Name: Prevención de Estrés Térmico efectos adversos en ratas Bacillus subtilis Strain (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-07-11T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 57 s
Description: Aprende a evaluar el efecto preventivo de Bacillus subtilis BSB3 contra complicaciones por estrés térmico en ratas mediante tratamiento oral. Este protocolo flexible permite adaptar rutas de administración para futuros estudios.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Este trabajo fue financiado por el fondo de la Universidad de Auburn FOP 101002-139294-2050.

Todos los procedimientos experimentales fueron aprobados por el IACUC de la Universidad de Auburn, Auburn, Alabama. 1. Preparación de medios de cultivo, platos y Cultura bacteriana <ol><li> Inocular 10 ml de caldo nutritivo en un matraz con una sola colonia de la cultura BSB3 Bacillus subtilis, que se cultiva durante la noche en una placa de agar nutriente. </li><li> Hacer 500 ml de medio de esporulación 19 (por litro: Bacto Nutrient Broth, 8 g; 10% (w / v) de KCl, 10 ml; 1,2% (w / v) MgSO4 x 7H 2 O, 10 ml; agar, 15 g) y autoclave a 121 ° C durante 20 min. Dejar enfriar a 50 ° C y añadir las siguientes soluciones estériles: 1 M de Ca (NO3) 2, 1 ml; 0,01 M MnCl 2, 1 ml; 1 mM de FeSO 4, 1 ml. </li><li> Medio preparado Enfriar a 40 ° C durante 20 min a temperatura ambiente y verter 25 ml en cada una de 20 placas de Petri estériles en el gabinete estéril. Deje que el medio solidifique durante la noche. </li><li> Difundir 0,5 ml de cultivo de una noche de Bacillus subtilis BSB3 sobre la superficie del medio en las placas de Petri. Incubar cultivo a 37 ° C durante 5 días hasta el 90% de esporulación. Revelar esporas de fase brillante de alta resolución de la microscopía. </li><li> bacterias de la cosecha mediante la adición de 1 ml de solución salina tamponada con fosfato estéril (PBS) a la placa y el raspado bacterias de una superficie usando un esparcidor de células estériles. Guarde la suspensión en el refrigerador hasta que sea necesario. </li><li> Confirmar viabilidad de las bacterias en placas 0,1 ml de la dilución apropiada (10 -5-10 -6) de una suspensión bacteriana en placas de medio de esporulación seguido de incubación durante 18-24 horas a 37 ° C </li><li> Recuento de las colonias bacterianas de las placas usando un contador de colonias y calcular el título de las bacterias en la suspensión de la prueba. Preparar suspensión bacteriana con la concentración final 1 x 10 8 UFC / ml en PBS. </li></ol> 2. Animales <ol><li> Utilice 32 ratas Sprague-Dawley macho (250 - 300 g,). Mantener los animales en condiciones libres de patógenos específicos con acceso libre a pienso estándar de pellets y agua. Establecer una temperatura media (21 ± 1 ° C), humedad (50 ± 5%) y un ciclo de luz-oscuridad de 12 horas. </li></ol> 3. Diseño Experimental <ol><li> Iniciar el tratamiento de los animales por sonda oral 11, después de 2 días de aclimatación. Usar la jeringa con la aguja de gavage oral. El tratamiento de las ratas con 16 B. suspensión subtilis BSB3 (1 ml por rata) dos veces al día durante dos días (B. subtilis grupo). Tratar a 16 ratas con PBS (1 ml por rata) dos veces al día durante dos días (grupo PBS) (Figura 1). </li><li> Después del tratamiento, una subdivisión de cada grupo (8 ratas por grupo): Grupo 1- control (PBS / sin estrés), Grupo 2- B. subtilis (B. subtilis / sin estrés), Grupo 3- estrés (PBS / estrés por calor) y el Grupo B. 4- subtilis + estrés (B. subtilis estrés / calor). </li><li> Medir la temperatura rectal de cada rata usando un electronic termómetro digital. Mantener las ratas de los grupos 1 y 2 a temperatura ambiente durante 25 min. Coloque los animales de los grupos 3 y 4 en una cámara climática a 45 ° C y una humedad relativa del 55% durante 25 min. </li><li> Después, medir la temperatura rectal de cada rata en todos los grupos utilizando un termómetro digital electrónico. Coloque todos los animales a temperatura ambiente durante 4 h. </li><li> Anestesiar las ratas con isoflurano (2-4%) en un frasco de anestesia sellable y observar hasta que las ratas se anestesiaron profundamente (ausencia de respuesta a pizca dedo del pie). La eutanasia a las ratas por decapitación rápida con una guillotina. </li><li> Recoger la sangre del tronco de cada rata 20 (15 - 16 ml) con las pipetas apirógenas en tubos apirógenas para obtener suero e inmediatamente tomar muestras de sangre (7 l de cada rata) con una pipeta para el examen microscópico. </li><li> Poner los tubos con la sangre en un refrigerador durante al menos 30 minutos para permitir la coagulación. Tubos de centrifugación a 20 ° C, 7.000 xg durante 10 minutos y rápidamenteeliminar el suero con una pipeta. Suero alícuota obtenida de cada rata en 50 volúmenes l y se almacena a -20 ° C hasta el ensayo. </li></ol> 4. Procedimiento Quirúrgico <ol><li> Cortar / recorte toda la piel del abdomen y el tórax de la parte inferior de la carcasa con unas tijeras eléctricas. Coloque la carcasa en un gabinete estéril y tratar la superficie afeitada de la carcasa con alcohol 70%. </li><li> Utilice un bisturí estéril para crear una incisión en la línea media del abdomen. Eliminar hígado, ganglios linfáticos mesentéricos, el bazo y el intestino delgado de cada rata utilizando pinzas estériles. </li></ol> 5. Análisis de la translocación bacteriana <ol><li> Colocar cada muestra de hígado, ganglios linfáticos mesentéricos y el bazo en tubos estériles tarados y pesar. Calcular el peso de la muestra como una diferencia entre el peso de un tubo con una muestra y el peso de un tubo vacío. </li><li> Añadir PBS estéril al tubo para obtener una dilución 1:10 (w / v) de la muestra y homogeNiza cada muestra con un homogeneizador de tejidos de vidrio estéril para obtener una suspensión homogénea 21. </li><li> Hacer diluciones seriadas (10 -1 a 10 -4) de cada muestra en PBS estéril. Plate 0,1 ml de todas las diluciones de cada tejido sobre la superficie de MacConkey y agar de sangre 5% y agar sangre Brucella con hemina (0,005 g / L) y vitamina K1 (0,01 g / L) placas. </li><li> Incubar MacConkey y de placas de agar sangre 5% aeróbicamente y placas de agar sangre Brucella en condiciones anaeróbicas a 37 ° C 22. </li><li> Recuento de las colonias de bacterias aerobias después de 24 hr, y las colonias de bacterias anaerobias después de 48 horas de incubación usando un contador de colonias. Expresar los resultados como el número de unidades formadoras de colonias (UFC) en un gramo de tejido. </li></ol> 6. Análisis histológico <ol><li> Retire pequeñas muestras de intestino de cada rata por el procedimiento quirúrgico (pasos 4.1 a 4.2). Fijar las muestras en fijador de Bouin, incrustar en parafina,preparar 6 micras secciones y secciones de tinción con hematoxilina y eosina usando procedimientos estándar 23. </li><li> Utilice un sistema de microscopio de alta resolución para medir la altura de las vellosidades intestinales y espesor total de la mucosa en cada muestra (aumento de 100X) 24. Analizar 4 muestras de cada rata y hacer por lo menos veinte mediciones en cada muestra. Expresar los resultados en micrómetros. </li></ol> 7. Ensayo de citoquinas <ol><li> Utilice kits comerciales de ELISA para rata IL-1β; IL-6; TNF-α; INF-γ, y IL-10 para medir los niveles de citoquinas en el suero de acuerdo con el protocolo del fabricante. </li><li> Generar curvas estándar para cada conjunto de muestras ensayadas usando estándares para el kit relevante. Definir el nivel de citocinas en cada muestra por comparación de los datos experimentales con la curva estándar apropiado. </li></ol> 8. Ensayo de lipopolisacárido <ol><li> Analizar el nivel de LPS en el suero usando una rata kit de ELISA de acuerdo con LPSprotocolo del fabricante. Estimar la concentración de LPS en muestras por comparación de los valores obtenidos con los valores de la curva estándar. </li></ol> 9. Alta Resolución Microscopía de Sangre <ol><li> Utilizar el sistema de microscopio descrito previamente 25,26. Utilice una plataforma de aislamiento de vibración como una base para el sistema de microscopio y cámara de vídeo y el ordenador 25 para grabar las imágenes en vivo. Calibrar las imágenes de prueba utilizando una diapositiva Richardson como se ha descrito previamente 27. </li><li> Coloque 7 l de sangre recién extraída de cada rata en un portaobjetos de vidrio, cubreobjetos, fotografiar y grabar diez cuadros de imagen de 72 x 53,3 m 2 en cada muestra (ampliación 1,700X). </li><li> Medir la concentración de vesículas utilizando software que proporciona una alta resolución de visión directa imágenes ópticas en tiempo real. Examinar un mínimo de 20 cuadros de imagen para cada condición experimental 28. </li></ol> 10. Statistics <ol><li> Expresar todos los valores como media y desviación estándar. Realizar el análisis estadístico y el trazado gráfico. Analizar los resultados con la prueba t de dos muestras, ajustar el nivel de significación de 0,05 para definir la significación estadística. </li></ol>

<ol><li>Crandall, C. G., Gonzalez-Alonso, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+function+in+the+heat-stressed+human%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular function in the heat-stressed human.</a> Acta Physiol. 199, 407-423 (2010).</li>
<li>Lambert, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+gastrointestinal+permeability+in+exertional+heatstroke%5BTitle%5D)+AND+%22Exerc.+Sport+Sci.+Rev%22%5BJournal%5D)">Role of gastrointestinal permeability in exertional heatstroke.</a> Exerc. Sport Sci. Rev. 32, 185-190 (2004).</li>
<li>Yu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+heat+stress+on+the+porcine+small+intestine%3A+A+morphological+and+gene+expression+study%5BTitle%5D)+AND+%22Comp.+Biochem.+Physiol.+A-Mol.+Integr.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Effect of heat stress on the porcine small intestine: A morphological and gene expression study.</a> Comp. Biochem. Physiol. A-Mol. Integr. Physiol. 156, 119-128 (2010).</li>
<li>Moseley, P. L., Gisolfi, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+Frontiers+in+Thermoregulation+and+Exercise%5BTitle%5D)+AND+%22Sports+Med%22%5BJournal%5D)">New Frontiers in Thermoregulation and Exercise.</a> Sports Med. 16, 163-167 (1993).</li>
<li>Lambert, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress-induced+gastrointestinal+barrier+dysfunction+and+its+inflammatory+effects%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Anim.+Sci%22%5BJournal%5D)">Stress-induced gastrointestinal barrier dysfunction and its inflammatory effects.</a> J. Anim. Sci. 87, 101-108 (2009).</li>
<li>Berg, A., Muller, H. M., Rathmann, S., Deibert, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+gastrointestinal+system+-+An+essential+target+organ+of+the+athlete%27s+health+and+physical+performance%5BTitle%5D)+AND+%22Exerc.+Immunol.+Rev%22%5BJournal%5D)">The gastrointestinal system - An essential target organ of the athlete's health and physical performance.</a> Exerc. Immunol. Rev. 5, 78-95 (1999).</li>
<li>Khan, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microbes%2C+intestinal+inflammation+and+probiotics%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev+Gastroent%22%5BJournal%5D)">Microbes, intestinal inflammation and probiotics.</a> Expert Rev Gastroent. 6, 81-94 (2012).</li>
<li>Quigley, E. M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prebiotics+and+Probiotics%3A+Their+Role+in+the+Management+of+Gastrointestinal+Disorders+in+Adults%5BTitle%5D)+AND+%22Nutr+Clin+Pract%22%5BJournal%5D)">Prebiotics and Probiotics: Their Role in the Management of Gastrointestinal Disorders in Adults.</a> Nutr Clin Pract. 27, 195-200 (2012).</li>
<li>Gore, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+and+secondary+prevention+effects+of+the+probiotics+Lactobacillus+paracasei+or+Bifidobacterium+lactis+on+early+infant+eczema%3A+randomized+controlled+trial+with+follow-up+until+age+3+years%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Allergy%22%5BJournal%5D)">Treatment and secondary prevention effects of the probiotics Lactobacillus paracasei or Bifidobacterium lactis on early infant eczema: randomized controlled trial with follow-up until age 3 years.</a> Clin Exp Allergy. 42, 112-122 (2012).</li>
<li>Gomes, A. C., Bueno, A. A., de Souza, R. G. M., Mota, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gut+microbiota%2C+probiotics+and+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Nutr.+J%22%5BJournal%5D)">Gut microbiota, probiotics and diabetes.</a> Nutr. J. 13, (2014).</li>
<li>Eutamene, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergy+between+Lactobacillus+paracasei+and+its+bacterial+products+to+counteract+stress-induced+gut+permeability+and+sensitivity+increase+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Nutr%22%5BJournal%5D)">Synergy between Lactobacillus paracasei and its bacterial products to counteract stress-induced gut permeability and sensitivity increase in rats.</a> J. Nutr. 137, 1901-1907 (2007).</li>
<li>Ait-Belgnaoui, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lactobacillus+farciminis+treatment+attenuates+stress-induced+overexpression+of+Fos+protein+in+spinal+and+supraspinal+sites+after+colorectal+distension+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neurogastroenterol.+Motil%22%5BJournal%5D)">Lactobacillus farciminis treatment attenuates stress-induced overexpression of Fos protein in spinal and supraspinal sites after colorectal distension in rats.</a> Neurogastroenterol. Motil. 21, 585-593 (2009).</li>
<li>Fujiya, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Bacillus+subtilis+quorum-sensing+molecule+CSF+contributes+to+intestinal+Homeostasis+via+OCTN2%2C+a+host+cell+membrane+transporter%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+Microbe%22%5BJournal%5D)">The Bacillus subtilis quorum-sensing molecule CSF contributes to intestinal Homeostasis via OCTN2, a host cell membrane transporter.</a> Cell Host Microbe. 1, 299-308 (2007).</li>
<li>Cutting, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bacillus+probiotics%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Bacillus probiotics.</a> Food Microbiol. 28, 214-220 (2011).</li>
<li>Pinchuk, I. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+anti-Helicobacter+pylori+activity+of+the+probiotic+strain+Bacillus+subtilis+3+is+due+to+secretion+of+antibiotics%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob+Agents+Ch%22%5BJournal%5D)">In vitro anti-Helicobacter pylori activity of the probiotic strain Bacillus subtilis 3 is due to secretion of antibiotics.</a> Antimicrob Agents Ch. 45, 3156-3161 (2001).</li>
<li>Sorokulova, I. B., Kirik, D. L., Pinchuk, I. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Probiotics+against+Campylobacter+pathogens%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Travel+Med%22%5BJournal%5D)">Probiotics against Campylobacter pathogens.</a> J. Travel Med. 4, 167-170 (1997).</li>
<li>Gracheva, N. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+efficacy+of+the+new+bacterial+preparation+biosporin+in+treating+acute+intestinal+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Zh+Mikrobiol+Epidemiol+Immunobiol%22%5BJournal%5D)">The efficacy of the new bacterial preparation biosporin in treating acute intestinal infections.</a> Zh Mikrobiol Epidemiol Immunobiol. , 75-77 (1996).</li>
<li>Horosheva, T. V., Vodyanoy, V., Sorokulova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+Bacillus+probiotics+in+prevention+of+antibiotic-associated+diarrhoea%3A+a+randomized%2C+double-blind%2C+placebo-controlled+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22JMM+Case+Report%22%5BJournal%5D)">Efficacy of Bacillus probiotics in prevention of antibiotic-associated diarrhoea: a randomized, double-blind, placebo-controlled clinical trial.</a> JMM Case Report. 1, (2014).</li>
<li>Sorokulova, I. B., Krumnow, A. A., Pathirana, S., Mandell, A. J., Vodyanoy, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+Methods+for+Storage+Stability+and+Release+of+Bacillus+Spores%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechnol.+Prog%22%5BJournal%5D)">Novel Methods for Storage Stability and Release of Bacillus Spores.</a> Biotechnol. Prog. 24, 1147-1153 (2008).</li>
<li>Vogel, H. G., Vogel, W. H. Drug Discovery and Evaluation: Pharmacological Assays. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVogel%2C+HG+%22eds+H.G.+Vogel+%26+W.H.+Vogel%22">eds H.G. Vogel & W.H. Vogel</a>. Vogel, H. G., Vogel, W. H. , 658-659 (1997).</li>
<li>Bailey, M. T., Engler, H., Sheridan, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stress+induces+the+translocation+of+cutaneous+and+gastrointestinal+microflora+to+secondary+lymphoid+organs+of+C57BL%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">Stress induces the translocation of cutaneous and gastrointestinal microflora to secondary lymphoid organs of C57BL/6 mice.</a> J. Neuroimmunol. 171, 29-37 (2006).</li>
<li>Rakoff-Nahoum, S., Paglino, J., Eslami-Varzaneh, F., Edberg, S., Medzhitov, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recognition+of+commensal+microflora+by+toll-like+receptors+is+required+for+intestinal+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Recognition of commensal microflora by toll-like receptors is required for intestinal homeostasis.</a> Cell. 118, 229-241 (2004).</li>
<li>Leon, L. R., Blaha, M. D., DuBose, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+course+of+cytokine%2C+corticosterone%2C+and+tissue+injury+responses+in+mice+during+heat+strain+recovery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Time course of cytokine, corticosterone, and tissue injury responses in mice during heat strain recovery.</a> J. Appl. Physiol. 100, 1400-1409 (2006).</li>
<li>Ribeiro, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Weight+loss+and+morphometric+study+of+intestinal+mucosa+in+rats+after+massive+intestinal+resection.+Influence+of+a+glutamine-enriched+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Rev.+Hosp.+Cl%C3%ACn.+Fac.+Med.+S.+Paulo%22%5BJournal%5D)">Weight loss and morphometric study of intestinal mucosa in rats after massive intestinal resection. Influence of a glutamine-enriched diet.</a> Rev. Hosp. Clìn. Fac. Med. S. Paulo. 59, 349-356 (2004).</li>
<li>Vainrub, A., Pustovyy, O., Vodyanoy, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resolution+of+90+nm+%28lambda%2F5%29+in+an+optical+transmission+microscope+with+an+annular+condenser%5BTitle%5D)+AND+%22Opt+Lett%22%5BJournal%5D)">Resolution of 90 nm (lambda/5) in an optical transmission microscope with an annular condenser.</a> Opt Lett. 31, 2855-2857 (2006).</li>
<li>Moore, T., Globa, L., Pustovyy, O., Vodyanoy, V., Sorokulova, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oral+administration+of+Bacillus+subtilis+strain+BSB3+can+prevent+heat+stress-related+adverse+effects+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Oral administration of Bacillus subtilis strain BSB3 can prevent heat stress-related adverse effects in rats.</a> J Appl Microbiol. 117, 1463-1471 (2014).</li>
<li>Richardson, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Test+slides%3A+Diatoms+to+divisions-What+are+you+looking+at%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Roy+Microsc+Soc%22%5BJournal%5D)">Test slides: Diatoms to divisions-What are you looking at.</a> Proc Roy Microsc Soc. 22, 3-9 (1988).</li>
<li>Moore, T., Sorokulova, I., Pustovyy, O., Globa, L., Vodyanoy, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microscopic+evaluation+of+vesicles+shed+by+rat+erythrocytes+at+elevated+temperatures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Therm+Biol%22%5BJournal%5D)">Microscopic evaluation of vesicles shed by rat erythrocytes at elevated temperatures.</a> J Therm Biol. 38, 487-492 (2013).</li>
<li>Leon, L. R., Helwig, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat+stroke%3A+Role+of+the+systemic+inflammatory+response%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Appl.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Heat stroke: Role of the systemic inflammatory response.</a> J. Appl. Physiol. 109, 1980-1988 (2010).</li>
<li>Kumar, Y., Chawla, A., Tatu, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heat+Shock+Protein+70+as+a+Biomarker+of+Heat+Stress+in+a+Simulated+Hot+Cockpit%5BTitle%5D)+AND+%22Aviat+Space+Env+Med%22%5BJournal%5D)">Heat Shock Protein 70 as a Biomarker of Heat Stress in a Simulated Hot Cockpit.</a> Aviat Space Env Med. 74 (7), 711-716 (2007).</li>
</ol>

Los autores declaran que no tienen intereses financieros en competencia.

La exposición a altas temperaturas en condiciones graves de salud 29. La prevención y la detección precoz de complicaciones relacionadas con el estrés por calor son de vital importancia 30. El protocolo presentado se puede utilizar para evaluar la eficacia de los diversos enfoques para la prevención del estrés por calor efectos adversos. Los pasos críticos dentro de este protocolo son: el procedimiento de tratamiento térmico (45 ° C, 25 min...

Diferentes factores estresantes afectan la salud humana y animal. La temperatura es uno de los factores más estresantes, causante de enfermedades crónicas, agudas e incluso letales1. En muchos casos se documentaron cambios en la morfología intestinal y una pérdida de la integridad de la barrera intestinal después del estrés térmico2,3. Esta barrera protectora es responsable de la defensa contra la translocación de las bacterias intestinales y sus toxinas, en particular los lipopolisacáridos (LPS), desde el lumen hasta la circulación interna4,5. La estabilidad de la microbiota intestinal influye significativamente en la función de la barrera intestinal, la respuesta inmunitaria del huésped y la tolerancia a las condiciones de estrés6. Por lo tanto, la modulación de la microbiota intestinal puede proporcionar un enfoque novedoso para la prevención de los efectos adversos relacionados con el estrés. 
Las bacterias beneficiosas se han utilizado como una estrategia prometedora para modificar la microbiota intestinal para el manejo exitoso de diversas afecciones clínicas, como diarrea, enfermedad inflamatoria intestinal, dermatitis atópica, trastornos metabólicos7-10. Los efectos probióticos de las bacterias beneficiosas incluyen la producción de metabolitos esenciales para apoyar la salud intestinal, la estimulación del sistema inmunológico, la promoción de la tolerancia a la lactosa y la restauración de la disfunción epitelial. Los probióticos fueron efectivos en la prevención de las complicaciones relacionadas con el estrés in vitro y en modelos animales11,12. 
Los investigadores han prestado más atención a las bacterias Bacillus como probióticos porque estas bacterias apoyan la homeostasis intestinal13 y tienen efectos beneficiosos sobre el huésped14. Nuestros datos previos demostraron una alta eficacia de los probióticos Bacillus frente a patógenos in vitro15,16 y en ensayos clínicos17,18. En este trabajo, nuestro objetivo es evaluar el efecto preventivo de la cepa BSB3 de B. subtilis frente a las complicaciones posteriores al estrés térmico.

<table><tbody><tr><td>Solución salina tamponada con fosfato (PBS)</td><td>Sigma-Aldrich,&nbsp;St. Louis, MO</td><td>P4417</td><td></td></tr><tr><td>Alcohol etílico&nbsp;</td><td>Productos Pharmco Inc. Brookfield, CT, EE. UU. &nbsp;</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>VWR</td><td>97064-334</td><td></td></tr><tr><td>Placas de agar MacConkey</td><td>VWR</td><td>470180-742</td><td></td></tr><tr><td>Placas de agar sangre al 5% VWR</td><td></td><td>89405-024</td><td></td></tr><tr><td>Placa de agar sangre Brucella con hemin y vitamina K</td><td>VWR</td><td>89405-032</td><td></td></tr><tr><td>Bouin' s Fijador</td><td>de Ciencias de Microscopía Electrónica, Hatfield, PA, EE. UU.</td><td>15990</td><td></td></tr><tr><td>IL-10 Kit ELISA para Ratas</td><td>Invitrogen, Camarillo, CA, EE. UU</td>. <td>KRC0101</td><td></td></tr><tr><td>IL-1beta Kit ELISA para Ratas</td><td>Invitrogen, Camarillo, CA, EE. UU.</td><td>KRC0011</td><td></td></tr><tr><td>IL-6 Kit ELISA para Ratas</td><td>Invitrogen, Camarillo, CA, EE. UU</td>. <td>KRC0061</td><td></td></tr><tr><td>INF-gamma Kit ELISA para Ratas Invitrogen</td><td>, Camarillo, CA, EE. UU.</td><td></td><td></td>KRC4021</tr><tr><td>Kit ELISA para ratas TNF-alfa</td><td>Invitrogen, Camarillo, CA, EE. UU</td>. <td>Kit</td> ELISA LPS para ratas KRC3011 <td></td></tr><tr><td></td><td>NeoBioLab, MA, EE. UU</td>. Cámara ambiental <td>RL0275</td><td></td></tr><tr><td>6020-1</td><td>Caron, Marietta, OH, EE. UU</td>. Centrífuga <td>6020-1</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp;</td><td>Beckman Coulter, Indianápolis, IN, EE. UU.</td> Ultra centrífuga <td></td> Optima L-90K <td></td></tr><tr><td>Sistema</td> óptico de microscopio óptico CitoViva Technology Inc., Auburn, AL Contador de colonias Fisher Scientific , Pittsburgh, PA, EE. UU. Congelador RE-3325 Haier, Brooklyn, NY, EE. UU. HCMO50LA Microplaca Ultra <td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> lector</td><td>Bio-Tek Instrument, Winooski, VT, EE. UU.</td> Lavadora de tiras automática <td>ELx 808</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Bio-Tek Instrument, Winooski, VT, EE. UU.</td> Pipetas <td>ELx50</td><td></td></tr><tr><td>Gilson</td><td>, Pipetman, Francia</td><td>P100, P200, P1000</td><td></td></tr><tr><td>Incubadora C24 Agitador</td> New <td>Brunswick Scientific, Enfield, CT, EE. UU</td>. <td>Classic C24</td><td></td></tr><tr><td>Balanceador &nbsp;</td><td>Reliable Scientific, Inc., Nesbit, MS, EE. UU</td><td>. 55</td><td></td></tr><tr><td>placas de Petri</td><td>Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, EE. UU.</td><td></td><td>875713 100 mm x 15 mm</td></tr><tr><td>SterilGard III Advance</td><td>The Baker Company, Sanford, ME, EE. UU</td>. <td>SG403</td><td></td></tr><tr><td>Matraces de cultivo</td><td>Corning Incorporated, Corning, NY, EE. UU.</td><td>4995</td><td>Frascos PYREX 250 ml Erlenmeyer</td></tr><tr><td>Espectrómetro óptico Genesys 20</td><td>Thermo Scientific, Waltham, MA, EE. UU.</td><td>4001</td><td></td></tr><tr><td>Sony DXC-33 Cámara de video</td><td>Sony</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Richardson diapositiva de prueba</td><td>Ciencia de la microscopía electrónica, Hatfield, PA, EE. UU.</td><td>80303</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de purificación de agua Millipore</td><td>Software Millipore</td><td>Direct-Q</td><td></td></tr><tr><td>Image-Pro Plus</td><td>Media Cybernetics, MD, EE. UU</td><td></td><td></td></tr>. <tr><td>Balanza de triple haz</td><td>OHAUS Corporation, Parsippany, NJ, EE. UU.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Homogeneizador de tejidos, Dounce</td><td>VWR</td><td>71000-518</td><td></td></tr></tbody></table>

prevención de estrés térmico efectos adversos en ratas<em&gt; bacillus subtilis</em&gt; strain

Prevention of Heat Stress Adverse Effects in Rats by Bacillus subtilis Strain

Este estudio fue diseñado para evaluar el efecto protector de la cepa de Bacillus subtilis contra las complicaciones relacionadas con el estrés por calor. Treinta y dos ratas Sprague-Dawley se utilizaron en este estudio. Los animales se trataron por vía oral dos veces al día durante dos días con B. subtilis cepa BSB3 o PBS. El día siguiente después del último tratamiento, cada grupo se dividió y se colocaron dos grupos experimentales (uno tratado con PBS y uno tratado con B. subtilis) a 45 ° C durante 25 min. Dos grupos de control permanecieron durante 25 min a temperatura ambiente. Todas las ratas se sacrificaron y los diferentes parámetros se analizaron en todos los grupos. Los efectos adversos del estrés por calor son registrados por la disminución de la altura de las vellosidades y el grosor total de la mucosa en el epitelio intestinal; translocación de bacterias desde el lumen; aumento de la vesiculación de los eritrocitos y la elevación de los lipopolisacáridos (LPS) el nivel en la sangre. La eficacia protectora de tratamiento se evaluó por prevención de estos efectos secundarios. El protocolo se creó para el tratamiento oral de ratas con bacterias para la prevención de complicaciones de estrés térmico, pero este protocolo puede ser modificado y utilizado para otras vías de administración y para el análisis de diferentes compuestos.

La temperatura corporal media de los animales antes e inmediatamente después del estrés por calor fue de 36,7 ± 0,07 ° C y 40,3 ± 0,17 ° C, respectivamente (P &lt;0,05). La exposición de ratas al calor (grupo 3) resultó en una inhibición significativa de la altura de las vellosidades y el grosor de la mucosa total de (Figuras 2, 3). La administración oral de la cepa BSB3 antes protegida estrés intestino de los efectos nocivos de calor. <p class=...

Describimos un protocolo para la prevención de los efectos del estrés térmico en ratas mediante un pretratamiento oral con bacterias beneficiosas. Este protocolo puede ser modificado y utilizado para diversas vías de administración y para el análisis de diferentes compuestos.

Prevención de Estrés Térmico efectos adversos en ratas<em&gt; Bacillus subtilis</em&gt; Strain

This study was designed to evaluate the protective effect of the Bacillus subtilis strain against complications related to heat stress. Thirty-two ...

El objetivo general de este experimento es evaluar el efecto preventivo de la cepa B.subtilis BSB3 frente a las complicaciones tras el estrés térmico. Este método puede ayudar a responder preguntas clave en la prevención de efectos adversos provocados por el estrés térmico. La ventaja principal de esta técnica es que puede utilizarse para evaluar diferentes enfoques para mitigar las complicaciones del estrés térmico.Este procedimiento será demostrado por Ludmila Globa y Oleg Pusovyy, investigadores asociados de nuestro laboratorio. Para comenzar, con una colonia individual de Bacillus subtilis BSB3 que se cultivó durante la noche en una placa de agar nutriente.Inocule diez mililitros de caldo nutriente en un matraz. Incube el cultivo durante la noche a 37 grados Celsius. Prepare 500 mililitros de medio de esporulación según la receta mostrada aquí.Y autoclavar a 121 grados Celsius durante 20 minutos. Deje que el medio se enfríe hasta 50 grados Celsius antes de añadir las siguientes soluciones estériles. En un gabinete estéril, enfríe el medio preparado a temperatura ambiente hasta 40 grados Celsius durante 20 minutos.Y vierta 25 mililitros en cada una de 20 placas de Petri estérile

prevention-heat-stress-adverse-effects-rats-bacillus-subtilis

Research

Investigación

JoVE Journal

Immunology and Infection

Inmunología e Infección

Este video muestra la puntuación de inducción y clínicas de un modelo animal de esclerosis múltiple: las enfermedades crónico-recidivante la encefalomielitis autoinmune experimental en ratas DA. La enfermedad, inducida por la inmunización de ratas con una emulsión que contiene la médula espinal de ratas y toda adyuvante completo de Freund, presenta un cuadro clínico parecido a la enfermedad humana.

La inducción y la puntuación clínica de enfermedades crónico-recurrente encefalomielitis autoinmune experimental

Fuente: Sorokulova, I., et al. Prevención de los efectos adversos del estrés por calor en ratas por la cepa Bacillus subtilis . J. Vis. Exp. (2016)Este video muestra ratas pretratadas con bacterias beneficiosas o solución salina tamponada con fosfato (PBS) y expuestas al estrés por calor para evaluar la integridad de la barrera intestinal. Menos colonias bacterianas derivadas del intestino del hígado de las ratas tratadas, en contraste con numerosas colonias en ratas de control, indican una...

Evaluación del efecto de las bacterias beneficiosas en la translocación microbiana intestinal en ratas con estrés térmico

Fuente: Sorokulova, I., et al. Prevención de los efectos adversos por estrés térmico en ratas por la cepa Bacillus subtilis. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo presenta análisis histológicos y de microscopía hematológica utilizados para evaluar los efectos protectores de Bacillus subtilis en ratas expuestas al estrés térmico.

Análisis histológicos y hematológicos para evaluar los efectos de Bacillus subtilis en ratas sometidas a estrés térmico

En este video describimos un protocolo paso a paso para estudiar el golpe de calor por esfuerzo (EHS) en un modelo de ratón.

Modelo de ratón de golpe de calor por esfuerzo: un protocolo para estudiar los mecanismos subyacentes al golpe de calor por esfuerzo

Presentamos un protocolo para inducir y detectar CMHs causadas por la inyección de LPS en ratas Sprague-Dawley, que puede ser utilizaron en el futuro las investigaciones de la investigación en la patogenesia de CMHs.

Microhemorragias cerebrales aguda inducida por la inyección de lipopolisacáridos en ratas

Aquí, describimos el protocolo y la implementación de metil-Seq, una plataforma de epigenómica, utilizando un modelo de rata para identificar cambios epigenéticos asociados a la exposición de estrés crónico. Los resultados demuestran que la plataforma de metil-Seq de la rata es capaz de detectar diferencias de metilación que surgen de la exposición del estrés en ratas.

Una plataforma de metil-Seq de rata para identificar cambios epigenéticos asociados a la exposición de estrés

Aquí, caracterizamos las respuestas de estrés proteotóxico celular en el nematodo C. elegans midiendo la activación de los reporteros transcripcionales fluorescentes y diciendo sensibilidad al estrés fisiológico.

Mediciones de las respuestas fisiológicas de estrés en C. Elegans

El protocolo describe el desarrollo de un modelo preclínico estandarizado, repetible y de golpe de calor por esfuerzo (EHS) en ratones libres de estímulos externos adversos como la descarga eléctrica. El modelo proporciona una plataforma para estudios mecanicistas, preventivos y terapéuticos.

Un modelo preclínico de golpe de calor por esfuerzo en ratones

En este artículo, presentamos un protocolo para establecer el modelo de ratón de colitis inducida por sodio, pseudo-germen, sulfato de dextrano libre de antibióticos, para investigar el papel de la microbiota intestinal en la regulación de los efectos positivos del Bacillus cereus sobre la colitis.

Investigación de los efectos paliantes de la administración de Bacillus cereus en la colitis a través de la modulación de la microbiota intestinal

Los microbios intestinales pueden afectar positiva o negativamente la salud de su huésped a través de mecanismos específicos o conservados. Caenorhabditis elegans es una plataforma conveniente para detectar tales microbios. El presente protocolo describe el cribado de alto rendimiento de 48 aislados bacterianos para determinar su impacto en la resistencia al estrés de los nematodos, utilizados como sustitutos de la salud de los gusanos.

Detección de alto rendimiento de aislados microbianos con impacto en la salud de Caenorhabditis elegans

Este protocolo describe un modelo de estrés leve crónico impredecible (CUMS) para la depresión basado en la teoría médica mongola, junto con métodos para validar las pruebas de comportamiento.

Estrés crónico impredecible leve en ratas basado en la medicina mongola

Aprende a evaluar el efecto preventivo de Bacillus subtilis BSB3 contra complicaciones por estrés térmico en ratas mediante tratamiento oral. Este protocolo flexible permite adaptar rutas de administración para futuros estudios.

Prevención de Estrés Térmico efectos adversos en ratas

Explorar más videos