Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Science Education Library
Organic Chemistry

This content is Free Access.

French
Exécution de chromatographie sur couche mince de 1D
 

Exécution de chromatographie sur couche mince de 1D

Article

Transcript

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the English version.

Chromatographie sur couche mince, ou TLC, est une méthode chromatographique utilisée pour séparer les mélanges de composés non volatils, couramment utilisés en chimie organique.

TLC est effectuée sur une plaque de verre ou de plastique-dos. Une ligne de base est marquée sur la plaque, ainsi que des étiquettes. Le mélange en cours d’examen et la référence composés sont dissous dans un solvant approprié et appliqués près le bord inférieur de la plaque TLC en petites taches. La plaque est placée dans un bocal, et un solvant (la phase mobile) sépare le mélange basé sur les propriétés physiques de chaque composant.

Malgré le fait que les techniques de séparation plus lourd instrument ont pouvoir de résolution plus que TLC, c’est la vitesse et faible coût qui fait TLC une technique séduisante pour l’analyse qualitative on-the-fly. Cette vidéo fera la démonstration de la préparation, exploitation et analyse de chromatographie sur couche mince.

Des techniques chromatographiques comprennent une phase stationnaire et mobile. Dans TLC, la phase stationnaire est constituée d’une couche mince de matériel fixé à la plaque. La matière est une substance polaire, comme le gel de silice. La phase mobile est un liquide non polaire qui se déplace vers le haut de la couche d’adsorbante par capillarité. Comme la phase mobile se déplace vers le haut de la plaque, il fait glisser le long des composants de chaque spot, qui sont ensuite séparées basées sur la polarité.

Les composés qui sont moins polaires passera plus de temps dans la phase mobile tel qu’il est tiré vers le haut de la plaque. Composés qui sont plus polaires sont plus attirés par la phase stationnaire et seront déplacera donc pas vers le haut de la plaque pour autant.

La séparation a lieu dans un récipient en voie de développement. Il peut s’agir de bocaux avec des couvercles ou des gobelets recouverts de papier aluminium. Utilisez le plus petit récipient disponible qui accueillera la plaque TLC pour accélérer la séparation.

La phase mobile, ou solvant de développement, devrait être aussi non polaire que possible pour une bonne séparation. Montré qu'ici est une série d’eluotropic pour le gel de silice, une liste de mobile commun phases par ordre croissant de puissance extraction.

Un certain nombre de phases mobiles peut être analysé simultanément. Sur une assiette propre, repérer l’échantillon dissous plusieurs fois, espacées d’au moins 2 cm. Appliquer la phase assez mobile à chaque endroit pour former un cercle de 1-2 cm de diamètre.

Marquer la distance parcourue par la phase mobile. Si la phase mobile n’est pas assez polaire, l’échantillon reste à proximité de l’endroit initial. Si la phase mobile est trop polaire, totalité de l’échantillon va migrer avec le front du solvant. Une phase mobile correspondante indiquera des anneaux bien séparées, avec l’anneau extérieur environ 50 % de la distance et le front du solvant.

Si nécessaire, deux phases mobiles miscibles peuvent être mélangés dans des proportions variables pour obtenir les propriétés voulues. Ici, un mélange de 1:1 de l’acétate d’éthyle et l’hexane a été trop polaire, mais une 01:20 mélange separa de manière appropriée.

Avec la phase mobile choisie, vous êtes prêt à commencer à développer la plaque.

Pour commencer la procédure, couper une plaque TLC disponible dans le commerce à la taille désirée. Si la plaque a un verre de sauvegarde, le score avec une pause le long de la ligne de coupe-verre et soigneusement.

Avec un crayon, marquer une ligne de base environ 1 cm du bas de la plaque. Marquer l’emplacement où les échantillons seront être repérés le long de la ligne. Veillez à ce que les taches sont au moins 1 cm du bord et 3 millimètres. Les étiqueter correctement.

Échantillons solides doivent être dissous dans un solvant approprié. Les solvants sont hexanes, acétate d’éthyle ou dichlorométhane. Utiliser le solvant moins polaire qui se dissout à l’échantillon.

Dresser le mélange solvant/échantillon avec un verre capillaire. Doucement toucher la pointe vers l’emplacement souhaité sur la plaque de TLC et retirez-le immédiatement. Il est important de ne pas déranger la phase stationnaire.

Garder l’endroit aussi petit que possible, car cela conduit à une meilleure séparation. Si plus d’échantillon est nécessaire, des taches peuvent être appliquées successivement à chaque emplacement. Laisser le solvant à sécher entre les applications. Un courant d’air peut être utilisé pour sécher des solvants moins volatils.

La plaque TLC est maintenant prête à être mis au point. Placez un morceau de papier filtre au fond du pot pour augmenter la pression de vapeur. Ajouter la phase mobile jusqu'à une profondeur qui n’atteint pas le niveau de référence. Cap le pot lorsque vous ne l’utilisez donc les vapeurs de solvants n’échappent pas.

Placez soigneusement la plaque de TLC tachetée dans le bocal en voie de développement. Assurez-vous que la phase mobile est au-dessous du niveau de base. Surveiller la progression du front de solvant — le bord d’attaque de la phase mobile — comme il se déplace rapidement vers le haut de la plaque.

Ne laissez pas la phase mobile atteindre le bord supérieur de la plaque, car bandes échantillon commencera à développer par l’intermédiaire de diffusion. Une fois que le front de solvant rapproche du haut, retirez la plaque de la chambre de pays en développement et marquer le front du solvant avec un crayon avant que le solvant ne sèche.

Si les composés ne sont pas colorées, une lampe UV permet de visualiser les taches. Le composé se bloquera la fluorescence de fond de la plaque. Mettre le feu à la mise en ondes courtes et éclairer la plaque sèche. À l’aide d’un crayon, un aperçu des taches visibles sous la lampe. À l’aide d’un crayon, un aperçu des taches visibles sous la lampe.

Une autre technique de visualisation possible consiste à utiliser le permanganate de potassium, un agent oxydant. À l’aide de pinces à épiler, plonger la plaque dans la tache du permanganate.

Retirer et tamponnez solution excès away avec du papier absorbant. Dans une hotte aspirante, soigneusement faire chauffer la plaque avec un pistolet thermique pour visualiser les spots. Utilisez un crayon pour marquer toutes les taches qui apparaissent.

Une fois que les taches ont été visualisées, la substance d’intérêt peut être comparée aux normes, comme illustré ici. Dans cet exemple, l’inconnu est de 1, 3-diphenylpropynone, un bloc de construction en synthèse organique. En comparant la bande à un standard connu et chlorure de benzoyle, un des produits de départ, le produit peut être identifié.

Le facteur de retard, ou Rf, sert à identifier la substance inconnue. La Rf est le rapport entre la distance parcourue par un composé une assiette de TLC à la distance parcourue par la phase mobile. Le facteur est déterminé en mesurant la distance entre la ligne de base à l’endroit et en divisant par la distance entre la ligne de base et le front du solvant.

La Rf d’un composé donné dépend des conditions utilisées pour l’expérience, y compris le choix de solvant, épaisseur et l’activité de l’adsorbant, la température et la taille de l’échantillon. Il faut pour assurer la cohérence entre les expériences de ces facteurs.

Vous avez juste regardé introduction de JoVE pour chromatographie sur couche mince. Vous devez maintenant comprendre la théorie sous-jacente de la séparation, comment choisir une phase mobile appropriée pour votre expérience et comment mettre en place et faire fonctionner une plaque TLC. Merci de regarder !

Read Article

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter