Name: Enzimatik Digest ve Gradient Ayırma kullanma Fare Skin gelen sızan lökositlerin İzolasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-01-25T18:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 11 s
Description: Öğrenin enzimatik sindirim ve yoğunluk gradyanı ayırma yöntemiyle fare derisinden lökosit izolasyonunu. Bu teknik atopic dermatit gibi deri patolojilerinde hücresel ve moleküler mekanizmaları incelemek için etkili ve ekonomik bir alternatif sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH DC R15 NS067536-01A1), Ulusal Vulvodini Derneği (DC ödül) ve Macalester College bu işi destekledi. CB Arnold ve Mabel Beckman Vakfı tarafından finanse Macalester College Beckman Scholars Programı, bir burs aldı. BTF ve TM JDRF 2-2011-662 tarafından desteklenmektedir. Biz teknik danışmanlık Dr. Jason Schenkel ve Dr. Juliana Lewis teşekkür ve onların yardım ve destek için Chatterjea laboratuar tüm mevcut ve eski üyeleri.

Not: geleneksel gıda ve suya serbest erişim ile yer 8-12 haftalık dişi ND4 Swiss Webster fareleri, bu çalışmalar için kullanılmıştır (B13S1) deneysel protokol kullanılır; Macalester College IACUC tarafından onaylandı.. Oksazolon ile 1. Hassasiyet ve Mücadelesi <ol><li> Gün 0 <ol><li> 4 L kapaklı cam kavanoz dibinde örgü altına yerleştirilen emici havlu 3 ml izofluran ekleyerek anestezi odasına hazırlayın. Denek uyuşturulduktan kadar burada kullanılan ND4 dişi fareler için, odasında süresi 30-60 sn; fare suşu kullanılan anestezik yönetimini optimize edin. </li><li> Her anestezi farenin sırtını Tıraş ve bir hayvan saç düzeltici kullanarak kanadını. </li></ol></li><li> 1.gün <ol><li> Mutlak etanol içinde 4-etoksimetilen-2-fenil-2-oksazolin-5-on (Ox) içindeki bir% 2 solüsyonu yapmak ve bir inkübatör içerisinde dönen bir plaka üzerinde 15 dakika boyunca 50 ° C&#39;de inkübe edin. </li><li> Kısaca uyutmak1.1.1 açıklanan ve yaklaşık 20 ul her birkaç seri uygulamalar geri traş% 2 Ox 100 ul uygulamak olarak izofluran anestezi ile fareler. Kuru çözelti seri uygulamalar arasında 5-10 saniye bekle. </li><li> Arka dışındaki bölgelerde% 2 Öküz çözümü dökülmesini önlemek ve uygulamalar arasında kurumasını çözüm beklemek için özen gösterin. </li></ol></li><li> Gün 5-7 <ol><li> Mutlak etanol (Ox) bir% 1 çözeltisi olun ve bir inkübatör içerisinde dönen bir plaka üzerinde 15 dakika boyunca 50 ° C&#39;de inkübe edin. </li><li> Nazikçe ama sıkı yukarı bakacak şekilde karın boyun ve kuyruk tabanı ense de fare hareketsiz ve boyun hafifçe (intraperitoneal enjeksiyon için bir beklemeye benzer) aşağıya doğru eğik ve birkaç seri uygulamalarda traş kanadını% 1 Ox 100 ul uygulamak Yukarıda tarif edildiği gibi zaman alan daha sonra kuru cilt. </li><li> Kontrol fareleri için, traş turta mutlak etanol araç 100 ul geçerlidirk. </li></ol></li></ol> 2. Kanat Cilt Hasat <ol><li> Karbon dioksit inhalasyonu ile fareler Euthanize, ve dikkatli bir şekilde 10 cm, cerrahi makas ile cenah derinin (~ cilt 25 mm x 25 mm) istenen alanı tüketim. </li><li> Temiz, keskin cerrahi bıçak kullanarak, gögüs cilt aşırı yağ ve bağ dokusu kazınması. </li><li> Kalsiyum ya da magnezyum, 5 mM etilendiamintetraasetik asit (EDTA), olmadan fenol kırmızısı 10 mi RT HBSS [ihtiva eden bir 50 mL konik tüp içine 3 fareden cenah cilt 3 parçalarını yerleştirin 10 mM 4- (2-hidroksietil) -1 piperazinetansülfonik asit (HEPES), ve% 10 cenin sığır serumu (FBS)]. </li></ol> 3. Ön sindirim Doku Yıkama <ol><li> 37 ° C &#39;de muhafaza edilen bir kuru, gazı alınmış kuluçka makinesi içinde 30 dakika için bir döner levha üzerine deri parçacıklarını ihtiva eden bir yer tüpü. </li><li> İnkübasyon süresinin sonunda, kuvvetli bir şekilde 10 saniye vorteksleyin. </li><li> 70 um ve tüp içeriğini süzünsüzgeç yıkama tamponu atmak ve doku toplamak. Tek bir süzgeç, bir biyolojik tedavi grubu içinde tüm işlem boyunca yeniden kullanılabilir. </li><li> Forseps bir çift kullanılarak, (yukarıda tarif edildiği gibi EDTA, HEPES ve FBS ihtiva eden) taze RT HBSS ortam 10 ml içeren, yeni bir 50 ml&#39;lik konik bir tüp içine süzgeçten cenah deri aktarın. </li><li> Doku Ortalama bir alanında yaklaşık 2.2 mm x 2.2 mm olacak şekilde bir tüp içine daldırılmış bir cerrahi kesme makası bir 12.5 cm çifti ile, cenah derinin her parça kıyma. </li><li> 37 ° C &#39;de muhafaza edilen bir kuru, gazı alınmış kuluçka makinesi içinde 30 dakika için bir döner levha üzerine deri parçacıklarını ihtiva eden bir yer tüpü. </li><li> İnkübasyonun sonunda, kuvvetli bir şekilde 10 saniye vorteksleyin </li></ol> Derinin 4. kollajenaz sindirimi <ol><li> , 70 mikron süzgecinden tüpün içeriğini süzün toplamak ve yeni bir 50 ml konik içeren tüp 10 ml fre içine gögüs deri parçalarını aktarmaksh, RT HBSS ortam 0,7 mg ile takviye / D kolajenaz ml </li><li> 37 ° C &#39;de muhafaza edilen bir kuru, gazı alınmış kuluçka makinesi içinde 30 dakika için bir döner plaka sindirim orta ve deri parçacıklarını ihtiva eden bir yer tüpü. </li><li> İnkübasyonun sonunda, kuvvetli bir şekilde 10 saniye için tüpün vorteks içeriği. </li><li> Yeni 50 ml konik tüp içine 70 mikron süzgecinden tüpün Filtre içeriği; sindirilmiş doku içeren Flow-through tutmak ve süzgeci atmak ve cilt enkaz kanadını. </li><li> 350 g&#39;da 5 dakika için HBSS ortamı, santrifüj 50 ml akış yoluyla yıkayın ve süpernatant süzün. </li></ol> 5. Yoğunluk Gradient Santrifüj <ol><li> Serolojik bir pipet kullanarak, her bir örnek için, yeni bir 15 ml&#39;lik konik bir tüp içine 1X fosfat tamponlu salin (PBS) içinde 3 mi% 67 RT yoğunluk gradyan santrifüj ortamı eklenir. </li><li> Fenol kırmızısı ile HBSS 5 ml RT% 44 yoğunluk gradyan santrifüj medya hücre pelletini. </li><li> Centilmenly tabakası serolojik bir pipet kullanarak 67% yoğunluk gradyan santrifüj ortam numunesi üzerine hücreleri ihtiva eden% 44 yoğunluk gradyan santrifüj ortamı 5 mi. Yavaş hıza pipet ayarlayın ve konik tüp duvar boyunca pipet yerleştirmek için emin olun. , Sallamak için dikkatli olun bozabilir veya degrade ters çevirin. </li><li> En düşük ayara hızlanma, santrifüj dengeli olduğundan emin olduktan oda sıcaklığında 20 dakika boyunca 931 xg&#39;de degrade frenini boşa ve santrifüj. </li><li> Santrifüj işleminden sonra, dikkatlice santrifüj degrade kaldırmak ve yavaşça dik tüp tutan laboratuar tezgah ulaşım. Bir 5 ml&#39;lik plastik transfer pipeti kullanarak, yeni bir 15 ml&#39;lik konik tüpe 44 ve% 67,% yoğunluk gradyan santrifüj ortam transfer arayüzünde hücre tabakasını çıkarın. Arabirim görünmüyorsa, sadece% 67 -44% sınırında sıvının yaklaşık 2 ml kaldırın. </li><li> Entegrasyon hücreleri içeren konik tüp doldurun% 2 1X buz soğukluğunda PBS FBS, 350 x g&#39;de 5 dakika boyunca santrifüj hücreleri ve süpernatant süzün ile rface. Not: sindirim adım 37 ° C &#39;de ve yoğunluk gradyan santrifüj ortam adım oda sıcaklığında olduğundan bu hücreler soğutulabilir ilk defa / soğuk tutulur. Hücreler 1 içinde yeniden süspanse edilebilir: 1 tripan mavisi seyreltme ve sayısı ve canlılığı bilgileri bu noktada elde edilebilir. </li></ol> 6. Engelleme ve Boyama Akış Sitometrik Analizi <ol><li> Blok FcyRII / non-spesifik antikor lekelenmesini önlemek için hücreleri III reseptörleri. Konjuge olmayan bağlanma CD16 / 32 (2.4G2) karşı antikor ve bir blok FcyRII / III reseptörlerinin 100 seyreltme: Burada tarif edilen deneyler için, 1 ihtiva eden% 2 FBS içeren PBS antikor ana karışımları yapmak. </li><li> CD3ɛ (145-2C11), CD4 (RM4-5), CD8α (53-6,7), CD11b (M1 / 70), CD11c (N418), CD44 (IM7), CD45 (karşı antikorların uygun ana karışımları ile bloke hücreleri inkübe 30-F11), CD45R(RA3-6B2), CD62L (MEL-14) ve Ly-6G / Ly-6C (Gr-1) (RB6-8C5), hem de parlak mor 510 ölü / canlı leke ölü hücreleri tanımlamak için. Seyreltme üreticileri tarafından tavsiye edilen veya daha önce araştırmacılar tarafından optimize bütün antikorları kullanın. 100 seyreltme: Burada tarif edilen deneyler için, 1 tüm antikorlar kullanılır. </li><li> % 2 FBS ile 50 ul 1X PBS tampon boyama hücreleri ve tekrar süspansiyon yıkayın. Floresan verileri bir akış sitometresinde elde edilebilir kadar buz üzerinde tutun. Not: dengeleme parametreleri floresans veri edinimi önce lemfoid doku ve (CD4 ya da CD8&#39;e gibi), ortak bir hücre yüzey antijeni ile önceden iyileştirilmiş olması önemlidir. </li><li> , Sitometri analizi alt akış hücre sayısını arttırmak boyanmış hücrelerin tüm numunelerden veri elde etmek için. </li></ol> 7. Aşağıda belirtilen adımları Tamamladılar standart metodlar kullanılarak Sitometrisi Verileri Analiz <ol><li> Ileri dağılım lenfosit bölgeye Birincisi, kapıyan dağılım (bölge) arsa göre (bölge). </li><li> Ardından, çiftleri analiz önlemek için yan dağılım (genişlik) ileri dağılım (genişlik) kullanarak tek hücre seçin. Bu aynı zamanda, yana saçılım yüksekliği noktalaması ile ileri saçılma yüksekliği ile gerçekleştirilebilir. </li><li> Daha sonra, soyu üzerindeki kapısı (CD11b, CD11c, CD45R ve / B220) artı ve CD3-pozitif olaylar, dışlamak için makrofajlar, dendritik hücreler ve B hücreleri, sırasıyla, ve hedef ise, confine, T hücre bölmesine analizleri, Burada olduğu gibi, T hücrelerinin infiltre değerlendirmek. </li><li> Sonraki canlı / ölü leke hariç, canlı hücreler üzerinde kapısı. </li><li> Son olarak, ilgi hücre popülasyonu üzerinde kapısı (temsilcisi sonuçları bölümüne bakınız). </li></ol>

<ol><li>Hay, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Global+Burden+of+Skin+Disease+in+2010%3A+An+Analysis+of+the+Prevalence+and+Impact+of+Skin+Conditions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Invest.+Dermatol%22%5BJournal%5D)">The Global Burden of Skin Disease in 2010: An Analysis of the Prevalence and Impact of Skin Conditions.</a> J. Invest. Dermatol. 134 (6), 1-8 (2013).</li>
<li>Honda, T., Egawa, G., Grabbe, S., Kabashima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+of+immune+events+in+the+murine+contact+hypersensitivity+model%3A+toward+the+understanding+of+allergic+contact+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Invest.+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Update of immune events in the murine contact hypersensitivity model: toward the understanding of allergic contact dermatitis.</a> J. Invest. Dermatol. 133 (2), 303-315 (2013).</li>
<li>Gudjonsson, J. E., Johnston, A., Dyson, M., Valdimarsson, H., Elder, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+psoriasis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Invest.+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Mouse models of psoriasis.</a> J. Invest. Dermatol. 127 (6), 1292-1308 (2007).</li>
<li>Malachowa, N., Kobayashi, S. D., Braughton, K. R., DeLeo, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+Models+of+Innate+Immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Mouse+Models+of+Innate+Immunity%3A+Methods+and+Protocols%22%5BJournal%5D)">Mouse Models of Innate Immunity.</a> Mouse Models of Innate Immunity: Methods and Protocols. 1031, 109-116 (2013).</li>
<li>Mackay, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cutting+Edge%3A+CD69+Interference+with+Sphingosine-1-Phosphate+Receptor+Function+Regulates+Peripheral+T+Cell+Retention%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immun%22%5BJournal%5D)">Cutting Edge: CD69 Interference with Sphingosine-1-Phosphate Receptor Function Regulates Peripheral T Cell Retention.</a> J. Immun. 194, 2059-2063 (2015).</li>
<li>Schaerli, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+skin-selective+homing+mechanism+for+human+immune+surveillance+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">A skin-selective homing mechanism for human immune surveillance T cells.</a> J. Exp. Med. 199 (9), 1265-1275 (2004).</li>
<li>Zaid, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Persistence+of+skin-resident+memory+T+cells+within+an+epidermal+niche%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Persistence of skin-resident memory T cells within an epidermal niche.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 111 (14), 5307-5312 (2014).</li>
<li>Harris, J. E., Harris, T. H., Weninger, W., Wherry, E. J., Hunter, C. A., Turka, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mouse+model+of+vitiligo+with+focused+epidermal+depigmentation+requires+IFN-%CE%93+for+autoreactive+CD8%2B+T+cell+accumulation+in+the+skin%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Invest.+Dermatol%22%5BJournal%5D)">A mouse model of vitiligo with focused epidermal depigmentation requires IFN-Γ for autoreactive CD8+ T cell accumulation in the skin.</a> J. Invest. Dermatol. 132 (7), 1869-1876 (2012).</li>
<li>Jungblut, M., Oeltze, K., Zehnter, I., Hasselmann, D., Bosio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+Single-Cell+Suspensions+from+Mouse+Spleen+with+the+gentleMACS+Dissociator%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator.</a> J. Vis. Exp. (22), e1029(2008).</li>
<li>Nagao, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+epidermal+Langerhans+cells+and+langerin-expressing+dermal+dendritic+cells+are+unrelated+and+exhibit+distinct+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">Murine epidermal Langerhans cells and langerin-expressing dermal dendritic cells are unrelated and exhibit distinct functions.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 106, 3312-3317 (2009).</li>
<li>Pennartz, S., Reiss, S., Biloune, R., Hasselmann, D., Bosio, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+single-cell+suspensions+from+mouse+neural+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Generation of single-cell suspensions from mouse neural tissue.</a> J. Vis. Exp. (29), e1267(2009).</li>
<li>Dudeck, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mast+cells+are+key+promoters+of+contact+allergy+that+mediate+the+adjuvant+effects+of+haptens%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Mast cells are key promoters of contact allergy that mediate the adjuvant effects of haptens.</a> Immunity. 34 (6), 973-984 (2011).</li>
<li>Hershko, A. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mast+Cell+Interleukin-2+Production+Contributes+to+Suppression+of+Chronic+Allergic+Dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Mast Cell Interleukin-2 Production Contributes to Suppression of Chronic Allergic Dermatitis.</a> Immunity. 35 (4), 562-571 (2011).</li>
<li>Huang, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trypsin-induced+proteome+alteration+during+cell+subculture+in+mammalian+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomed.+Sci%22%5BJournal%5D)">Trypsin-induced proteome alteration during cell subculture in mammalian cells.</a> J. Biomed. Sci. 17 (36), (2010).</li>
<li>Tabatabaei, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+partial+characterization+of+human+amniotic+epithelial+cells%3A+The+effect+of+trypsin%5BTitle%5D)+AND+%22Avicenna+J+Med.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Isolation and partial characterization of human amniotic epithelial cells: The effect of trypsin.</a> Avicenna J Med. Biotechnol. 6 (1), 10-20 (2014).</li>
<li>Autengruber, A., Gereke, M., Hansen, G., Hennig, C., Bruder, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+enzymatic+tissue+disintegration+on+the+level+of+surface+molecule+expression+and+immune+cell+function%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Microbiol.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Impact of enzymatic tissue disintegration on the level of surface molecule expression and immune cell function.</a> Eur. J. Microbiol. Immunol. 2, 112-120 (2012).</li>
<li>Gu, D., Fan, Q., Xie, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+population+analyses+during+skin+carcinogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Cell population analyses during skin carcinogenesis.</a> J. Vis. Exp. (78), e50311(2013).</li>
<li>Broggi, M. A. S., Schmaler, M., Lagarde, N., Rossi, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+Murine+Lymph+Node+Stromal+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22+J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation of Murine Lymph Node Stromal Cells.</a> J. Vis. Exp. (90), e51803(2014).</li>
<li>Martinov, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contact+hypersensitivity+to+oxazolone+provokes+vulvar+mechanical+hyperalgesia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Contact hypersensitivity to oxazolone provokes vulvar mechanical hyperalgesia in mice.</a> PloS one. 8 (10), e78673(2013).</li>
<li>Katsares, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Rapid+and+Accurate+Method+for+the+Stem+Cell+Viability+Evaluation%3A+The+Case+of+the+Thawed+Umbilical+Cord+Blood%5BTitle%5D)+AND+%22Lab.+Med%22%5BJournal%5D)">A Rapid and Accurate Method for the Stem Cell Viability Evaluation: The Case of the Thawed Umbilical Cord Blood.</a> Lab. Med. 40 (9), 557-560 (2009).</li>
<li>Thomas, M. L., Lefrançois, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+expression+of+the+leucocyte-common+antigen+family%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol.+Today%22%5BJournal%5D)">Differential expression of the leucocyte-common antigen family.</a> Immunol. Today. 9 (10), 320-326 (1988).</li>
<li>Daley, J. M., Thomay, A. A., Connolly, M. D., Reichner, J. S., Albina, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+Ly6G-specific+monoclonal+antibody+to+deplete+neutrophils+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Leukoc.+Biol%22%5BJournal%5D)">Use of Ly6G-specific monoclonal antibody to deplete neutrophils in mice.</a> J. Leukoc. Biol. 83 (1), 64-70 (2008).</li>
</ol>

Yazarlar ifşa etmek mali ya da diğer çıkarları hiçbir var.

Atopik dermatit veya sedef hastalığı gibi deri hastalıklarının, kemirgen modellerinde deri lökositlerin değişiklikleri karakterize enflamatuar hücre influksu ve hastalık patolojisi arasında mekanik bağlantılar anlamak için önemlidir. Burada en biyomedikal araştırma laboratuvarlarında bulunan temel donanımları ile cilt dokusundan lökosit izole etmek için ekonomik bir tekniği açıklar. Bu nispeten hızlı bir tekniktir laboratuarlarında zamanında eller en aza indirerek kaynaklarını korumak için yardımcı pahalı doku ayrılma m...

Kontakt dermatit, egzama, sedef hastalığı, selülit, melanom dışı cilt kanserleri için mantar enfeksiyonları ve apseler arasında değişen cilt koşulları dünya çapında 50 en yaygın hastalıklar arasında olduğu tespit edildi ve 2010 yılında 1 ölümcül olmayan hastalıkların dördüncü önde gelen global neden olur. Buna göre, çeşitli cilt patolojilerin altında yatan moleküler ve hücresel mekanizmaların araştırılması araştırma gerekli ve etkin bir alandır. Kemirgen modellerinde, atopik dermatit 2, sedef hastalığı 3 ya da Staphylococcus aureus enfeksiyonu 4 gibi enflamatuar cilt hastalıklarının anlaşılması son derece yararlı olmuştur. Fare deri dokusunun enzimatik sindirimi için, ucuz, etkili ve basit bir protokol daha iyi cilt hastalıklarının patofizyolojisi anlamak için alt çeşitli uygulamalar için kullanılabilir hücre preparatları sağlayabilir. Burada, basit ve ekonomik bir yöntem, sıçan derisine enzimatik sindirimi için açıklanandoku ve hücre kültürü, in vivo adoptif transfer için kullanılabilecek cilt süzücü lökositlerin izolasyonu, sitometrik analizi ve ayırma ya da gen ifade etüdlerinde akar. Bu prosedürün genel amacı, tipik olarak, özel reajan takımına ve mekanik dissociators ile ilişkili maliyetlerin en aza düşürülmesini yüksek hücre canlılığı cilt nüfuz eden lökositler için tek bir hücre süspansiyonu hazırlamaktır. Mevcut cilt dokusu ayrılma yöntemleri 5-7 düşük hücre canlılığı ve yüzey işaretleyici bütünlüğü neden veya özel enzim kitleri ve pahalı doku ayrılma makineleri 8-11 gerektirebilir. Fare kulak cilt dokusunun sindirim makul 12-13 yaygın yüksek keratinize deri dokusu sindirim ise (örneğin zayıf) hücresel olmayan kalıntı büyük miktarda kirlenmiş hücre hazırlama neden olabilir. Yeni bir çalışmada, Zeyd ve arkadaşları 2.5 mg 90 dakika fare böğür cildi sindirilmiş / ml dispase, Follo3 mg / ml kollajenaz 7 45 dakika ile evli. Başka bir çalışmada, araştırmacılar, bu tripsin / EDTA, kolajenaz III kullanımı da dahil olmak üzere, 2.5 saat bir araya sindirimi ile birden inkubasyon kullanılan ve 5 dispaz. Farklı üreticilerin tripsin ile tedavi ölçülebilir memeli hücreleri 14-15 hücre yüzey proteinlerinin bütünlüğünü etkilediği gösterilmiştir gibi tripsin kullanımı enzimatik cilt sindirimi için tavsiye edilmez. Buna ek olarak, dispaz, CD4 ve CD8α T hücrelerinin çoğalma yetenekleri üzerinde önemli etkilere sahip olabilir ve örneğin CD62L 16 ortak T lenfosit aktivasyonu da dahil olmak üzere, en az 20 moleküllerinin yüzey bolluk etkiler. Diğer protokoller sindirim ortamında 6 RPMI 1640 kullanır. Bununla birlikte, RPMI Mg + 2 ve Ca + 2 varlığı detaylı yuvar toplanmasını 17 neden olabilir. Doku ayrışma için ideal bir protokol, yüksek hücre canlılığı, düşük hedeflemelidirHücre toplama ve en az zarar seviyesi hücre yüzeyine. Yüksek kaliteli lenf nodu stromal hücre preparatları kısa enzim inkubasyon, Ca 2 + ve Mg 2 + ücretsiz medya kullanımı protokoller ile gerçekleştirilir ve tripsin önlemek ve 18 dispase oylandı. Bununla birlikte, bu tip protokolleri bütün sıçan derisine ayrışması için tesis edilmemiştir. Burada, bir protokol, ayrışır izole ve alerjen-fare meydan yan yüz derisinden deri süzücü lökositlerin zenginleştirmek için tarif edilmektedir. Kısaca, deri kesilir sindirimi için doku yumuşatmak ve herhangi bir fazla ölü deri ya da yağlı doku kaldırmak için 1 saat süre ile,% 10 fetal bovin serumu içeren Hank Dengeli Tuz Çözeltisi (HBSS) içinde önceden inkübe edilir. Bu 0.7 mg ile 30 dakika enzimatik sindirim aşaması izlemektedir / ml kollajenaz D kollajenaz D yapma, en az hücre yüzeyi markerlerinin yoğunluğu üzerindeki etkileri ve in vitro 16,18 T hücresi çoğalması üzerinde bir etkisi yokturyüzey proteinleri karakterizasyonu içeren uygulamalar için son derece uygundur. Enzimatik sindirim takiben, aralıklı yoğunluk gradyan santrifüj tek hücre süspansiyonu epitel hücreleri ve atıklar giderilmiştir ve hematopoietik hücrelerin zenginleştirilmesi için kullanılmıştır. Önemli olarak, bu prosedür pahalı sütunlara göre manyetik hücre ayrıştırma reaktifler ve doku ayrılma makineleri 8-11 önler ve bir bazik biyomedikal araştırmalar laboratuarında bulunan ekipman ve malzeme ile yapılabilir. Aşağıda, bu protokolü (19 uyarlanmıştır) önceden duyarlılaştırılmış ND4 İsviçre farelerinde hapten oksazolon (Ox) ile yan yüz derisinden meydan üç kez lökositleri izole etmek için kullanılmıştır. Hücreler çok parametrik akış sitometri kullanılarak analiz edildi. Bu teknik, minimum enkaz ve sitometri etkilenen sk fazla miktarda T lenfositleri ve nötrofiller infiltrasyonu ölçmek için çok parametre akış sitometrisi ile analiz edilmiştir izole edilmiş lenfositlerin&gt;% 95 canlılık ile bir hücre süspansiyonu elde edildiiçinde.

<table><tbody><tr><td>Fenol kırmızısı içeren, kalsiyum içermeyen, magnezyum içermeyen, sıvı Sigma</td><td>Aldrich</td><td>55021C</td><td>HBSS Kullanım gününe kadar steril tutunuz.</td></tr><tr><td>HEPES, &GE; %99,5 (titrasyon)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>EDTA disodyum tuzu çözeltisi</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E7889</td><td>Kullanım gününe kadar steril tutun.</td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu, USDA, Isı İnaktive Edilmiş, Premium Select</td><td>MidSci</td><td>S01520HI</td><td>Kullanım gününe kadar steril tutun.</td></tr><tr><td>Percoll, pH 8.5-9.5 (25 derece; C)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>P1644</td><td>Steril tutun. Percoll'un kullanımdan önce steril 10X PBS ile izotonik hale getirilmesi gerekir.</td></tr><tr><td>Düzeltici Combo Kiti</td><td>Kent Scientific</td><td>CL9990-1201&nbsp;</td><td>Böğrü ve sırtı tıraş etmek için daha büyük düzelticiyi kullanın.</td></tr><tr><td>4-Etoksimetilen-2-fenil-2-oksazolin-5-on</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E0753-10G</td><td>50 ° C'de% 100 EtOH içinde çözülür; Dönen bir plaka üzerinde 15 dakika C.</td></tr><tr><td>Saflaştırılmış anti-fare CD16 / CD32 (2.4G2)</td> <td>Tonbo Biosciences</td><td>70-0161</td> Akış sitometrisi anti-CD3 ve epsilon <td>için antikor boyama sırasında spesifik olmayan antikor bağlanmasını bloke etmek için kullanılan antikor</td></tr><tr><td>;-BV650 (145-2C11)</td> <td>Becton Dickinson</td><td>564378</td><td>Akış sitometrisi için hücreleri boyamak için kullanılan antikor</td></tr><tr><td>anti-CD4-APC-eFluor780 (RM4-5)</td><td>eBioscience</td><td>47-0042-80</td><td>Akış için hücreleri boyamak için kullanılan antikor sitometri</td></tr><tr><td>anti-CD8&alfa;-BV785 (53-6.7)</td><td>BioLegend</td><td>100749</td><td>Akış sitometrisi için hücreleri boyamak için kullanılan antikor</td></tr>, <tr><td>anti-CD11b-eFluor450 (M1/70)</td><td>eBioscience</td><td>48-0112-80</td><td>Akış sitometrisi için hücreleri boyamak için kullanılan antikor</td></tr>, <tr><td>anti-CD11c-eFluor450 (N418)eBioscience</td><td></td> <td>48-0114-80</td><td>Akış sitometrisi için hücreleri boyamak için kullanılan antikor</td></tr><tr><td>, anti-CD44-BV711 (IM7)</td><td>Becton Dickinson</td><td>563971</td><td>Akış sitometrisi için hücreleri boyamak için kullanılan antikor</td></tr>, <tr><td>anti-CD45-FITC (30-F11)</td><td>Tonbo Biosciences</td><td>35-0451-U025</td><td>Akış sitometrisi için hücreleri boyamak için kullanılan antikor</td></tr>, <tr><td>anti-CD45R-eFluor450 (RA3-6B2)</td><td>eBioscience</td><td>48-0452-80</td><td>Akış sitometrisi için hücreleri boyamak için kullanılan antikor</td></tr><tr>,<td>anti-CD62L-PerCP-Cy5.5 (MEL-14)</td><td>BioLegend</td><td>104431</td><td>Akış sitometrisi için hücreleri boyamak için kullanılan antikor</td></tr>, <tr><td>anti-Ly-6G / Ly-6C (Gr-1) -PE (RB6-8C5)</td> <td>BioLegend</td><td>108407</td><td>Akış sitometrisi için hücreleri boyamak için kullanılan antikor</td></tr><tr><td>Hayalet Boya-BV510</td><td>Tonbo Biosciences</td><td>13-0870-T100</td><td>Akış sitometrisi için canlılık boyası</td></tr><tr><td>LSR Fortessa</td><td>Becton Dickinson</td><td>N/A</td><td>Hücre analizörü (18 parametre)</td></tr><tr><td>Clostridium'dan Kollajenaz D histolyticum</td><td>Roche Applied Science</td><td>,</td><td>HBSS'de fenol kırmızısı, kalsiyumsuz ve magnezyumsuz olarak 5 mg / ml'de aliquot liyofilize enzimi 1 mL alikotlara 11088858001. Hemen -20 ° C'de saklayın; Altı aya kadar C.</td></tr><tr><td>ND4 İsviçre dişi fareleri</td><td>Harlan</td><td>0-32</td><td>8-12 haftalık; geleneksel olarak yiyecek ve suya ücretsiz erişim ile barındırılır ve Macalester College'ın IACUC yönergelerine göre kullanılır.</td></tr></tbody></table>

enzimatik digest ve gradient ayırma kullanma fare skin gelen sızan lökositlerin İzolasyonu

Isolation of Infiltrating Leukocytes from Mouse Skin Using Enzymatic Digest and Gradient Separation

Murin derisinin tek hücreli bir süspansiyona ayrılması, cilt iltihabının kemirgen modellerinde sızan bağışıklık hücrelerinin karakterizasyonu gibi aşağı akış hücresel analizi için gereklidir. Burada, fare derisinin kollajenaz D ile besin açısından zengin bir çözelti içinde sindirimi için bir protokol açıklıyoruz, ardından süreksiz bir yoğunluk gradyanı kullanılarak hematopoietik hücrelerin ayrılması geliyor. Bu şekilde elde edilen hücreler, in vitro çalışmalar, in vivo transfer ve akış sitometrisi dahil olmak üzere diğer aşağı akış hücresel ve moleküler analizler için kullanılabilir. Bu protokol, fenotipik karakterizasyon veya hücresel fonksiyon ile ilgili yüzey proteinlerinin hücresel canlılığını veya yoğunluğunu tehlikeye atabilen pahalı mekanik ayrıştırıcılara, özel ayırma kolonlarına ve daha sert tripsin ve dispas bazlı sindirim yöntemlerine etkili ve ekonomik bir alternatiftir. Burada temsili verilerimizde gösterildiği gibi, bu protokol yüksek derecede canlı hücreler üretti, spesifik bağışıklık hücresi alt kümeleri içeriyordu ve akış sitometrik analizinde kullanılan ortak yüzey işaretleyici proteinlerin bütünlüğü üzerinde hiçbir etkisi yoktu.

Kollajenaz D ortam ile muamele edilmiş kontrol grubu ile karşılaştırıldığında splenositler T hücreleri üzerindeki CD4 ve CD8 a benzer seviyelerde göstermektedir tedavi İlk olarak, T hücre alt üzerinde soy ve aktivasyon belirteçlerinin sıklığı ve yüzey bolluk kollajenaz D olası etkileri kontrol olarak ikincil lenfoid doku kullanılarak değerlendiril...

Bu protokol, fare derisinin besin açısından zengin ortamda enzimatik sindirimini ve ardından lökositleri izole etmek için gradyan ayrımını tanımlar. Bu şekilde türetilen hücreler, çeşitli alt uygulamalar için kullanılabilir. Bu, doku ayrışma makinelerine ve daha sert tripsin ve dispas bazlı doku sindirim protokollerine etkili, ekonomik ve gelişmiş bir alternatiftir.

Enzimatik Digest ve Gradient Ayırma kullanma Fare Skin gelen sızan lökositlerin İzolasyonu

Dissociating murine skin into a single cell suspension is essential for downstream cellular analysis such as the characterization of infiltrating immune ...

Bu prosedürün genel amacı, enzimatik sindirim ve yoğunluk gradyan ayrımı kullanarak cilde sızan lökositleri izole etmektir. Bu yöntem, atopik dermatit de dahil olmak üzere cilt patolojilerinin birçok fare modelinde hücresel ve moleküler mekanizmaların araştırılmasına uygulanabilir. Bu yöntem cilde sızan lökosit biyolojisi hakkında bilgi sağlayabilse de, diğer yerleşik hücre popülasyonlarının araştırılmasına da uygulanabilir.Genel olarak, bu yönteme yeni başlayan kişiler, fazla yağ ve bağ dokularının tamamen çıkarılmasını içeren deri toplama işlemi ile mücadele edeceklerdir. Bu yöntemin görsel olarak gösterilmesi kritik öneme sahiptir, çünkü deri toplama ve yoğunluk gradyanı işlemenin öğrenilmesi zordur ve hassasiyet ve pratik gerektirir. Tedaviden sonra uygun zaman noktasında, sekiz ila on iki haftalık yetişkin bir dişi ND4 Swiss-Webster faresinden 25 x 25 milimetrelik traşlı yan deri alanını dikkatlice çıkarmak için 10 santimetre cerrahi makas kullanın.Derideki fazla yağ ve bağ dokusunu kazımak için temiz, keskin bir cerrahi bıçak kullanın, ardından cildi EDTA, HEPES ve FBS ile desteklenmiş 10 mililitre oda sıcaklığında HBSS içeren 50 mililitrelik konik bir tüpe aktarın ve dokuyu kuru, gazsız bir ortamda 30 dakika boyunca dönen bir plaka üzerinde önceden sindirin, 37 santigrat derece inkübatör. İnkübasyonun sonunda, tüpü on saniye boyunca kuvvetlice girdaplayın ve doku bulamacını 70 mikronluk bir süzgeçten süzün. Daha sonra, yan deri parçalarını süzgeçten EDTA, HEPES ve FBS ile desteklenmiş on mililitre taze, oda sıcaklığında HBSS ortamı içeren 50 mililitrelik yeni bir tüpe aktarmak için bir çift forseps kullanın, ardından 12.5 santimetrelik bir çift cerrahi diseksiyon makası kullanarak her bir yan deri parçasını kıymak için ortalama doku parçası yaklaşık 2,2 x 2,2 milimetre boyutunda olur.Tüm parçalar kıyıldığında, tüpü 30 dakikalık bir inkübasyon için dönen plakaya geri koyun. İnkübasyonun sonunda tüpü 10 saniye kuvvetlice vorteksleyin ve içeriği 70 mikronluk süzgeçten süzün. Kalan yan deri parçalarını, mililitre başına 0.7 miligram Kollajenaz D ile desteklenmiş 10 mililitre HBSS içeren 50 mililitrelik yeni bir tüpte toplayın ve tüpü 30 dakikalık bir inkübasyon için dönen plakaya geri koyun.10 saniye daha girdaplamadan sonra, tüpün içeriğini tekrar süzün, bu sefer süzgeçteki kalıntıları atın, ardından tüpü 50 mililitreye kadar HBSS, EDTA, HEPES, FBS ile doldurun, hücreleri aşağı doğru döndürün ve süpernatanı boşaltın. Yeni bir 15 mililitrelik konik tüpe üç mililitre oda sıcaklığı, PBS'de yüzde 67 yoğunluk gradyan santrifüj ortamı ekleyin ve hücre peletini fenol kırmızısı ile HBSS'de beş mililitre oda sıcaklığında yüzde 44 yoğunluk gradyan santrifüjleme ortamında yeniden süspanse edin. Pipetleyiciyi en düşük hıza ayarlayın, pipeti tüpün yan tarafına yerleştirin ve hücreleri yüzde 67 yoğunluk gradyanlı santrifüj ortamının üzerine nazikçe yerleştirin.Yoğunluk gradyanlarıyla çalışırken, kabarcık yapmaktan kaçınmaya ve gradyan arayüzündeki herhangi bir kesintiyi en aza indirmeye dikkat edin. Ardından, santrifüjlemenin sonundaki arayüzdeki hücreleri toplamak için beş mililitrelik bir transfer pipeti kullanarak hücreleri ayırın. Degradenin nazikçe katmanlanması ve degradelerin arayüzünün dikkatlice çıkarılması kritik adımlar olduğundan, ilgilenilen deneysel hücrelerle prosedürü denemeden önce yoğunluk gradyan santrifüjleme ortamı katmanlaması ve murin splenositlerinin süspansiyonu ile arayüz çıkarma işlemini uygulamak akıllıca olacaktır.Son olarak, toplanan hücreleri 15 mililitrelik konik bir tüpte FBS ile desteklenmiş buz gibi soğuk PBS'de yıkayın ve tripan mavisi dışlaması ile canlı hücrelerin sayısını sayın. CD4 ve CD8-alfa yüzey ekspresyonu, Kollajenaz D sindiriminden etkilenmez, çünkü aynı sayıda CD4 pozitif ve CD8-alfa pozitif hücre, enzimatik sindirim olsun veya olmasın tespit edilir. Ayrıca, Kollajenaz D sindirimi, CD4 pozitif T hücreleri üzerindeki T hücresi aktivasyon belirteçleri CD44 ve CD62L'nin yüzey yoğunluğu üzerinde hiçbir etki göstermez.Gradyan ayrılmasından sonra, milimetre kare yan doku başına yaklaşık 250 canlı bağışıklık hücresi, Oksazolon veya Ox'a meydan okunan farelerden izole edilirken, daha önce Ox ile duyarlı hale getirilmiş, araç meydan okuyan farelerde doku metrekare başına sadece dört canlı bağışıklık hücresi izole edilir ve Ox'a meydan okuyan farelerde düşük ileri ve yan saçılma tek hücrelerinin yüzde 95'i ve araçta zorlanan kontrollerde bu hücrelerin yüzde 71'i canlı CD45 pozitif hücrelerdir, üç günlük Ox zorluğunu takiben yan deride sızan CD67 pozitif bağışıklık hücresi popülasyonunda yaklaşık 45 kat artışa eşdeğerdir. Gerçekten de, Ox meydan okuması, Ox ile tedavi edilen hayvanlarda tek, canlı CD45 pozitif hücrelerin yüzde 42'si, görünür Gr-1 pozitif nötrofiller ve yaklaşık yüzde 84 CD3 pozitif T hücreleri, kontrol, etanol ile muamele edilen hayvanlara kıyasla CD8-alfa veya CD4 eksprese eder. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik düzgün bir şekilde uygulanırsa yaklaşık üç saat içinde tamamlanabilir.Bu prosedürü denerken, yoğunluk gradyanını dikkatli bir şekilde ele almayı unutmamak önemlidir. Bu prosedürü gerçekleştirirken her zaman oda sıcaklığında yoğunluk gradyan santrifüj ortamını kullanmayı unutmayın. Bu prosedürü takiben, cilde sızan lökositlerin fenotipini ve işlevini değerlendirmek için akış sitometrik analizi, hücre sınıflandırması, hücre transferi veya in vitro hücre kültürü gibi diğer yöntemler uygulanabilir.Bu videoyu izledikten sonra, enzimatik sindirim ve yoğunluk gradyanlı santrifüjleme kullanarak cilde sızan lökositlerin nasıl izole edileceğini iyi anlamış olmalısınız.

isolation-infiltrating-leukocytes-from-mouse-skin-using-enzymatic

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Fare beyni infiltre lökositler elde etmek için hızlı bir yöntem açıklanmıştır. Bu yöntem, sürekli Percoll degrade ve süreksiz Ficoll degrade lökosit zenginleştirilmiş katmanı seçin ve arındırmak için kullanır. İzole lökositler akım sitometrik ölçümleri ile karakterize olabilir.

Beyin-infiltre lökositler izolasyonu

Fare genital lenfosit yalıtmak için verimli bir şekilde tarif edilmiştir. Bu yöntem verimli izolasyonu sağlamak için enzim sindirim ve Percoll degrade ayrılık yararlanır. Bu teknik, diğer tür kullanım için de...

Fare Genital Sistemlerinin Mukozanin gelen Lenfosit İzolasyonu

Bu videoda, lamina propria mononükleer hücrelerinin, kollajenaz E ve silika bazlı yoğunluk ayırma ortamı gradyan ayrımı kullanılarak enzimatik sindirim yoluyla murin kolon dokusundan izolasyonunu gösteriyoruz. İzole edilmiş mononükleer hücreler, sonraki aşağı akış analizi için kullanılabilir.

Lamina Propria Mononükleer Hücre İzolasyonu: Murin Kolonundan Mononükleer Hücreler Elde Etmek İçin Silika Bazlı Yoğunluk Gradyanlı Bir Santrifüj Tekniği

Deride yerleşik T hücrelerini insan derisi biyopsilerinden etkili bir şekilde izole etmek için bir protokol açıklıyoruz. Bu protokol, akım sitometrik analizi ve ex vivo kültür için yeterli sayıda canlı insan derisinde yerleşik lenfosit sağlar.

Fenotipik Analizi ve İnsan Cilt lenfosit izolasyonu<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Hücre Kültürü

Cilt, karmaşık bir bağışıklık hücresi ağına ev sahipliği yapar. Tek hücreli bir süspansiyon elde etmek ve deride bulunan farklı lökosit popülasyonlarını akış sitometrisi ile analiz etmek için hayvanın vücudunun farklı bölgelerinden fare derisinin sindirimi için etkili bir metodoloji açıklıyoruz.

Farklı Fare Cilt Bölgelerinden sitoflüorimetrik analize için tek hücre süspansiyonları hazırlanması

Burada, Plasmodium sporozoitlerinin intradermal enjeksiyonunu takiben fare derisinden miyeloid hücreleri izole etmek ve lenf düğümünü boşaltmak için bir protokol açıklıyoruz. Toplanan hücrelerin akış sitometrisi, cildi karakterize etmek ve parazite karşı drenaj lenf nodu inflamatuar yanıtını karakterize etmek için güvenilir bir test sağlar.

Canlı zayıflatılmış intradermal aşılama sonrasında Fare Deri ve akan lenf düğümü gelen Myeloid Hücre İzolasyonu<em&gt; Plasmodium</em&gt; Sporozoitler

Burada biz lenfositler gut ilişkili lenfoid doku Peyer's yamalar ve boşaltma Mezenterik lenf düğümleri de dahil olmak üzere İndüktif sitelerinden ve lamina propria dahil efektör mekanları ekran koruyucu yalıtım için detaylı bir protokol tanımlamak ve bağırsak epitel küçük bağırsak bağışıklık sisteminin.

Lenfositler fare küçük bağırsak bağışıklık sistemi yalıtma

Bu protokol, deri keratinositlerin fare modellerinden izole edilmesi, metal etiketli antikorlarla lekelenme ve farklı hücre döngüsü aşamalarında ilgi proteinlerinin ifade desenini profil için kitle sitometri tarafından lekelenmiş hücreleri analiz etmek için nasıl açıklar.

Kütle sitometrisi ile hücresel protein Ifadesinin hücre döngüsü spesifik analizi için Mouse cilt keratinositlerin yalıtım ve boyama

Bu protokolün amacı kollajenaz kullanarak dokunun enzimatik sindirimi ile kolon lamina propria bulunan mononükleer hücreleri izole etmektir. Bu protokol, mononükleer hücrelerin verimli bir şekilde izolasyonuna olanak sağlar ve bu da sağlam immünhenototipleme için kullanılabilir tek bir hücre süspansiyonu ile sonuçlanır.

Lamina Propria Mononükleer Hücrelerin Murine Kolondan Kollajenaz E Kullanarak İzolasyon

Bu makale, murin endotel hücrelerinin dermal lenfatik kılcal damarlardan manyetik boncuk bazlı izolasyonu için bir yöntemi açıklamaktadır. İzole edilmiş lenfatik endotel hücreleri, aşağı akış in vitro deneyler ve protein ekspresyon analizi için kullanılabilir.

Murin Dermal Lenfatik Endotel Hücre İzolasyonu

Bu protokol, canlı bağışıklık ve bağışıklık dışı popülasyonların fare akciğerinden kararlı bir durumda ve grip enfeksiyonunu takiben izolasyonunu detaylandırır. Ayrıca epitelyal ve miyeloid hücre alt kümelerini tanımlamak için geçit stratejileri sağlar.

Fare Akciğerinden Canlı Miyeloid ve Epitel Hücre Popülasyonlarının İzolasyonu

Öğrenin enzimatik sindirim ve yoğunluk gradyanı ayırma yöntemiyle fare derisinden lökosit izolasyonunu. Bu teknik atopic dermatit gibi deri patolojilerinde hücresel ve moleküler mekanizmaları incelemek için etkili ve ekonomik bir alternatif sunar.

Enzimatik Digest ve Gradient Ayırma kullanma Fare Skin gelen sızan lökositlerin İzolasyonu

Daha fazla video keşfet