Name: P19 배아 암종을 이용한 신경 발생 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-04-27T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 46 s
Description: 배우세요 P19 배아 암종 세포를 이용한 레티노산 유도 신경 분화 방법을 통해 신경 발생 메커니즘을 연구하는 간소화된 프로토콜입니다. 이 기법은 신경과학 및 발달생물학 연구에 활용됩니다.

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연구 결과는 국립 과학 센터에 의해 재정적으로 지원되었다, 폴란드 (부여 없음. UMO-2017/25/N/NZ3/01886) 및 KNOW (주요 국가 연구 센터) 과학 컨소시엄 "건강한 동물 - 안전한 식품", 과학 고등 교육부의 결정 No. 05-1/KNOW2/2015

1. 문화유지
<ol><li>유지 보수 매체에서 P19 세포주 배양 (Dulbecco의 수정 된 독수리의 배지와 4,500 포도당 의 mg /L 보충 10% FBS, 100 단위 / mL 페니실린 과 100 단위 / mL 연쇄상 구균). 37 °C 및 5 %CO2에서 배양하십시오.</li>
</ol>2. 하위 배양 세포
<ol><li>세포가 약 80% 합류에 도달하면, 세포 배양 플라스크(표면적 25 cm2)로부터 소비배지를 제거한다.</li>
	<li>칼슘과 마그네슘이 없는 인산완충식염수(PBS)2 mL로 세포를 세척합니다.</li>
	<li>세포 단층에 0.25% 트립신-EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산)의 1 mL를 첨가합니다.</li>
	<li>플라스크를 CO2 인큐베이터(37°C 및 5% CO2)에 2-3분 동안 넣습니다.</li>
	<li>플라스크 표면에 대한 세포 부착을 평가합니다. 모든 셀이 매매체에 분리되고 부동되어 있는지 확인합니다.</li>
	<li>트립신의 효소 활동을 중지 유지 보수 매체의 9 mL를 추가합니다.</li>
	<li>유지 관리 매체에서 셀을 다시 일시 중단합니다.</li>
	<li>세포를 200 x g 및 실온(RT)에서 5분 동안 15 mL 튜브 및 원심분리기로 옮긴다.</li>
	<li>상급을 버리고 15 mL 튜브에 신선한 유지 보수 매체 10 mL를 추가하십시오.</li>
	<li>셀 서스펜션을 사용하여 제조업체의 지침에 따라 셀 카운터를 사용하여 셀 번호를 확인합니다.</li>
	<li>새로운 25 cm2 플라스크에서 2 x 104 세포 / cm2에서 종자 세포.</li>
	<li>유지 보수 매체를 최대 10mL까지 추가합니다.</li>
	<li>플라스크를CO2 인큐베이터(37°C 및 5% CO2)에 2-3일 동안 넣습니다.</li>
</ol>3. 트립신 소화
<ol><li>세포 플라스크로부터 흡인 유지 보수 배지. 칼슘 과 마그네슘이없는 PBS의 2 mL로 한 번 세포를 씻어.</li>
	<li>0.25% 트립신-EDTA의 1 mL을 추가합니다.</li>
	<li>세포가 있는 플라스크를 37°C에서 CO2 인큐베이터에 넣고 2-3분 동안 넣습니다.</li>
	<li>1 mL 파이펫을 사용하여 셀을 10번 파이펫팅하여 세포를 해리합니다.</li>
	<li>세포에 RA없이 9 mL의 분화 매체 (Dulbecco의 수정 된 독수리 배지와 포도당 4500 mg / L을 5 % FBS, 100 단위 / mL 페니실린 및 100 단위 / mL 연쇄상 구균)로 보충하여 트립신을 중화하십시오.</li>
	<li>세포를 15 mL 튜브및 원심분리기로 200 x g 및 RT에서 5분 동안 이송합니다.</li>
	<li>상온제를 버리고 레티노산(RA)없이 분화 배지 1 mL를 첨가합니다. 세포 펠릿을 다시 일시 중단합니다.</li>
	<li>셀 서스펜션을 사용하여 제조업체의 지시에 따라 셀 카운터를 사용하여 셀 번호를 결정합니다.</li>
</ol>4. 집계 생성
<ol><li>5 μL의 RA (99.8 % 에탄올에 용해 된 1 mMM 스톡을 -20 °C에서 저장)를 분화 매체의 10 mL에 넣고 잘 혼합하십시오 (0.5 μM RA의 최종 농도). 참고: RA는 빛에 민감합니다. EtOH의 낮은 농도는 세포 분화에 영향을 미치지 않습니다19,20,21.</li>
	<li>100mm 비처리 배양 접시(서스펜션 배양 전용)에 10 mL의 분화 배지(RA)를 추가합니다.</li>
	<li>100mm 접시에 1 x 106 세포를 시드 (접시 표면적 56.5 cm 2).</li>
	<li>응집체 형성을 촉진하기 위해 세포를 37°C 및 5% CO2에서 인큐베이터에 넣고 2일 동안.</li>
	<li>2일 후, 분화 매체를 교환한다. 10 mL 파이펫을 사용하여 응집체를 함유하는 흡인 배지를 RT에서 15 mL 튜브로 전달한다.</li>
	<li>RT에서 1.5분 동안 응집체가 중력에 의해 정착되도록 합니다.</li>
	<li>상급제는 버리십시오.</li>
	<li>10 mL 의 세레학적인 파이펫을 사용하여 0.5 μM RA로 신선한 10 mL의 분화 매체를 추가하십시오. 주의 사항: 셀이 위아래로 응집되지 않도록 피펫을 설치하지 마십시오.</li>
	<li>새로운 100 mm 비 처리 배양 접시에 응집체를 종자 (서스펜션 배양 전용).</li>
	<li>플레이트를 인큐베이터(37°C 및 5% CO2)에서 2일 동안 놓습니다.</li>
</ol>5. 응집체 해리
<ol><li>10 mL 파이펫을 사용하여 셀 응집체를 흡인합니다.</li>
	<li>응집체를 15 mL 튜브로 옮김을 옮김으로 옮김을 옮김. 셀 응집체가 중력에 의해 1.5 분 동안 정착할 수 있도록 합니다.</li>
	<li>상급체를 제거합니다.</li>
	<li>단독으로 DMEM으로 응집체를 세척하십시오 (혈청 및 항생제 - 무료).</li>
	<li>RT에서 1.5분 동안 중력 침전에 의해 세포 응집체가 침전되도록 합니다.</li>
	<li>상한을 흡인하고 트립신-EDTA(0.25%)의 2 mL을 추가합니다.</li>
	<li>세포 응집체를 수조(37°C)에 10분 동안 넣고 손으로 두드려 2분마다 응고물을 부드럽게 교반합니다.</li>
	<li>유지 보수 매체의 4 mL를 추가하여 트립시니화 프로세스를 중지합니다.</li>
	<li>파이펫은 1mL 파이펫을 사용하여 20회 위아래로 응집됩니다.</li>
	<li>200 x g 및 RT에서 5 분 동안 원심 분리지 세포.</li>
	<li>상급체를 제거하고 유지 보수 매체의 5 mL에서 세포 펠릿을 다시 일시 중단하십시오.</li>
	<li>셀 카운터를 사용하여 셀 번호를 확인합니다.</li>
</ol>6. 도금 세포
<ol><li>6웰 플레이트에 유지 보수 매체당 3 mL를 추가합니다.</li>
	<li>종자 세포는 0.5 x 10 6/well의밀도로 6웰 배양 플레이트에서.</li>
	<li>37°C에서 5% CO2 농도로 배양합니다.</li>
	<li>6웰 배양플레이트에서 커버 글라스상에 세포를 시드하고 항MAP2 항체(20% 합류)로 면역염색을 수행한다. 6웰 플레이트를 사용하여 RNA를 분리하고 Map2, NeuN, Oct4, Nano및 Gapdh (20 % 합류)에 대한 RT-PCR을 수행하십시오.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 할 것이 없다.

여기서, 우리는 P19 세포주를 사용하여 신경 발생에 대한 간단한 프로토콜을 기술한다. 많은 보고가 이 점에서 간행되었더라도, P19 세포주를 사용하여 신경 발생 유도를 위한 상세한 방법론은 불분명합니다. 또한, 우리는 전체 실험에 대해 10 % FBS를 가진 간단한 높은 포도당 (4,500 mg / L) DMEM 배지를 이용했습니다. 이를 통해 우리는 사용자 친화적 인 방식으로 신경 성 실험을 수행하고 미래를 위해이 방법의 사용을 확장 할 수있었습니다.
이 프로토콜 내에서 가장 중요한 점은 현탁액 배양내의 세포 응집체 의 생성뿐만 아니라 RA 농도이다. P19 세포주에서 신경발생의 자극은 응집체의 형성 없이 수행될 수 있지만, 생성된 뉴런 세포의 수는 세포 배양(22)에서 3분의 2로 감소될 것이다. Monzo 외. 단층15에서배양하여 P19 세포주에서 신경 발생 유도를 나타내고 있다. 그들의...

배아 발달 도중, 단 하나 세포 층은 3개의 개별적인 세균 층 1,2,3로변환됩니다. 생체 내에서 발생하는 현상의 연구 가능성을 높이기 위해 3차원 응집체(배아 체)의 생성이 편리한 모델로 개발되었습니다. 이러한 방식으로 형성된 세포 응집체는 배아4,5의발달을 반영하는 세포 분화를 유발하는 다양한 조건에 노출될 수 있다. P19 뮤린 배아 암종 세포주(P19 세포주)는 일반적으로 시험관내 신경발생 연구를 위한 세포모델로서 사용된다 6,7,8. P19 세포주 전형적인 다능성 줄기 세포 특징을 전시하고 부착 조건하에서 신경 쇠산 다음에 세포 응집 도중 레티노산 (RA)의 존재에 있는 신경으로 분화할 수 있습니다. 더욱이, 미분화 P19 세포주또한 디메틸 설폭사이드(DMSO)9,10,11,12의영향을 받아 근육-및 심근세포 유사 세포를 형성할 수 있다.
많은 방법13,14,15,16은 신경 분화에 대해 보고되었지만, 방법론은 때때로 복잡하고 설명만 읽음으로써 파악하기가 쉽지 않다. 예를 들어, 프로토콜은 때때로 종아리 혈청(CS) 및 태아 소 혈청(FBS)13의혼합물로 보충된 덜베코의 변형 된 독수리 배지 (DMEM) 배지의 조합을 필요로한다. 더욱이, 신경 발달에 사용되는 매체는 종종 신경분과 B27 보충제13,14,15,16으로구성된다. 따라서 기존 메서드에는 준비의 복잡성이 포함되어 있으며 여기서의 목표는 프로토콜을 단순화하는 것입니다. 본 연구에서, 우리는 FBS를 가진 DMEM이 P19 세포주 (DMEM + 10% FBS)뿐만 아니라 신경 발달 (DMEM + 5% FBS + RA)을 유지하는 데 이용될 수 있음을 입증하였다. P19 세포주를 사용하여 신경 발생을 위한 이 단순화한 방법은 우리가 신경세포가 어떻게 개발되는지의 분자 기계장치를 공부하는 것을 허용합니다. 더욱이, 알츠하이머병과 같은 신경퇴행성 질환에 대한 연구도 P19 세포주17,18을이용하여 진행되고 있으며, 본 연구에서 개발된 방법이 이를 해명하는 데 한 몫을 할 것으로 믿습니다. 신경 발달 이상 및 신경 퇴행성 질환의 분자 메커니즘.

<table><tbody><tr><td>6x DNA 로딩 염료</td><td>EURx</td><td>E0260-01</td><td></td></tr><tr><td>아가로 스</td><td>시그마 - 알드리치</td><td>A9539</td><td></td></tr><tr><td>cDNA 합성 키트</td><td>EURx</td><td>E0801-02</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (4 &prime; ,6-Diamidine-2 &prime; -phenylindole dihydrochloride)</td> <td>시그마 - Aldrich</td><td>10236276001</td><td>작업 농도 : 1 &mu; g/mL</td></tr><tr><td>DMEM 고포도당(4.5g/L) L-글루타민</td><td>Lonza</td><td>BE12-604Q</td><td></td></tr><tr><td>에탄올 99.8%</td><td>Chempur</td><td>CHEM*613964202</td><td></td></tr><tr><td>소 태아 혈청(FBS)</td><td>EURx</td><td>E5050-03</td><td></td></tr><tr><td>MAP2 항체</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>PA517646</td><td>희석 1:100</td></tr><tr><td>PCR 반응 키트</td><td>EURx</td><td>E0411-03</td><td></td></tr><tr><td>페니실린/스트렙토마이신 10K/10K</td><td>Lonza</td><td>DE17-602E</td><td></td></tr><tr><td>인산 완충 식염수 (PBS), Ca2+, Mg2+</td><td>Lonza</td><td>BE17- 517Q</td><td></td></tr><tr><td>레티노산</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>R2625-50MG</td> <td>없이 집중; 99.8 % 에탄올에 용해; -20 &deg에 보관하십시오. C 최대 6개월</td></tr><tr><td>2차 항체 (Alexa Fluor 488)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A11034</td><td>희석 1:500</td></tr><tr><td>탈지 우유</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>1153630500</td><td></td></tr><tr><td>TBE 버퍼</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>B52</td><td></td></tr><tr><td>Triton-X 100</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>T8787-100ML</td><td></td></tr><tr><td>트립신 0.25% - HBSS의 EDTA&nbsp; Ca2+, Mg2+, 페놀 레드</td><td>biosera</td><td>LM-T1720/500</td><td></td></tr><tr><td>세포 배양 플라스틱</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1 mL 혈청학 피펫</td><td>Profilab</td><td>515.01</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td>10 mL</td><td></td></tr><tr><td>현탁 배양 전용 100 mm 접시</td><td>Corning</td><td>C351029</td><td></td></tr><tr><td>15 mL 원심분리기 튜브</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>CLS430791-500EA5</td><td></td></tr><tr><td>mL 혈청학 피펫</td><td>Profilab</td><td>515.05</td><td></td></tr><tr><td>6웰 플레이트</td><td>Corning</td><td>CLS3516</td><td></td></tr><tr><td>세포 배양 플라스크, 표면적 25 cm2</td><td>Sigma- Aldrich</td><td>CLS430639-200EA</td><td></td></tr></tbody></table>

p19 배아 암종을 이용한 신경 발생

Neurogenesis Using P19 Embryonal Carcinoma Cells

마우스 배아 유래 기형암유래 P19 세포주들은 3개의 세균 층으로 분화하는 능력을 가지고 있다. 레티노산(RA)의 존재에서, 현탁액 배양된 P19 세포주들은 뉴런으로 분화하도록 유도된다. 이 현상은 시험관에서 신경 발생 모델로 광범위하게 조사된다. 따라서, P19 세포주신경발생과 관련된 분자 및 세포 연구에 매우 유용하다. 그러나, 문헌에 기재된 P19 세포주신경 분화를 위한 프로토콜은 매우 복잡하다. 이 연구에서 개발 된 방법은 간단 하 고 신경 발달 이상 및 신경 퇴행 성 질환에 분자 메커니즘을 해명에 역할을 할 것 이다.

P19 세포주에서 신경 발생 유도에 대한 프로토콜의 단순화 된 계획은 도1에 제시되어 있다. P19 세포주의 특성을 미분화 상태 및 신경 발생 시 정의하기 위해 RT-PCR(역전사-폴리머라제 연쇄 반응) 방법을 사용하였다. 미분화 P19 세포주들은 유기 양이온/카르니틴 트랜스포터4(Oct4) 및 나노홈박스(Nanog)와 같은 다능성 유전자를 발현하였다. RA의 존재에서 현탁액 배양에서 세포 응집에 의해 유도된 신경발생은 Oct4 및 나노발현의 급격한 감소를 이끌었다. 반대로, 뉴런 마커의 발현: 미세투관 관련 단백질 2(Map2) 및 NeuN(RNA 결합 단백질이라고도 함, 폭스-1 호몰로그 3(Rbfox3)))은 신경 발생 유발 후 증가 (도2)<...

P19 마우스 배아 암세포주(P19 세포주)는 생체내 분석에 비해 매우 단순화된 신경발생의 분자 기전을 연구하는데 널리 사용된다. 여기서, 우리는 P19 세포주에서 레티노산 유도 신경발생에 대한 프로토콜을 제시한다.

P19 배아 암종을 이용한 신경 발생

The P19 cell line derived from a mouse embryo-derived teratocarcinoma has the ability to differentiate into the three germ layers. In the presence of ...

P19 세포주 신경으로 분화 하는 것으로 알려져 있다. 그러나, P19 세포주 뉴런 분화를 위한 프로토콜은 때때로 복잡합니다. 이 방법을 통해 우리는 사용자 친화적 인 방식으로 신경 유발 실험을 수행하고 미래를위한 P19 세포주 사용 가능성을 확대 할 수 있습니다.시작하려면, DMEM로 구성된 유지 보수 매체에서 P19 세포를 유지, 와 4.5 포도당의 리터 당 그램, 보충 10% 태아 소 혈청, 100 밀리 리터 페니실린 당 단위, 그리고 100 밀리리터 연쇄 상 감식 당 단위. 세포 배양을 섭씨 37도 및 5%의 이산화탄소 환경에서 세포가 약 80%의 컨실업할 때까지 배양합니다. 세포 배양에서 소비된 배지를 제거하고 칼슘과 마그네슘이 없는 PBS 2밀리리터로 세포를 세척합니다.세포의 단층을 완전히 커버하고 섭씨 37도, 이산화탄소 5%를 2~3분 동안 배양하기 위해 0.25%의 트립신-EDTA 1밀리리터를 추가합니다. 현미경의 밑에, 모든 세포가 분리되어 있는지 확인하십시오. 트립신을 중화시키기 위해 유지 보수 매체의 9 밀리리터에서 세포를 다시 중단합니다.세포를 15밀리리터 튜브와 원심분리기로 200배 G및 실온으로 5분간 전달하여 세포를 펠릿합니다. 그런 다음 펠릿을 방해하지 않고 상류체를 흡인시합니다. 신선한 유지 보수 매체의 10 밀리리터에서 펠릿을 다시 중단하고 제조업체의 지침에 따라 세포 수를 결정하기 위해 셀 카운터를 사용합니다.씨앗 20, 새로운 T-25 플라스크에 평방 센티미터 당 000 세포및 유지 보수 매체의 최대 10 밀리리터를 추가합니다. 섭씨 37도, 이산화탄소 5%에서 2~3일 동안 배양합니다. 트립신 소화를 시작하려면 먼저 체퍼를 천천히 흡인시키고 칼슘과 마그네슘이없는 PBS의 두 밀리리터로 세포를 씻으십시오.그런 다음, 세포에 0.25%의 트립신 EDTA의 1 밀리리터를 추가하고 2 ~ 3 분 동안 섭씨 37도 및 5 %의 이산화탄소로 배양합니다. 인큐베이션 후, 트립신을 중화시키고, 포도당 수준이 높은 DMEM로 구성되고 5%의 태아 소 혈청, 밀리리터 페니실린 당 100단위, 밀리리터 연쇄절제술당 100단위로 보충된 분화 매체의 9밀리리터에서 세포를 재연한다. 세포를 15밀리리터 튜브와 원심분리기로 200배 G및 실온으로 5분간 전달하여 세포를 펠릿합니다.그런 다음, 서서히 상류체를 흡인하고 RA없이 신선한 분화 매체의 1 밀리리터에서 펠릿을 재중단합니다. 셀 카운터를 사용

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Research

연구

JoVE Journal

Developmental Biology

발생생물학

폐기 인간의 태아 대뇌 피질의 조직에서 신경 줄기 세포의 격리와 문화에 대한 간단하고 신뢰할 수있는 방법을 설명합니다. 알려진 인간의 신경 장애에서 파생된 문화가 같은 약리 효능을 평가하기위한 플랫폼을 제공뿐만 아니라, 병적인 세포 및 분자 공정의 특성에 사용될 수 있습니다.

폐기 인간 태아 두피 조직에서 신경 줄기 세포의 생성

체세포 줄기 세포의 확장을 제어하는​​ 것은 자신의 연구와 치료에 사용 hampering 결정하는 주요 요인입니다. 여기 시간적 마우스 뇌에서 생성 된 뉴런의 수를 증가하는 데 사용할 수있는 개발 및 성인기 동안 신경 줄기 세포 확장을 제어 할 수있는 시스템을 설명합니다.

의 배아와 성인 신경 줄기 세포의 확장<em&gt; 자궁에</em&gt; Electroporation 또는 바이러스 성 Stereotaxic 주입

이 비디오는 P19 마우스 배아 암종 세포에서 레티노산 유도 신경 발생에 대한 간단한 기술을 보여줍니다. 레티노산(Retinoic acid)은 전사 인자(transcription factor)를 활성화하고 신경 세포 분화를 위한 유전자 발현을 유발합니다.

마우스 배아 암종 세포를 이용한 레티노산 유도 신경 발생

pial 표면은 증가 주목을 받고 CNS에서 독특한 전구 영역입니다. 여기서, 세부 사항보기 개질 전기 천공 법을 사용하여이 시조 존의 급격한 유전자 조작 방법을 우리. 이 절차는 세포 계통 및 세포 분화에 관련된 신호 전달 경로의 세포 및 분자 연구에 사용할 수 있습니다와 딸 세포의 운명과 특성을 설명하기 위하여.

신생아 Pial 표면 에레

플록스, 조건부 발암성 대립유전자로 조작되고 바이러스 Cre 매개 재조합을 통해 형질전환된 마우스에서 채취한 표현형 야생형 성상세포와 신경 줄기세포는 syngeneic, immune-competent littermate의 뇌에 형질전환된 세포의 orthotopic 주입에 의해 in vitro 및 in vivo에서 성상세포종 발병기전을 모델링하는 데 사용할 수 있습니다.

모델링 성상 세포종 병인 체외와 생체 대뇌 피질의 성상이나 조건, 유전자 조작 쥐에서 신경 줄기 세포를 사용하여

이 프로토콜은 많은 신경 질환에서 질병 발병에 기여하는 발달 경로를 식별하는 데 사용할 수 있는 강력하고 복제적인 신경 세포 집단을 생성하기 위해 신경 전구 세포를 인간 유도 만능 줄기 세포와 구별할 수 있는 방법을 설명합니다.

신경 질환의 연구에 대한 생성 및 사용 hiPSC 파생 NPC들에 가이드

상피에서 중간엽으로의 전이(EMT)는 암이 침습적이 될 수 있도록 합니다. EMT를 조사하기 위해 혈청과 효소가 없는 신경줄기세포(NSC) 기반 체외 모델을 설명합니다. 이 표준화된 시스템을 통해 세포 이동, 유전자 및 단백질 발현에 대한 정량적 및 정성적 평가를 수행할 수 있습니다. 이 모델은 신약 개발에 적합합니다.

약 발견에 적합 EMT 조사를위한 효소 - 및 혈청이없는 신경 줄기 세포 배양 모델

신경 전구체의 생체 외 렌티 바이러스 공학에 기초하여, 야생 형 뇌로의 공동 이식및 "테스트"와 "제어"유도체의 쌍 형태 평가, 이 방법은 신피질의 생체 내 유전자 제어의 정확한 모델링을 할 수 있습니다 간단하고 저렴한 방법으로 뉴런 형태.

생체 내 신경 아키텍처 연구를 위한 엔지니어링된 신경 전구체의 내 측 통 이식

이 프로토콜은 센다이 바이러스 감염에 의해 신경 줄기 세포를 유도하는 말초 혈액 단핵 세포의 재프로그래밍을 제시, 도파민성 뉴런으로 iNC의 분화, 일방적으로 병변에 DA 전구체의 이식 파킨슨병 마우스 모델, PD 치료를 위한 iNSC 유래 DA 전구체의 안전성 및 효능에 대한 평가.

말초 단핵 세포에서 유도 된 신경 줄기 세포의 생성 및 이식 연구에 대 한 도파민성 신경 전구체로 분화

여기에 제시된 자궁 전기화에서 사용하는 배아 페렛 뇌에서 유전자 조작을 수행하는 프로토콜이 있다. 이 방법은 생체 내의 신피질에서 신경 전구 세포를 표적으로 하는 것을 허용합니다.

자궁 에서 뇌포화에 의해 페렛 신피질에서 신경 전구 세포의 생체 포팅

여기에서는 성체 쥐 뇌실 영역에서 분리된 확장된 신경 줄기 세포(NSC)에서 유전자 전달 효율성을 향상시키도록 설계된 핵절충 시스템에 대해 설명합니다. 이 연구 결과는 이 방법이 NSC의 유전자 섭동을 크게 개선하여 기존 transfection 프로토콜의 효과를 능가하고 세포 생존율을 향상시킨다는 것을 보여줍니다.

Isolation, Expansion, and Nucleofection of Neural Stem Cells from Adult Murine Subventricular Zone

배우세요 P19 배아 암종 세포를 이용한 레티노산 유도 신경 분화 방법을 통해 신경 발생 메커니즘을 연구하는 간소화된 프로토콜입니다. 이 기법은 신경과학 및 발달생물학 연구에 활용됩니다.

P19 배아 암종을 이용한 신경 발생

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