Name: Een orthotope Muis Model van Spontane uitzaaiing van borstkanker (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-08-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 11 s
Description: Leer een orthotoop muismodel van spontane uitzaaiing van borstkanker met chirurgische verwijdering van de primaire tumor en luciferase-beeldvorming. Deze methode verlengt de levensduur en maakt real-time monitoring van tumorgroei mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Ondersteund door subsidies van het National Institute of Health, subsidies CA133085, CA182518 en CA185909 (aan KL) en VA Merit Review Award BX001962 (aan KL).

Alle procedures te volgen richtlijnen en protocollen zijn goedgekeurd door Georgia Regents University Animal Gebruik en onderhoud Comité. 1. De vaststelling van Orthotope Tumor Borstkanker <ol><li> Een dag voor het experiment kweek ongeveer 2 x 10 6 4T1-Luc tumorcellen in een 10 cm kweekschaal in 10 ml RPMI medium met 10% FBS. Incubeer de kweekschaal in een CO2 incubator bij 37 ° C en 5% CO2. </li><li> Op de dag van injectie van tumorcellen verwijderen kweekmedium uit de kweekschaal met vacuüm, voeg 5 ml steriel fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS), pH 7,4 aan de kweekschaal en schud de schotel naar de kweekoppervlak wassen, verwijder de PBS door vacuüm. </li><li> Voeg 2 ml trypsine-EDTA (0,05% trypsine en 0,53 mM EDTA) aan de kweekschaal, incubeer in de CO2 incubator bij 37 ° C gedurende ongeveer 5 minuten. Raadpleeg cellen op een omgekeerde microscoop om ervoor te zorgen dat alle cellen worden losgemaakt van de bodem van de kweekschaal. &lt;/ Li&gt; <li> Quench trypsine door toevoeging van 8 ml serum-bevattend medium, cellen overbrengen naar een 15 ml conische buis en centrifugeer de cellen bij ongeveer 450 g gedurende 3 minuten bij kamertemperatuur. </li><li> Verwijder het supernatant door vacuüm en resuspendeer cellen in 10 ml PBS. Centrifugeer cellen bij ongeveer 450 g gedurende 3 min. Verwijder het supernatant door vacuüm en resuspendeer cellen in 10 ml PBS. </li><li> Pipetteer 10 ul van de celsuspensie op een hemocytometer onder het dekglas. Tel de cellen om de celconcentratie te bepalen. Resuspendeer cellen in PBS bij een dichtheid van 2 x 10 5 cellen / ml HBSS. Transfer cellen een 1,5 ml steriele microfugebuis en blijven cellen op ijs tot gebruik. </li><li> Gebruik vrouwelijke BALB / c muizen van 6-8 weken voor tumorcel injectie. <ol><li> Scheer haar in de buurt rond tepel # 3 met behulp van een elektronische tondeuse. Injectie van 4T1 cel in de melkklier 3 vetkussentje genereert reproduceerbaar long metastase. Reinig het geschoren gebied met behulp van het wattenstaafje gedompeld in 70% ethanol. Resuspendeer cellen door het omkeren van de microcentrifugebuis 2-3 keer. Voorzichtig aspireren 50 pi celsuspensie in een ½ CC 27 G 1/2 tuberculine spuit. </li><li> Injecteren van de tumorcellen in het uiervet pad onder # 3 melkklier van een BALB / c muis. Plaats de muis in een schone kooi en de terugkeer van de kooi tot huisvesting dier faciliteit. Wacht ongeveer 21 - 30 dagen voor de ontwikkeling van tumoren. Tumor groei moet worden gecontroleerd op een regelmatige basis als per beleid instelling voor tumor studies. </li></ol></li></ol> 2. Levende Muis Bioluminescentie beeldvorming van tumorgroei <ol><li> Afbeelding muizen elke 3 dagen na tumorinjectie Transfer muizen om de beeldvormende inrichting. Injecteer 100 pl luciferine (30 mg / ml in PBS) intraperitoneaal (ip) bij muizen voorafgaand aan de beeldvorming. Na ongeveer 10 minuten, verdoven muizen in een inductie kamer met 2% isofluraan / O2 flow. Gebruik de tang om het been van de muis te raken. Geen reactie op de aanraking bevestigt that de muis is volledig onbewust. <ol><li> Plaats de muizen in de beeldvorming kamer onder voortdurend 2% isofluraan en O2 met een stroomsnelheid van 2 l / min. Plaats de muis zodanig dat het gebied van belang (dat wil zeggen, de mammaire pad van de eerste tumorinjectie) naar de camera van het beeldvormingssysteem. Zorgen voor de neus en mond van de muis stevig gevestigd in het verdovingsmiddel buis. De dieren moeten worden verdoofd per veterinaire normen van de instelling. </li></ol></li><li> Verwerven bioluminescentie beeldvorming met een scala aan verschillende belichtingstijd. Zo stellen de blootstelling aan 30, gezichtsveld (FOV) tot 25, object hoogte tot 1,5 cm, en het verkrijgen van luminescente fotografische beelden met een laag vermogen X-ray. Stel de meeteenheden voor &quot;uitstraling.&quot; <ol><li> Gebruik een automatische lineaire kleurbereik met een maximum van ongeveer 2,4 x 10 7 uitstraling eenheden. Na het verkrijgen van de eerste beelden, instellingen aan te passen en het verkrijgen van een geoptimaliseerde-afbeelding (figuurTussen 3 en 4). </li></ol></li><li> Terug muizen kooien schoon te maken en te zorgen voor muizen weer bij bewustzijn met het lopen alvorens terug te keren van de dieren aan de behuizing faciliteit. </li><li> Analyseer gegevens met de levende imaging software in verband met de beeldvorming instrument. Met behulp van een imaging-programma, trek een gesloten lijn rond de regio van belang (ROI). Gebruik de imaging software om de straling intensiteit van de ROI te bepalen. Noteer de relatieve intensiteiten van elk ROI per muis. OPMERKING: Hogere uitstraling intensiteiten wijzen op een grotere mate van lichtgevende cellen, en dus een grotere groei van de tumor. </li><li> Visueel onderzoek van de muis om de 3 dagen voor de bijwerkingen. LET OP: Muizen zal een keer per week worden gewogen. Een gewichtsverlies van 15% lichaamsgewicht ongewenste effecten beschouwd en de tumordragende muizen worden gedood zoals beschreven in stap 5 muizen met zwerende tumoren zal worden gedood. </li></ol> 3. chirurgische verwijdering van primaire tumoren NEETE: Autoclaaf scharen, forceps en de wondklemmen en wond klemaanbrenger (figuur 1). <ol><li> Voer de chirurgie in een steriele kap een steriele toestand om het risico van infectie te behouden. Een dag voor de operatie, scheren de omgeving van de tumoren van de tumordragende muizen met een elektrische tondeuse. </li><li> Ongeveer 2-4 uur voor de operatie, voeden de muizen kauwbare tabletten carprofen geformuleerd voor muizen in een dosis van 5 mg / kg lichaamsgewicht. </li><li> Zet de muizen in een kamer die 2% isofluraan in zuurstof gedurende ongeveer 30 sec. Continu verdoven de muis met behulp van een verdoving apparaat tijdens het gehele operatieve periode. </li><li> Gebruik een steriele katoenen stok om dierenarts zalf voor de ogen van de muis tot droog te voorkomen dat tijdens het onder narcose. Gebruik de tang om het been van de muis te raken. Een antwoord op het contact bevestigt dat de muis volledig bewustzijn. </li><li> Ontsmet de huid rond de tumor site met drie afwisselendedoekjes van een soap desinfecterende scrub. Veeg de chirurgische gebied met een alcohol 70% af te vegen. </li><li> Gebruik een steriele scalpel (figuur 1) een kleine incisie nabij de tumor snijden. </li><li> Steek de punt van een paar van gesteriliseerde schaar om de incisie van de huid snijden rond de tumor om de tumor gezwel (Figuur 2A) bloot. Houd de tumor met een steriele pincet en gebruik de schaar om de tumor te scheiden van de huid (figuur 2B). Sla het tumormonster bevroren in een -80 ° C vriezer of bevestiging in 10% formaline oplossing voor toekomstig gebruik. </li><li> Sluit de operatieplaats met 9 mm wondklemmen met de automatische klemaanbrenger (figuur 1). Breng de muis naar een schone kooi met geautoclaveerd beddengoed. De dieren moeten per institutionele richtlijnen worden gecontroleerd. OPMERKING: De muis herwint meestal voldoende bewustzijn en begint te bewegen in de kooi ongeveer 10 - 30 minuten na de operatie. </li><li> Dien carprofen naarmuizen opnieuw 24 uur na de operatie. Carprofen is voor post-chirurgie analgesie en het voorschrijven van na de ingreep analgesie dient te worden geverifieerd door direct overleg met het diergeneeskundig personeel van de instelling. Verwijder de wond clips na de wond geneest (meestal binnen 5-7 dagen na de operatie). Verwijder wond clips met behulp van de auto-clip remover. </li></ol> 4. Levende Muis Bioluminescentie beeldvorming van tumormetastase <ol><li> Afbeelding muizen elke 3 dagen na de operatie zoals beschreven in stap 2. </li></ol> 5. Validatie van longmetastasen gebruik van India Ink Inflatie van tumor-dragende Longen OPMERKING: Om de luciferase live-tumor imaging resultaten te valideren, uitvoeren Indische inkt opblazen van tumor-dragende muis longen naar tumoren te kwantificeren. 4T1 cellen ook uitzaaien naar andere organen en weefsels (figuur 5) en derhalve moet histopathologisch onderzoek van deze organen tumormetastase valideren worden uitgevoerd indien nodig. Dit protocol gebruik Lung metastase als voorbeeld. <ol><li> Houd muizen in hun bestaande huis kooi voor euthanasie. Wanneer ondergebracht bij andere dieren, verhuizen die muizen niet wordt gedood een andere kooi. </li><li> Verwijder de kooi filter top en te vervangen door de CO 2 filter top. Zet het gecomprimeerde CO2 gascilinder (100%) die is verbonden met de CO 2 filterafdekking. Stel het debiet 2 l / min en houden CO 2 gedurende minimaal 10 min. Wanneer de muizen nog ademen eind 10 min, laat het CO 2 totdat ten minste 1 minuut na het stoppen met ademen muizen. Schakel CO 2 cilinder controle en de stroommeter. Wachten op meer 3 minuten en verwijder het filter top. </li><li> Plaats het geofferde-muis op zijn rug op een polystyreen boord. Speld de benen om onbelemmerde toegang tot de luchtpijp te waarborgen. Spuit de muizen met 70% ethanol. </li><li> Met behulp van een schaar gesneden langs de middellijn van het midden abdomen van de muis door de ribbenkast en omhoog naar de salivariëren klieren. Houd rekening met de luchtpijp. Gebruik een tang om weefsels rondom de luchtpijp naar de luchtpijp bloot te verwijderen. </li><li> Rijg een pipet tip onder de luchtpijp. Houd de tip met één hand til de luchtpijp en weg van het lichaam. </li><li> Draai het platform met de muis 180 °. Gebruik een ½ CC 27 G 1/2 tuberculine spuit naar India Ink (10% Oost-Indische inkt en 0,1% ammoniumhydroxide) te injecteren in de longen via de luchtpijp. Volledig opblazen van de longen met inkt totdat er een sterke weerstand wordt gevoeld. </li><li> Gebruik een schaar om de trachea gesneden. Gebruik een tang om de muis te houden en plaats een andere set van tang onder de longen en trek de longkwabben uit de muis. Spoel de longen even in een bekerglas met water. </li><li> In een chemische zuurkast overdracht van de longen een glazen scintillatieflesje met 3 ml oplossing Fekete&#39;s (50% ethanol, 6% formaldehyde en 3% ijsazijn). Cap het flesje te voorkomen dat de oplossing verdampt. NOTITIEDe weefsels kunnen worden opgeslagen in oplossing Fekete&#39;s oneindig. </li><li> Na een paar minuten, acht tumoren als witte stippen op de zwarte longen (figuur 5). De witte tumor gezwel is zichtbaar door de ogen. Breng de longen naar een gerecht in een zuurkast en tel het aantal witte vlekken. Elke witte vlek een enkele uitgezaaide tumor knobbel. </li></ol>

<ol><li>Fantozzi, A., Christofori, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+breast+cancer+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Breast+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Mouse models of breast cancer metastasis.</a> Breast Cancer Res. 8, 212(2006).</li>
<li>Weigelt, B., Peterse, J. L., van 't Veer, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Breast+cancer+metastasis%3A+markers+and+models%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Breast cancer metastasis: markers and models.</a> Nat Rev Cancer. 5, 591-602 (2005).</li>
<li>Kocaturk, B., Versteeg, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orthotopic+injection+of+breast+cancer+cells+into+the+mammary+fat+pad+of+mice+to+study+tumor+growth%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth.</a> J Vis Exp. , (2015).</li>
<li>Stewart, T. J., Abrams, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+tumours+escape+mass+destruction%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">How tumours escape mass destruction.</a> Oncogene. 27, 5894-5903 (2008).</li>
<li>Lopez, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD44+attenuates+metastatic+invasion+during+breast+cancer+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">CD44 attenuates metastatic invasion during breast cancer progression.</a> Cancer Res. 65, 6755-6763 (2005).</li>
<li>Khanna, C., Hunter, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+metastasis+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">Modeling metastasis in vivo.</a> Carcinogenesis. 26, 513-523 (2005).</li>
<li>Cuevas, B. D., Winter-Vann, A. M., Johnson, N. L., Johnson, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MEKK1+controls+matrix+degradation+and+tumor+cell+dissemination+during+metastasis+of+polyoma+middle-T+driven+mammary+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">MEKK1 controls matrix degradation and tumor cell dissemination during metastasis of polyoma middle-T driven mammary cancer.</a> Oncogene. 25, 4998-5010 (2006).</li>
<li>Danna, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Surgical+removal+of+primary+tumor+reverses+tumor-induced+immunosuppression+despite+the+presence+of+metastatic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Surgical removal of primary tumor reverses tumor-induced immunosuppression despite the presence of metastatic disease.</a> Cancer Res. 64, 2205-2211 (2004).</li>
<li>Tao, K., Fang, M., Alroy, J., Sahagian, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imagable+4T1+model+for+the+study+of+late+stage+breast+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Cancer%22%5BJournal%5D)">Imagable 4T1 model for the study of late stage breast cancer.</a> BMC Cancer. 8, 228(2008).</li>
<li>Hu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deregulation+of+apoptotic+factors+Bcl-xL+and+Bax+confers+apoptotic+resistance+to+myeloid-derived+suppressor+cells+and+contributes+to+their+persistence+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Deregulation of apoptotic factors Bcl-xL and Bax confers apoptotic resistance to myeloid-derived suppressor cells and contributes to their persistence in cancer.</a> J Biol Chem. 288, 19103-19115 (2013).</li>
<li>Kwan, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenes+expressing+the+Wnt-1+and+int-2+proto-oncogenes+cooperate+during+mammary+carcinogenesis+in+doubly+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Transgenes expressing the Wnt-1 and int-2 proto-oncogenes cooperate during mammary carcinogenesis in doubly transgenic mice.</a> Mol Cell Biol. 12, 147-154 (1992).</li>
<li>Guy, C. T., Cardiff, R. D., Muller, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+mammary+tumors+by+expression+of+polyomavirus+middle+T+oncogene%3A+a+transgenic+mouse+model+for+metastatic+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Induction of mammary tumors by expression of polyomavirus middle T oncogene: a transgenic mouse model for metastatic disease.</a> Mol Cell Biol. 12, 954-961 (1992).</li>
<li>Almholt, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+metastasis+of+transgenic+mammary+cancer+in+urokinase-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Reduced metastasis of transgenic mammary cancer in urokinase-deficient mice.</a> Int J Cancer. 113, 525-532 (2005).</li>
<li>Gallego, M. I., Bierie, B., Hennighausen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeted+expression+of+HGF%2FSF+in+mouse+mammary+epithelium+leads+to+metastatic+adenosquamous+carcinomas+through+the+activation+of+multiple+signal+transduction+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">Targeted expression of HGF/SF in mouse mammary epithelium leads to metastatic adenosquamous carcinomas through the activation of multiple signal transduction pathways.</a> Oncogene. 22, 8498-8508 (2003).</li>
<li>Lin, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Somatic+mutation+of+p53+leads+to+estrogen+receptor+alpha-positive+and+-negative+mouse+mammary+tumors+with+high+frequency+of+metastasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Somatic mutation of p53 leads to estrogen receptor alpha-positive and -negative mouse mammary tumors with high frequency of metastasis.</a> Cancer Res. 64, 3525-3532 (2004).</li>
<li>Ridgeway, A. G., McMenamin, J., Leder, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P53+levels+determine+outcome+during+beta-catenin+tumor+initiation+and+metastasis+in+the+mammary+gland+and+male+germ+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Oncogene%22%5BJournal%5D)">P53 levels determine outcome during beta-catenin tumor initiation and metastasis in the mammary gland and male germ cells.</a> Oncogene. 25, 3518-3527 (2006).</li>
<li>Zimmerman, M., Hu, X., Liu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+metastasis+and+CTL+adoptive+transfer+immunotherapy+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Experimental metastasis and CTL adoptive transfer immunotherapy mouse model.</a> J Vis Exp. , (2010).</li>
</ol>

Muizen werden aangeschaft bij het Jackson Laboratory en gehuisvest in de dierfaciliteit van de Georgia Regents University. Experimenten en zorg/welzijn voldeden aan de federale regelgeving en een goedgekeurd protocol door het IACUC-comité van de Georgia Regents University. De auteurs hebben niets te onthullen.

Veel soorten transgene muismodellen voor borstkanker metastasen ontwikkeld. 1 Deze transgene muizen hoge tumoren van 60 tot 100%. De metastase incidentie van deze transgene muizen is veel lager dan de tumoren (14-100%). Tumorcellen metastasen te LN en longen in het merendeel van deze transgene muismodellen voor borstkanker metastase. De metastase latency varieert van model tot model en varieert van 2 tot 8 maanden. 6,11-16 Deze transgene muismodellen van de uitzaaiing van borstkanker zijn uitsteken...

Volgens de American Cancer Society, borstkanker is de meest gediagnosticeerde vorm van kanker bij vrouwen in de Verenigde Staten. Vroege detectie in combinatie met recent ontwikkelde gerichte therapieën aanzienlijk verminderd de mortaliteit van borstkanker in de laatste twee decennia. Echter, borstkanker blijft de tweede belangrijkste oorzaak van kanker-gerelateerde sterfgevallen bij vrouwen in de Verenigde Staten 1. De meeste sterfgevallen borstkanker patiënten vanwege tumorcelmetastase. Helaas zijn de meeste borstkanker invasief en vaak uitzaaiing de lymfeklieren en vervolgens naar verre organen, zoals bot, long, lever en hersenen. 1,2 Er is momenteel geen effectieve therapie voor metastatische borstkanker. Derhalve ontwikkeling van chemotherapeutische en immunotherapeutische middelen onderdrukt metastatische borstkanker is van grote betekenis. Diverse borstkanker spontane metastase muismodellen hebben bEen ontwikkeld om de moleculaire mechanismen borsttumorcellijn progressie en metastase en worden gebruikt als modellen voor de ontwikkeling van therapeutische middelen te bestuderen. 1,3-5 De meeste van deze muizenmodellen genetische tumormodellen die, terwijl uitstekende modellen voor mechanistische studies, niet geschikt voor het testen van therapeutische middelen omdat de metastase duurt maanden ontwikkelen in deze genetische modellen, waardoor kostbare langdurige toediening van de antikankermiddelen ter. 6,7 Monitoring tumorprogressie in levende muizen is technisch uitdagend. Daarentegen getransplanteerde borstkankermetastasen model heeft de voordelen van korte tumorprogressie gemakkelijk volgen van tumorprogressie in levende muizen. De 4T1 orthotope borstkanker spontane metastase muismodel zo&#39;n tumormodel getransplanteerd. 8 In dit model worden de borsttumorcellen getransplanteerd in de borstklier vetkussentje primaire tumoren vastgesteld. De primaire tumorkan vervolgens chirurgisch worden verwijderd bij menselijke borstkanker. 4T1 tumorcellen zijn zeer invasieve. 8,9, 3,10 Bijna alle tumor-dragende muizen ontwikkelen metastase in 30 dagen na tumor transplantatie in het uiervet pad. Echter, 4T1 tumoren groeien agressief in de primaire sites en de tumor maten overschrijden vaak de grenzen die zijn toegestaan ​​in de meeste dieren protocollen. In dit stadium de uitzaaiingen vaak micrometastasen. Daarom is het essentieel om primaire tumoren verwijderen metastase vooruitgang testen therapeutische middelen toe. Hier melden wij de inrichting van een eenvoudige en toch gevoelige procedure primaire tumor transplantatie, chirurgische verwijdering van de primaire tumor en bioluminescentie-imaging kwantificering van de 4T1 tumorgroei en progressie in vivo.

<table><tbody><tr><td>Ami-X Imaging System&nbsp;</td><td>Spectral Instruments Imaging Inc. Tucson, AZ</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IsoTec SurgiVet</td><td>Anesthesia Service &amp; Equipment, Inc., Atlanta, GA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>AutoClip Physicians Kit</td><td>Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD</td><td>427638</td><td></td></tr><tr><td>9 mm AutoClip Applier&nbsp;</td><td>Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD</td><td>427630</td><td></td></tr><tr><td>9 mm AutoClip Remover</td><td>Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD</td><td>427637</td><td></td></tr><tr><td>9 mm AutoClip Wound Clip</td><td>Becton Dickinson Primary Care Diagnostics. Sparks, MD</td><td>427631</td><td></td></tr><tr><td>Sharp-Pointed Dissecting Scissors</td><td>Fisher</td><td>8940</td><td></td></tr><tr><td>Dissecting Fine-Pointed Forceps</td><td>Fisher</td><td>8875</td><td></td></tr><tr><td>1/2 CC 27&nbsp;G&nbsp;1/2 tuberculin syringe</td><td>Becton Dickinson and Co. NJ&nbsp;</td><td>305620</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 1640 medium</td><td>Mediatech Inc</td><td>10-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Mediatech Inc</td><td>21-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>70% Ethanol</td><td>Ultrapure-usa.com</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA</td><td>Mediatech Inc</td><td>25-040-CI</td><td></td></tr></tbody></table>

een orthotope muis model van spontane uitzaaiing van borstkanker

An Orthotopic Mouse Model of Spontaneous Breast Cancer Metastasis

Metastase is de belangrijkste doodsoorzaak van borstkankerpatiënten. Het mechanisme dat kankercellen metastase, waaronder borstkanker metastase, is grotendeels onbekend en is een focus in kankeronderzoek. Verschillende borstkanker spontane metastase muismodellen zijn vastgesteld. Hier melden wij een vereenvoudigde procedure om orthotope getransplanteerde borstkanker primaire tumor vast te stellen en de daaruit voortvloeiende spontane metastase dat de menselijke borstkanker uitzaaiingen na te bootsen. In combinatie met de bioluminescentie levende tumor imaging Dit muismodel maakt tumorgroei en progressie kinetiek worden gecontroleerd en gekwantificeerd. In dit model, een lage dosis (1 x 10 4 cellen) of 4T1-Luc borstkankercellen werd geïnjecteerd in BALB / c muis mammair vetkussentje met een tuberculine injectiespuit. Muizen werden geïnjecteerd met luciferine en afgebeeld op verschillende tijdstippen met een bioluminescente beeldvormingssysteem. Wanneer de primaire tumoren groeide uit tot de maximale grootte als in de IACUC-goedgekeurde protocol (ca.oximately 30 dagen) werden de muizen geanesthetiseerd onder constante stroom van 2% isofluraan en zuurstof. Het tumoroppervlak werd gesteriliseerd met 70% ethanol. De muis huid rond de tumor werd weggesneden op de tumor die werd verwijderd met een paar steriele schaar bloot. Verwijdering van de primaire tumor verlengt de overleving van 4T-1 tumordragende muizen gedurende één maand. De muizen werden vervolgens herhaaldelijk afgebeeld voor uitgezaaide tumor verspreiden naar verre organen. Therapeutische middelen kunnen worden toegediend om tumormetastase te onderdrukken op dit punt. Dit model is eenvoudig en toch gevoelig kwantificeren borstkanker celgroei in de primaire plaats en progressie kinetiek naar verre organen, en dus is een uitstekend model voor het bestuderen van de groei van borstkanker en progressie, en voor het testen van anti-metastase therapeutische en immunotherapeutische agentia in vivo .

Oprichting van Orthotope Breast Cancer Mouse Model 4T1 is een agressieve mammacarcinoom cellijn. Injectie van zo weinig als 1 x 10 4 cellen in het uiervet pad kan leiden tot invoering van één tumor knobbel in de plaats van injectie (Figuur 2A). Daarom is de tumor bootst humane primaire borstcarcinoom. Bijna 100% muizen ontwikkelen de orthotope tumor. De tumorgrootte kan worden gekwantificeerd met een digitale schuifmaat of levende tumor...

Een orthotope borstkanker primaire tumor model en chirurgische verwijdering van de primaire tumor de muis het leven uit te breiden tot spontane metastase genereren beschreven. De tumorgroei en progressie worden gecontroleerd en gekwantificeerd luciferase fluorescentiebeeldvorming.

Een orthotope Muis Model van Spontane uitzaaiing van borstkanker

Metastasis is the primary cause of mortality of breast cancer patients. The mechanism underlying cancer cell metastasis, including breast cancer ...

Het algemene doel van deze procedure is het tot stand brengen van een muismodel voor spontane metastase van borstkanker, waarmee zowel de groei van de primaire borstkankertumor kan worden gekwantificeerd als de kinetiek van de borstkankermetastasen kan worden gevisualiseerd en gemeten. Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van kernvragen op het gebied van spontane kankermetastase, zoals de vraag hoe het wijzigen van tumorgeassocieerde genen de kankergroei en metastase kan beïnvloeden. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat dit model de ontwikkeling van menselijke borstkanker nabootst, waardoor het ideaal is voor het testen van de werkzaamheid van therapeutische middelen. Oogst op de dag van het experiment een overnight-cultuur van 4T1 luciferase-tumorcellen en pellet de cellen door centrifugatie. Verwijder het supernatant met een vacuümsysteem, was de cellen vervolgens in 10ml PBS en resuspendeer de pellet in 10ml verse PBS voor het tellen. Verdun de cellen vervolgens tot een concentratie van 2x10^5 cellen/ml in HBSS en breng de suspensie over in steriele microcentrifugebuisjes van 1,5ml op ijs. Fixeer daarna de muis met de hand, markeer de melkklieren van een 6

an-orthotopic-mouse-model-of-spontaneous-breast-cancer-metastasis

Research

JoVE Journal

Medicine

Geneeskunde

De video toont de orthotopische inentingstechniek voor borstkanker in een muismodel. Deze techniek produceert een hoge tumorigenesesnelheid met minder variabiliteit in tumorgrootte en vorm in vergelijking met subcutane of niet-chirurgische injectie.

Orthotopische injectie: weefselspecifieke kankercellen implanteren in een volwassen muis

This video describes the protocol to establish a spontaneous metastasis mouse model of colorectal cancer patient-derived xenografts or PDXs. These xenograft models partially mimic the features of human carcinomas and understand the critical aspects of human malignancies, including invasion and metastasis.

Spontaneous Metastasis Mouse Models: A Platform to Study the Metastatic Potential of Orthotopically Injected Colorectal Cancer Cells

Activering van latente mutaties met adenovirus-Cre in de borstklier ductale systeem een ​​klinisch relevante metastatische borstkanker. Opneming van een YFP promotor maakt het volgen van distale metastatische tumorcellen. Dit model is nuttig om latente metastase, anti-tumor immuniteit, en voor het ontwerpen van nieuwe immunotherapieën behandeling van borstkanker bestuderen.

Initiatie van gemetastaseerd borstcarcinoom door Targeting van de Ductaal Epitheel met adenovirus-Cre: A Novel transgeen muismodel van de Breast Cancer

Kanker is een complexe ziekte die wordt beïnvloed door het weefsel rondom de tumor en lokale pro- en anti-inflammatoire mediatoren. Daarom kan orthotroop injectie modellen plaats subcutane modellen nuttig om de progressie van kanker te bestuderen op een wijze die beter nabootst humane pathologie.

Orthotopische Injectie van borstkankercellen in de uiervet Pad van Muizen tumorgroei te bestuderen.

De metastatische verspreiding van kanker de belangrijkste oorzaak van kankersterfte. Wij bieden een uitgebreide beschrijving van ons overleven chirurgie methodologie voor de oprichting van een "patiënt-achtige" orthotoop syngeen muis modelsysteem voor het bestuderen van de mechanismen van metastase in vaste orgel tumoren.

Een &quot;Patiënt-Like&quot; Orthotope Syngene Mouse Model van Hepatocellular carcinoom metastase

Er werd een chirurgische procedure ontwikkeld om mamma-tumorcellen via injectie in de poortader in de muizenlever af te leveren. Dit model maakt onderzoek naar late stadia van levermetastase mogelijk bij een volledig immuuncompetente gastheer, inclusief extravasatie van tumorcellen, zaaien, overleven en metastatische uitgroei in de lever.

Een poortader Injection Model op de studie van de lever metastase van borstkanker

Wij introduceren een lymfkliertest orthotopic borst kanker en radicale mastectomie model met bioluminescentie technologie te kwantificeren van de last van de tumor om na te bootsen menselijke borst kanker progressie.

Het genereren van een lymfkliertest Orthotopic uitgezaaide borst kanker Model en het uitvoeren van lymfkliertest radicale mastectomie

Hier presenteren we een protocol om het implantaat van borstkankercellen in de borstklier vet pad in een eenvoudige, minder invasief, en gemakkelijk te bedienen manier, en deze orthotopic borst kanker muismodel met een juiste borstklier vet pad omgeving kan worden gebruikt voor het onderzoeken van verschillende aspecten van kanker.

Orthotopic injectie van borstkankercellen in de borstklier vet Pad muizen

Het huidige protocol beschrijft intratibia osteosarcoom celinjectie om muismodellen te genereren met orthotopisch osteosarcoom en pulmonale metastase laesies.

Intratibiale osteosarcoomcelinjectie om orthotopisch osteosarcoom en longmetastase muismodellen te genereren

Het manuscript beschrijft een methodologie voor het opzetten en longitudinaal monitoren van spontane longmetastasen van orthotopisch geïnjecteerde borsttumoren, die vatbaar is voor interventie in alle stadia van de metastatische cascade.

In vivo Beeldvorming om spontane longmetastasen van orthotopisch geïnjecteerde borsttumorcellen te meten

Leer een orthotoop muismodel van spontane uitzaaiing van borstkanker met chirurgische verwijdering van de primaire tumor en luciferase-beeldvorming. Deze methode verlengt de levensduur en maakt real-time monitoring van tumorgroei mogelijk.

Een orthotope Muis Model van Spontane uitzaaiing van borstkanker

Meer video's verkennen