Uyku ve Meksika Cavefish Lokomotor aktivite otomatik ölçümleri

Bu protokol herhangi bir balık popülasyonundaki uyku ve aktiviteyi ölçmek için kullanılabilir ve uyku regülasyonlarını incelemek için kullanılan model sistemlerin sayısını genişletme potansiyeline sahiptir. Bu tekniğin avantajı esnekliğidir. Örneğin, balıklar çeşitli arena boyutlarında veya tek ildeki veya grup lu deneylerde izlenebilir.

Bu sistemde uyku ölçme gücü yüksek iş gücü ilaç veya genetik tarama için yöntemin amenability olduğunu. Bu yöntemi, önemli ölçüde farklı uyku fenotiplerini gösteren iki farklı mağara balığı popülasyonunda uykuevriminin incelenmesine uyguladık. Davranışsal görüntüleme için bir sistem kurmak zor olsa da, sistemimiz larva ve erişkin balıkları incelemek için uygun maliyetli bir yöntem sunmaktadır.

Larva A.mexicanus’ta uyku ve sirkadiyen ritimleri incelemek için lokomotor davranışı doğru bir şekilde izlemek için sistemi oluşturmak için, larva takip sistemi için bir platform oluşturmak için 0.33 santimetre kalınlığında beyaz işaret akrilik kullanın. Kayıt platformlarını, balık içeren arenaların davranışsal izleme deneyleri sırasında yer alacağı ışıklı kare ısı lavabonun üzerine yerleştirin ve optimum aydınlatma ve kontrast için kızılötesi ni yaymak için hayvan gövdesindeki ışıklar arasında kutunun içine ikinci bir akrilik yerleştirin. Tüm larva izleme aşamasını ve aydınlatmayı kapalı bir plastik tüpün içine yerleştirin.

Lensi deneysel olarak uygun bir web kamerasından çıkarmak için döner bir alet kullanın. İç gövdeyi çıkarmak için kameranın arka daki küçük vidaları çıkarın ve lensin geri kalanını gevşetmek için kameranın gövdesindeki küçük vidaları çıkarın. Lensi kestikten sonra kalan lens gövdesinin herhangi bir kısmını çıkarmak için küçük bir tornavida kullanın.

Ve şarj-coupled cihazın veya CCD muhafaza üst kısmında mavi ışık yayan diyot kaldırın. Daha sonra, iki dış vidayı orijinal konumlarına geri vidalamadan önce iç gövdeyi orijinal yönüyle döndürün. Kameranın bir lens adaptörüeşlik edene kadar ekstra plastik yumuşatma yuvarlak bir plastik yönlendirme bit imal etmek için kameranın içini yönlendirmek için küçük bir testere kullanın.

Kamerayla doğrudan temas etmeden kameranın içine mümkün olduğunca yakın bir kızılötesi geçiş filtresi tonu tonuyla kameranın arkasına doğru 35 milimetrelik sabit lensin adaptörünün vidasını verin. Daha sonra kamera yı ve lensi, sahne ve ışıkları barındıran tüpün üst kısmındaki kapağın içine delinmiş deliğe yerleştirin ve USB’yi hayvanların kaydedeceği bilgisayara takın. Yetişkin balıklar için bir uyku sistemi oluşturmak için, ilk yaklaşık 46 santimetre aralıklarla kızılötesi şeritler kesti.

Ve kızılötesi ışığı yaymak için 46’ya 5’lik 0,32 santimetre lik ışık geçişi beyaz işaret akrilik levhayı her kızılötesi ışık şeridinin tam önüne yerleştirin. Daha sonra tüm tankları arkaya monte edilmiş kızılötesi aydınlatmayı destekleyen bir rafa yerleştirin ve tek tek arenalar oluşturmak için opak plastik bölücüler ve 10 litrelik cam tanklar kullanın. Meksika tetra balığının lokomotor aktivitesini kaydetmek için 4-6 post-fertilizasyon balığı 24 kuyulu doku plakasının bireysel kuyularına, ve altı kuyulu doku plakasının bireysel kuyularında 20-30 post-fertilizasyon ait.

Bölücüler olsun veya olmasın, 10 litrelik tank başına beş yetişkine kadar sosyal bir ortamda yetişkin tetra uyku su ve aktivite kaydetmek için. Bu temsili deneyde, üç bağımsız mağara balığı popülasyonundan larva balıkları yüzey balıklarına göre uykuda önemli bir azalma göstermiştir. Uyku da önemli ölçüde yetişkin Pachon, Molino ve Tinaja mağara balık yüzey balık göre azaltılmış olarak test edilen tüm çağlar boyunca bu uyku üretimi tutarlıdır.

Özellikle, sosyal konut sağlam mağara balık popülasyonları bir bodrum etkisi nedeniyle Pacho mağara balık uyku etkilemeden yüzey balık uyku azalttı. Balık kayıt yaparken kamera aydınlatmaarka göre balık sinyalini geliştirmek için en uygun olduğundan emin olmak için alınmalıdır. Metinde tam olarak açıklanan ve herhangi bir laboratuar ayarı için uygun olması gereken bu protokol için bazı temel komut satırı kodlaması gereklidir.

Bu protokol uyku evrimi hakkında çok sayıda soruya yol açmıştır ve şu anda uyuşturucu ekranları için kullanılmakta olan, uyku davranışı izlemek, ve sosyal davranış uyku nasıl etkilediğini anlamak.