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Uso de francotirador Cas9 para minimizar efectos Off-target de CRISPR Cas9 sin la pérdida de actividad en blanco mediante evolución dirigida
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Using Sniper-Cas9 to Minimize Off-target Effects of CRISPR-Cas9 Without the Loss of On-target Activity Via Directed Evolution
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Uso de francotirador Cas9 para minimizar efectos Off-target de CRISPR Cas9 sin la pérdida de actividad en blanco mediante evolución dirigida

DOI:
10.3791/59202-v

•

11:37 min

•

February 26, 2019

•

, , ,
1ToolGen

Chapters

  • 00:04Title
  • 01:45Positive and Negative Screening for Evolving Cas9
  • 04:47Delivery of Cas9 as an RNP with Truncated sgRNA
  • 06:17RNP Delivery
  • 07:27Transfection of Plasmids Encoding Sniper-Cas9 and sgRNA
  • 09:01Targeted Deep Sequencing for the Analysis of On-target and Potential Off-target Sites
  • 09:29Results: Analysis of Sniper-screen, On-target and Off-target Activities
  • 10:37Conclusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Aquí, presentamos un protocolo para optimizar CRISPR Cas9 para lograr una mayor especificidad sin la pérdida de actividad en el blanco. Utilizamos un enfoque de evolución dirigida llamado Sniper-pantalla para encontrar a un mutante Cas9 con las características deseadas. Sniper-Cas9 es compatible con truncado solo guía RNAs y entrega en un formato de ribonucleoproteína, conocidas estrategias para lograr mayor especificidad.

Tags

CRISPR-Cas9Off-target EffectsDirected EvolutionSniper-Cas9On-target ActivitySpecificityLibrary ScreeningTherapeutic DevelopmentCas9 VariantsY-type Cas9ElectroporationCompetent Cells

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