma (PC12) cells: a model for neurotoxicological studies.</a> Neurotoxicology. 12 (3), 473-492 (1991).</li>
<li>Yue, F., Cheng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparative+encyclopedia+of+DNA+elements+in+the+mouse+genome%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A comparative encyclopedia of DNA elements in the mouse genome.</a> Nature. 515 (7527), 355-364 (2014).</li>
<li>Cheng, Y., Ma, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+regulatory+information+conservation+between+mouse+and+conservation+between+mouse+and+human%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Principles of regulatory information conservation between mouse and conservation between mouse and human.</a> Nature. 515 (7527), 371-375 (2014).</li>
<li>Stergachis, A. B., Neph, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conservation+of+trans-acting+circuitry+during+mammalian+regulatory+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Conservation of trans-acting circuitry during mammalian regulatory evolution.</a> Nature. 515 (7527), 365-370 (2014).</li>
<li>Lin, S., Lin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+transcriptional+landscapes+between+human+and+mouse+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Comparison of the transcriptional landscapes between human and mouse tissues.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (48), 17224-17229 (2014).</li>
<li>Coyle, D. E., Li, J., Baccei, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regional+Differentiation+of+Retinoic+Acid-Induced+Human+Pluripotent+Embryonic+Carcinoma+Stem+Cell+Neurons%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Regional Differentiation of Retinoic Acid-Induced Human Pluripotent Embryonic Carcinoma Stem Cell Neurons.</a> PLoS ONE. 6 (1), e16174(2011).</li>
<li>Mostert, M. M., van de Pol, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+in+situ+hybridization-based+approaches+for+detection+of+12p+overrepresentation%2C+in+particular+i%2812p%29%2C+in+cell+lines+of+human+testicular+germ+cell+tumors+of+adults%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Genetics+and+Cytogenetics%22%5BJournal%5D)">Fluorescence in situ hybridization-based approaches for detection of 12p overrepresentation, in particular i(12p), in cell lines of human testicular germ cell tumors of adults.</a> Cancer Genetics and Cytogenetics. 87 (2), 95-102 (1996).</li>
<li>Hu, B. -Y., Weick, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+differentiation+of+human+induced+pluripotent+stem+cells+follows+developmental+principles+but+with+variable+potency%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Neural differentiation of human induced pluripotent stem cells follows developmental principles but with variable potency.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (9), 4335-4340 (2010).</li>
<li>Biedler, J. L., Helson, L., Spengler, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphology+and+growth%2C+tumorigenicity%2C+and+cytogenetics+of+human+neuroblastoma+cells+in+continuous+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Morphology and growth, tumorigenicity, and cytogenetics of human neuroblastoma cells in continuous culture.</a> Cancer Research. 33 (11), 2643-2652 (1973).</li>
<li>Påhlman, S., Ruusala, A. I., Abrahamsson, L., Mattsson, M. E., Esscher, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Retinoic+acid-induced+differentiation+of+cultured+human+neuroblastoma+cells%3A+a+comparison+with+phorbolester-induced+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Differentiation%22%5BJournal%5D)">Retinoic acid-induced differentiation of cultured human neuroblastoma cells: a comparison with phorbolester-induced differentiation.</a> Cell Differentiation. 14 (2), 135-144 (1984).</li>
<li>Xie, H., Hu, L., Li, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SH-SY5Y+human+neuroblastoma+cell+line%3A+in+vitro+cell+model+of+dopaminergic+neurons+in+Parkinson%E2%80%99s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Chinese+Medical+Journal%22%5BJournal%5D)">SH-SY5Y human neuroblastoma cell line: in vitro cell model of dopaminergic neurons in Parkinson’s disease.</a> Chinese Medical Journal. 123 (8), 1086-1092 (2010).</li>
<li>Kovalevich, J., Langford, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Considerations+for+the+use+of+SH-SY5Y+neuroblastoma+cells+in+neurobiology%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Considerations for the use of SH-SY5Y neuroblastoma cells in neurobiology.</a> Methods in Molecular Biology. 1078, Clifton, N.J. 9-21 (2013).</li>
<li>Påhlman, S., Hoehner, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+and+survival+influences+of+growth+factors+in+human+neuroblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Differentiation and survival influences of growth factors in human neuroblastoma.</a> European Journal of Cancer. 31 (4), 453-458 (1995).</li>
<li>Cheung, Y. -T., Lau, W. K. -W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+all-trans-retinoic+acid+on+human+SH-SY5Y+neuroblastoma+as+in+vitro+model+in+neurotoxicity+research%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicology%22%5BJournal%5D)">Effects of all-trans-retinoic acid on human SH-SY5Y neuroblastoma as in vitro model in neurotoxicity research.</a> Neurotoxicology. 30 (1), 127-135 (2009).</li>
<li>Agholme, L., Lindström, T., Kågedal, K., Marcusson, J., Hallbeck, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+in+vitro+model+for+neuroscience%3A+differentiation+of+SH-SY5Y+cells+into+cells+with+morphological+and+biochemical+characteristics+of+mature+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Alzheimer%27s+disease%3A+JAD%22%5BJournal%5D)">An in vitro model for neuroscience: differentiation of SH-SY5Y cells into cells with morphological and biochemical characteristics of mature neurons.</a> Journal of Alzheimer's disease: JAD. 20 (4), 1069-1082 (2010).</li>
<li>La Monica, N., Racaniello, V. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+replication+of+attenuated+and+neurovirulent+polioviruses+in+human+neuroblastoma+cell+line+SH-SY5Y%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Differences in replication of attenuated and neurovirulent polioviruses in human neuroblastoma cell line SH-SY5Y.</a> Journal of Virology. 63 (5), 2357-2360 (1989).</li>
<li>Cordey, S., Petty, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+Site-Specific+Adaptations+Conferring+Increased+Neural+Cell+Tropism+during+Human+Enterovirus+71+Infection%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Identification of Site-Specific Adaptations Conferring Increased Neural Cell Tropism during Human Enterovirus 71 Infection.</a> PLoS Pathog. 8 (7), e1002826(2012).</li>
<li>Xu, L. -J., Jiang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+Transcriptomic+Analysis+of+Human+Neuroblastoma+Cells+in+Response+to+Enterovirus+Type+71+Infection%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Global Transcriptomic Analysis of Human Neuroblastoma Cells in Response to Enterovirus Type 71 Infection.</a> PLoS ONE. 8 (7), e65948(2013).</li>
<li>Luo, M. H., Fortunato, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+infection+and+shedding+of+human+cytomegalovirus+in+T98G+glioblastoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Long-term infection and shedding of human cytomegalovirus in T98G glioblastoma cells.</a> Journal of Virology. 81 (19), 10424-10436 (2007).</li>
<li>Sun, Z., Yang, H., Shi, Y., Wei, M., Xian, J., Hu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+of+a+cell+model+system+of+herpes+simplex+virus+type+II+latent+infection+and+reactivation+in+SH-SY5Y+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Wei+Sheng+Wu+Xue+Bao+%3D+Acta+Microbiologica+Sinica%22%5BJournal%5D)">Establishment of a cell model system of herpes simplex virus type II latent infection and reactivation in SH-SY5Y cells.</a> Wei Sheng Wu Xue Bao = Acta Microbiologica Sinica. 50 (1), 98-106 (2010).</li>
<li>Yun, S. -I., Song, B. -H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+molecularly+cloned%2C+live-attenuated+japanese+encephalitis+vaccine+SA14-14-2+virus%3A+a+conserved+single+amino+acid+in+the+ij+Hairpin+of+the+Viral+E+glycoprotein+determines+neurovirulence+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+pathogens%22%5BJournal%5D)">A molecularly cloned, live-attenuated japanese encephalitis vaccine SA14-14-2 virus: a conserved single amino acid in the ij Hairpin of the Viral E glycoprotein determines neurovirulence in mice.</a> PLoS pathogens. 10 (7), e1004290(2014).</li>
<li>Garrity-Moses, M. E., Teng, Q., Liu, J., Tanase, D., Boulis, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroprotective+adeno-associated+virus+Bcl-xL+gene+transfer+in+models+of+motor+neuron+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+%26+Nerve%22%5BJournal%5D)">Neuroprotective adeno-associated virus Bcl-xL gene transfer in models of motor neuron disease.</a> Muscle & Nerve. 32 (6), 734-744 (2005).</li>
<li>Kalia, M., Khasa, R., Sharma, M., Nain, M., Vrati, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Japanese+Encephalitis+Virus+Infects+Neuronal+Cells+through+a+Clathrin-Independent+Endocytic+Mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Japanese Encephalitis Virus Infects Neuronal Cells through a Clathrin-Independent Endocytic Mechanism.</a> Journal of Virology. 87 (1), 148-162 (2013).</li>
<li>Haedicke, J., Brown, C., Naghavi, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+brain-specific+factor+FEZ1+is+a+determinant+of+neuronal+susceptibility+to+HIV-1+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">The brain-specific factor FEZ1 is a determinant of neuronal susceptibility to HIV-1 infection.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 106 (33), 14040-14045 (2009).</li>
<li>Xu, K., Liu, X. -N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Replication-defective+HSV-1+effectively+targets+trigeminal+ganglion+and+inhibits+viral+pathopoiesis+by+mediating+interferon+gamma+expression+in+SH-SY5Y+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+molecular+neuroscience%3A+MN%22%5BJournal%5D)">Replication-defective HSV-1 effectively targets trigeminal ganglion and inhibits viral pathopoiesis by mediating interferon gamma expression in SH-SY5Y cells.</a> Journal of molecular neuroscience: MN. 53 (1), 78-86 (2014).</li>
<li>Oh, J., Fraser, N. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Temporal+association+of+the+herpes+simplex+virus+genome+with+histone+proteins+during+a+lytic+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Temporal association of the herpes simplex virus genome with histone proteins during a lytic infection.</a> Journal of Virology. 82 (7), 3530-3537 (2008).</li>
<li>Stiles, K. M., Milne, R. S. B., Cohen, G. H., Eisenberg, R. J., Krummenacher, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+herpes+simplex+virus+receptor+nectin-1+is+down-regulated+after+trans-interaction+with+glycoprotein+D%5BTitle%5D)+AND+%22Virology%22%5BJournal%5D)">The herpes simplex virus receptor nectin-1 is down-regulated after trans-interaction with glycoprotein D.</a> Virology. 373 (1), 98-111 (2008).</li>
<li>Thomas, D. L., Lock, M., Zabolotny, J. M., Mohan, B. R., Fraser, N. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+2-kilobase+intron+of+the+herpes+simplex+virus+type+1+latency-associated+transcript+has+a+half-life+of+approximately+24+hours+in+SY5Y+and+COS-1+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">The 2-kilobase intron of the herpes simplex virus type 1 latency-associated transcript has a half-life of approximately 24 hours in SY5Y and COS-1 cells.</a> Journal of Virology. 76 (2), 532-540 (2002).</li>
<li>Handler, C. G., Cohen, G. H., Eisenberg, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cross-linking+of+glycoprotein+oligomers+during+herpes+simplex+virus+type+1+entry%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Cross-linking of glycoprotein oligomers during herpes simplex virus type 1 entry.</a> Journal of Virology. 70 (9), 6076-6082 (1996).</li>
<li>Nicola, A. V., Hou, J., Major, E. O., Straus, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Herpes+Simplex+Virus+Type+1+Enters+Human+Epidermal+Keratinocytes%2C+but+Not+Neurons%2C+via+a+pH-Dependent+Endocytic+Pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Virology%22%5BJournal%5D)">Herpes Simplex Virus Type 1 Enters Human Epidermal Keratinocytes, but Not Neurons, via a pH-Dependent Endocytic Pathway.</a> Journal of Virology. 79 (12), 7609-7616 (2005).</li>
<li>Korecka, J. A., van Kesteren, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+characterization+of+retinoic+acid+differentiated+SH-SY5Y+cells+by+transcriptional+profiling%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Phenotypic characterization of retinoic acid differentiated SH-SY5Y cells by transcriptional profiling.</a> PloS One. 8 (5), e63862(2013).</li>
<li>Presgraves, S. P., Ahmed, T., Borwege, S., Joyce, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Terminally+differentiated+SH-SY5Y+cells+provide+a+model+system+for+studying+neuroprotective+effects+of+dopamine+agonists%5BTitle%5D)+AND+%22Neurotoxicity+Research%22%5BJournal%5D)">Terminally differentiated SH-SY5Y cells provide a model system for studying neuroprotective effects of dopamine agonists.</a> Neurotoxicity Research. 5 (8), 579-598 (2004).</li>
<li>Qiao, J., Paul, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PI3K%2FAKT+and+ERK+regulate+retinoic+acid-induced+neuroblastoma+cellular+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">PI3K/AKT and ERK regulate retinoic acid-induced neuroblastoma cellular differentiation.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 424 (3), 421-426 (2012).</li>
</ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

Het bovenstaande protocol voorziet in een eenvoudige en reproduceerbare methode om homogene en levensvatbare menselijke neuronale culturen te genereren. Dit protocol maakt gebruik van technieken en praktijken die een aantal eerder gepubliceerde werkwijzen 1-4 en doelstellingen te integreren om de best practices van elkaar af te bakenen. Differentiatie van SH-SY5Y cellen berust op een geleidelijke serum deprivatie; de toevoeging van retinoïnezuur, neurotrofe factoren en extracellulaire matrixeiwitten; en serië...

De mogelijkheid om te gebruiken in vitro model systeem is sterk verbeterd op het gebied van neurobiologie en de neurowetenschappen. Cellen in cultuur zorgen voor een efficiënt platform om eiwitten functionaliteit en moleculaire mechanismen van specifieke verschijnselen te karakteriseren, aan de pathologie van de ziekte en infecties te begrijpen, en de voorlopige drugstests evaluaties uit te voeren. In neurobiologie, de belangrijkste soorten van celcultuur modellen omvatten primaire neuronale culturen afkomstig van ratten en muizen, en neuroblastoma cellijnen zoals ratten B35 cellen 5, Neuro-2A muizencellen 6, en ratten PC12 cellen 7. Hoewel het gebruik van dergelijke cellijnen het veld is aanzienlijke vooruitgang geboekt, zijn er verschillende verstorende factoren die samenhangen met de behandeling van niet-menselijke cellen en weefsels. Deze omvatten begrip soort-specifieke verschillen in metabole processen fenotypen van ziekten manifestatie en pathogenese in vergelijking met mensen. Het is ook belangrijk om op te merken dat dere bestaan ​​aanzienlijke verschillen tussen muis en genexpressie van de mens en transcriptiefactor signalering, aandacht voor de beperkingen van diermodellen en het belang van inzicht in welke trajecten worden geconserveerd tussen knaagdieren en mensen 8-11. Anderen hebben het gebruik van menselijke neuronale cellijnen met inbegrip van de N-Tera-2 (NT2) humane teratocarcinoom cellijn en induceerbare pluripotente stamcellen (iPSCs) toegepast. Deze cellijnen leveren goede modellen in vitro menselijke systemen. Echter, differentiatie NT2 cellen met retinoïnezuur (RA) resulteert in de vorming van een gemengde populatie van neuronen, astrocyten en gliacellen radiale 12, noodzakelijk een extra zuiveringsstap zuivere populaties van neuronen te verkrijgen. Bovendien NT2 cellen vertonen een zeer variabele karyotype 13, met meer dan 60 chromosomen in 72% van de cellen. iPSCs tonen variabiliteit in differentiatie tussen verschillende cellijnen en variëren in differentiatie efficiency<html> 14. Het is daarom wenselijk om een consistente en reproduceerbare menselijke neuronale cellen bij deze alternatieven aanvulling hebben. SH-SY5Y neuroblast-achtige cellen zijn een subkloon van de ouderlijke neuroblastoma cellijn SK-N-SH. De ouderlijke cellijn werd gegenereerd in 1970 uit een beenmergpunctie dat zowel neuroblast-achtige en epitheliale-achtige cellen 15 bevat. SH-SY5Y cellen een stabiele karyotype bestaande uit 47 chromosomen, en kan worden onderscheiden van een neuroblast-achtige toestand tot volgroeide menselijke neuronen door een aantal verschillende mechanismen waaronder het gebruik van RA, forbolesters, en specifieke neurotrofinen zoals hersen- afgeleide neurotrofe factor (BDNF). Voorgeschiedenis suggereert dat het gebruik van verschillende methoden kan kiezen voor een specifieke neuron subtypen zoals adrenergische, cholinerge en dopaminerge neuronen 16,17. Dit laatste maakt SH-SY5Y cellen bruikbaar voor een veelheid aan neurobiologie experimenten. NHOUD &quot;&gt; Verschillende studies hebben belangrijke verschillen tussen de SH-SY5Y cellen in hun ongedifferentieerde en gedifferentieerde Staten genoteerd. Bij SH-SY5Y cellen ongedifferentieerd, ze zich snel vermenigvuldigen en lijken niet-gepolariseerde, met zeer weinig, korte processen te zijn. Ze groeien vaak in groepjes en expressie merkers indicatief onvolwassen neuronen 18,19. bij gedifferentieerde, deze cellen verlengen lange, vertakte processen afname in proliferatie, en in sommige gevallen polariseren 2,18. volledig gedifferentieerde SH-SY5Y cellen zijn eerder aangetoond dat een drukken verscheidenheid van de verschillende markers van volwassen neuronen waaronder groei geassocieerd eiwit (GAP-43), neuronale kernen (Neun), synaptophysine (SYN), synaptischeblaasjeseiwit II (SV2), neuron specifieke enolase (NSE) en de microtubule-geassocieerde eiwit (MAP) 2,16,17,20, en de expressie van gliale merkers zoals gliacellen fibrillaire zuur eiwit (GFAP) 4 ontbreekt. In verdere ondersteuning die gedifferentieerde SH-SY5Y cellen VERTEGEnt een homogene neuronale populatie, verwijdering van BDNF resulteert in cellulaire apoptose 4. Dit suggereert dat de overleving van gedifferentieerde SH-SY5Y-cellen is afhankelijk van trofische factoren, vergelijkbaar neuronen rijpen. Gebruik van SH-SY5Y cellen is sinds de subkloon werd in 1978 3. Voorbeelden van hun toepassing omvatten onderzoeken ziekte van Parkinson 17, de ziekte van Alzheimer 21 en de pathogenese van virale infectie, waaronder poliovirus 22, enterovirus 71 (EV71) 23,24 , varicella-zoster virus (VZV) 1, humaan cytomegalovirus 25, en herpes simplex virus (HSV) 2,26. Het is belangrijk op te merken dat verschillende studies met SH-SY5Y cellen zijn deze cellen in hun ongedifferentieerde vorm, met name op het gebied van Neurovirology 27-36. Het verschil in de waargenomen fenotype van ongedifferentieerde versus gedifferentieerde SH-SY5Y cellen roept de vraag op whether de waargenomen progressie van de infectie zou anders in de volwassen gedifferentieerde neuronen zijn. Bijvoorbeeld gedifferentieerde SH-SY5Y cellen een hogere efficiëntie van HSV-1 opname versus ongedifferentieerde, prolifererende SH-SY5Y-cellen, die kunnen worden veroorzaakt door een gebrek aan oppervlaktereceptoren die HSV binden moduleren notitie gedifferentieerde SH-SY5Y cellen 2. Het is daarom van groot belang dat bij het ​​ontwerpen van een experiment gericht op het testen van neuronen in vitro moeten SH-SY5Y-cellen worden gedifferentieerd om de meest nauwkeurige resultaten te vertalen en vergelijking met in vivo modellen te verkrijgen. De ontwikkeling van een betrouwbare methode voor de menselijke neuronale culturen genereren noodzakelijk om onderzoekers translationele experimenten die het menselijk zenuwstelsel nauwkeurig modelleren voeren. Het protocol hier gepresenteerde is een procedure die &#39;best practices&#39; afgeleid van de vorige methoden 1-4 bakent te verrijken voor menselijke neuronen die worden onderscheidengebruik retinoïnezuur.

<table><tbody><tr><td>B-27</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>17504-044</td><td>Zie Tabel 1 voor voorbereiding</td></tr><tr><td>Brain-Derived Neurotrophic Factor (BDNF)</td><td>Sigma</td><td>SRP3014 (10 &mu;g)/B3795 (5 &mu;g)</td><td>Zie Tabel 1 voor voorbereiding</td></tr><tr><td>dibutyryl cyclic AMP (db-cAMP)</td><td>Sigma</td><td>D0627</td><td>Zie Tabel 1 voor voorbereiding</td></tr><tr><td>DMSO</td><td>ATCC</td><td>4-X</td><td>-</td></tr><tr><td>Minimum Essential Medium Eagle (EMEM)</td><td>Sigma</td><td>M5650</td><td>-</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum (FBS)&nbsp;</td><td>Hyclone</td><td>SH30071.03</td><td>Zie Tabel 1 voor voorbereiding</td></tr><tr><td>GlutamaxI</td><td>Life Technologies</td><td>35050-061</td><td>-</td></tr><tr><td>Glutamine</td><td>Hyclone</td><td>SH30034.01</td><td>-</td></tr><tr><td>Potassium Chloride (KCl)</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP366-1</td><td>Zie Tabel 1 voor voorbereiding</td></tr><tr><td>MaxGel Extracellular Matrix (ECM) solution</td><td>Sigma</td><td>E0282</td><td>Zie stap 11 van het protocol</td></tr><tr><td>Neurobasal</td><td>Life Technologies</td><td>21103-049</td><td>-</td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin (Pen/Strep)</td><td>Life Technologies</td><td>15140-122</td><td>-</td></tr><tr><td>Retinoic acid (RA)</td><td>Sigma</td><td>R2625</td><td>Moet donker worden bewaard bij 4 &deg;C omdat dit reagens lichtgevoelig is</td></tr><tr><td>SH-SY5Y Cells</td><td>ATCC</td><td>CRL-2266</td><td>-</td></tr><tr><td>0.5% Trypsin + EDTA</td><td>Life Technologies</td><td>15400-054</td><td>-</td></tr><tr><td>Falcon 35 mm TC dishes</td><td>Falcon (A Corning Brand)</td><td>353001</td><td>-</td></tr></tbody></table>

differentiatie van de sh-sy5y human neuroblastoom cell line

Differentiation of the SH-SY5Y Human Neuroblastoma Cell Line

Het beschikken over geschikte in vivo en in vitro systemen die translationele modellen voor menselijke ziekten bieden, is een integraal onderdeel van onderzoek in de neurobiologie en de neurowetenschappen. Traditionele in vitro experimentele modellen die in de neurobiologie worden gebruikt, omvatten primaire neuronale culturen van ratten en muizen, neuroblastoomcellijnen, waaronder rat B35 en muis Neuro-2A cellen, rat PC12 cellen en kortetermijnsnedecultures. Hoewel veel onderzoekers op deze modellen vertrouwen, ontbreekt er een menselijke component en de waargenomen experimentele effecten kunnen exclusief zijn voor de respectieve soorten en komen mogelijk niet identiek voor bij mensen. Bovendien, hoewel het neuronen zijn, kunnen deze cellen onstabiele karyotypen hebben, waardoor hun gebruik problematisch is voor studies van genexpressie en reproduceerbare studies van celsignalering. Het is daarom belangrijk om meer consistente modellen van menselijke neurologische ziekten te ontwikkelen. 
De volgende procedure beschrijft een eenvoudig te volgen, reproduceerbare methode om homogene en levensvatbare menselijke neuronale culturen te verkrijgen, door differentiatie van de chromosomaal stabiele menselijke neuroblastoomcellijn, SH-SY5Y. Deze methode integreert verschillende eerder beschreven methoden1-4 en is gebaseerd op sequentiële verwijdering van serum uit het medium. De tijdlijn omvat geleidelijke serum-starvatie, met introductie van extracellulaire matrix eiwitten en neurotrofe factoren. Dit stelt neuronen in staat te differentiëren, terwijl epitheliale cellen worden geselecteerd, wat resulteert in een homogene neuronale cultuur. Representatieve resultaten demonstreren de succesvolle differentiatie van SH-SY5Y neuroblastoomcellen van een initieel epitheelachtig celfenotype naar een meer uitgebreid en vertakt neuronaal fenotype. Dit protocol biedt een betrouwbare manier om homogene populaties van neuronale culturen te genereren die kunnen worden gebruikt voor verdere biochemische en moleculaire analyses, wat onderzoekers een nauwkeuriger translationeel model van menselijke infectie en ziekte biedt.

Momenteel zijn er veel gevallen op het gebied van neurobiologie en Neurovirology waarbij gedifferentieerde SH-SY5Y cellen als een functioneel model voor humane neuronen 27-36, en belangrijker nog, ongedifferentieerde cellen missen fenotypes worden gebruikt, zoals virale optimale opname 2 die noodzakelijk voor nauwkeurige interpretatie. Het is essentieel dat bij gebruik van SH-SY5Y cellen of andere in vitro neuronale systeem, cellen gedifferentieerde in neuronen, om gegevens die de best mog...

Het is van cruciaal belang in de neurobiologie en neurovirologie om een betrouwbaar, reproduceerbaar in vitro systeem te hebben dat dient als een translationeel model voor wat zich in vivo in menselijke neuronen voordoet. Dit protocol beschrijft hoe SH-SY5Y humane neuroblastomacellen te kweken en te differentiëren in levensvatbare neuronen voor gebruik in in vitro toepassingen.

Differentiatie van de SH-SY5Y Human Neuroblastoom Cell Line

Having appropriate in vivo and in vitro systems that provide translational models for human disease is an integral aspect of research in neurobiology and ...

Het algemene doel van dit protocol is om neurobiologen en neurovirologen te voorzien van een eenvoudige, reproduceerbare methode om gedifferentieerde menselijke neuronen te genereren voor gebruik in daaropvolgende in vitro assays. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen in het onderzoek naar infectieziekten, zoals het bepalen van de neuronale respons op infectie of medicamenteuze behandeling. Het kan ook worden gebruikt om proteomische of genomische veranderingen te beoordelen die geassocieerd zijn met specifieke experimentele condities.Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het een eenvoudig te volgen protocol biedt dat reproduceerbaar homogene culturen van volledig gedifferentieerde menselijke neuronen oplevert. Over het algemeen zullen personen die nieuw zijn met deze methode moeite hebben, vanwege de gevoeligheid van deze cellen voor verstoringen, zoals tripsinisatie, triteratie of blootstelling aan suboptimale omgevingsfactoren. Laat ter voorbereiding van deze procedure het medium opwarmen en equilibreren in de incubator, om een juiste pH-balans te waarborgen vóór gebruik.Splits vervolgens de culturen van de onderhoudsfase wanneer de cellen een

differentiation-of-the-sh-sy5y-human-neuroblastoma-cell-line

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Ontwikkelingsbiologie

Dit protocol beschrijft de isolatie, verrijking en het onderhoud van medulloblastoom tumor stamcellen uit mutante muizen met ectopische Sonic Hedgehog pathway activiteit.

Isolatie, Verrijking, en onderhoud van Medulloblastoom Stem Cells

We hebben een protocol voor de inductie van neuroblasts rechtstreeks van pluripotente menselijke embryonale stamcellen gehouden onder bepaalde voorwaarden met kleine moleculen, die afleiding van een groot aanbod van menselijke neurale voorouders en neuronale celtypes in het ontwikkelen van CNS voor neurale reparatie mogelijk maakt.

Efficiënte Afleiding van de Mens Neuronale voorouders en neuronen van pluripotente menselijke embryonale stamcellen met op kleine moleculen Inductie

Deze video protocol geeft blijk van een nieuwe methode voor het genereren en daaropvolgende zuivering van neuronale stamcellen uit een hernieuwbare bron van neurale stamcellen (NSC) op basis van hun fysieke (grootte en interne granulariteit) en fluorescerende eigenschappen met behulp van flowcytometrie-technologie.

De Neuroblast test: een test voor de generatie en de verrijking van Neuronale stamcellen uit Onderscheidende factor voor neurale stamcellen Nakomelingen met behulp van flowcytometrie

In this video, we perform the microglial phagocytosis assay for neuroblastoma using induced pluripotent stem cells. The assay helps assess the impairment of microglial function in neurodegenerative diseases.

Microglial Phagocytosis Assay: An In Vitro Assay to Establish Microglial Phagocytosis Model for Neuroblastoma Cells Using iPSC Macrophages

This video demonstrates a technique for transforming undifferentiated SH-SY5Y neuroblastoma cells into fully differentiated mature neurons using a systematic passaging technique. This involves culturing the cells in a series of media with gradually decreasing serum levels to inhibit the proliferation of epithelial-like cells while promoting the differentiation and proliferation of neuron-like cells. Additionally, the media is supplemented with retinoic acid and specific growth factors that...

Differentiation of a Human Neuroblastoma Cell Line into Mature Neurons

Dit artikel beschrijft een methode voor het onderzoeken van de dynamica van neurotransmittervesicles in neuroblastoomcellen, met behulp van een synaptobrevin2-pHluorine construct en Total Internal Reflection Fluorescence Microscopie. De strategie die ontwikkeld is voor beeldverwerking en gegevensanalyse wordt ook gerapporteerd.

TIRFM en pH-gevoelige GFP-sondes naar Neurotransmitter Vesicle Dynamics Evalueer in SH-SY5Y Neuroblastoom Cellen: cell imaging en data-analyse

Met het doel om veranderingen in miRNA's in gedifferentieerde menselijke neurale stamcellen (hNSC's) te karakteriseren, beschrijven we hNSC-differentiatie op een driedimensionaal systeem, de evaluatie van veranderingen in microRNA-expressie door miRNA PCR-array en computationele analyse voor miRNA-doelwitvoorspelling en de validatie ervan door middel van een dual luciferase-assay.

Differentiatie van een menselijke neurale stamcellen Line op Three Dimensional Culturen, Analyse van MicroRNA en vermeende doelwit-genen

Deze studie introduceert en beschrijft protocollen voor het afleiden van twee specifieke menselijke neurale organoïden als een relevant en nauwkeurig model voor het bestuderen van 1) menselijke multiform glioblastoom ontwikkeling binnen menselijke neurale organoïden uitsluitend bij de mens en 2) neuron Dopaminerge differentiatie die een driedimensionale organoïde genereert.

Menselijke neurale Organoïden voor het bestuderen van hersenkanker en neurodegeneratieve ziekten

Hier gepresenteerd is een protocol voor het genereren van een eencellige cultuur van menselijke embryonale stamcellen en hun daaropvolgende differentiatie in neurale voorlopercellen. Het protocol is eenvoudig, robuust, schaalbaar en geschikt voor geneesmiddelen screening en toepassingen voor regeneratieve geneeskunde.

Efficiënte Neurale differentiatie met behulp van eencellige cultuur van menselijke embryonale stamcellen

In dit protocol beschrijven we een stabiele, zeer efficiënte differentiatiestrategie voor het genereren van postganglionische sympathische neuronen uit menselijke pluripotente stamcellen. Dit model zal neuronen beschikbaar stellen voor het gebruik van studies van meerdere autonome aandoeningen.

Efficiënte differentiatie van postganglionic Sympathische neuronen met behulp van menselijke pluripotente stamcellen onder Feeder-vrije en chemisch gedefinieerde cultuurvoorwaarden

Neurodegeneratieve ziekten worden geassocieerd met ontregelde microgliafuncties. Dit artikel schetst een in vitro test van fagocytose van neuroblastoomcellen door iPSC-macrofagen. Kwantitatieve microscopie-uitleingen worden beschreven voor zowel live-cell time-lapse imaging als fixed-cell high-content imaging.

In vitro kwantitatieve beeldvormingstest voor fagocytose van dode neuroblastoomcellen door iPSC-macrofagen

Leer een betrouwbare methode voor het differentiëren van SH-SY5Y neuroblastoomcellen naar volledig functionele neuronen voor in vitro toepassingen in neurobiologie en neurovirologie.

Differentiatie van de SH-SY5Y Human Neuroblastoom Cell Line

Meer video's verkennen