Name: 닭 에이메리아 기생충의 핵 과 생체 내 전파 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-02-14T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 26 s
Description: 학습하세요 닭 에이메리아 기생충의 핵전이 기법으로 유전자 조작 및 백신 개발 연구를 진행하는 방법을. 뉴클레오펙션을 활용한 이 실험은 생체 내 전파 가능성을 검증합니다.

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이 작품은 중국의 국가 핵심 연구 개발 프로그램 (2017YFD0501200)과 중국 국립 자연 과학 재단 (31572507, 31772728 및 31873007)에 의해 지원되었습니다.

모든 동물 실험을 위한 닭은 중국 농업 대학 기관 동물 관리 및 사용 위원회 지침에 따라 보관 및 유지되었고 동물과 관련된 생물 의학 연구를 위한 국제 지침 원칙을 따랐습니다. 실험은 실험실 동물의 베이징 관리위원회에 의해 승인되었다.
1. 에이메리아 종의 포자화체 추출 및 정제(예: 테넬라)
<ol><li>스포로시스트 의 출시<ol>
<li>원심 분리기 1 x 107칼륨 디크롬산염 용액 (2.5 %, m / v)에서 2,300 x g에서 5 분 동안 산발화 된 우모 낭포체를 PBS (인산 완충액)로 3 회 씻으십시오.</li>
		<li>1 mL의 PBS로 펠릿을 다시 중단하고 15 mL 튜브로 옮김. 동일한 부피의 유리 비드(1mm x 1mm 직경 범위)를 추가하고 소용돌이 믹서를 사용하여 oocyst 현탁액을 진동하여 스포로시스트를 방출합니다.</li>
		<li>매 분마다 현미경 검사법에 의해 포자화의 방출을 모니터링하십시오. 난모낭의 90 % 이상이 부러졌을 때 소용돌이를 멈추십시오. 참고 : oocysts의 대부분 (예 : 테넬라, E. necatrix,및 E. acervulina)소용돌이 믹서를 사용하여 1 분 후에 깨졌다.</li>
		<li>스포로시스트 서스펜션을 새로운 1.5mL 튜브와 원심분리기를 1,600 x g에서 5분 동안 옮긴다.</li>
		<li>50% 밀도 그라데이션 용액의 1 mL로 침전지를 다시 중단하고 1.5 mL 튜브에 결합하고 1 분 동안 10,000 x g에서 원심 분리기를 결합하십시오. 참고: 밀도 그라데이션 컴포지션의 경우 표 1을참조하십시오. 밀도 구배는 폴리비닐피롤리돈(PVP)을 사용하여 코팅된 15-30 nm 직경(물에서 23% w/w)의 콜로이드 실리카 입자로 구성된 실리카 기반 콜로이드 배지입니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>스포로조이의 방출<ol>
<li>엑시스테이션버퍼(표 1)로침전물을 재중단하고 42°C 수조에서 40-60분 동안 배양하여 포자화물을 방출한다. 포자이의 90 % 이상이 방출 될 때 배양을 중지하십시오. 그런 다음 600 x g에서 10 분 동안 원심 분리기를. 참고: 임신 중에는 5분마다 한 번씩 튜브를 흔들어 주세요.</li>
		<li>10,000 x g에서 10,000 x g의 55% 밀도 그라데이션 용액과 원심분리기의 1mL로 1mL로 1분 동안 강수량을 다시 중단합니다.</li>
		<li>PBS의 1 mL로 강수량을 다시 중단하고 혈세포계를 사용하여 포자화수를 계산합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. E. 네카트릭스의 메로조이트 수집 및 정화
참고: 실험에서 7-14d의 아버 에이커(AA) 육조를 사용하십시오. 코시디아가 없는 닭(n=3)은 E. necatrix의2 x 105 난모낭으로 접종하였다. 감염 후 109 시간에서, 조류는 자궁 경부 탈구에 의해 희생되었다. 장은 2세대 메로 조이의 수집을 위해 제거되었습니다. 다른 Eimeria 종에 대 한,2 세대 merozoites의 수집에 대 한 다른 시간이 있었다: E. necatrix 에서 109 시간, 그리고 E. 테넬라 에서 112 시간 후 접종. E. necatrix의형질감염에 대 한, 두 번째 merozoites 정화 하기 쉬운 최적의 선택.
<ol><li>E. 네카트릭스의 2세대 메로조이트 컬렉션
	<ol>
<li>닭장줄기(소장 의 중간)에서 일레오세칼 오리피스까지 닭장나무줄기를 세로로 자르고, 페트리 접시에 PBS 또는 HBSS(행크의 균형 잡힌 소금 용액)로 세 번 부드럽게 씻습니다.</li>
		<li>소장을 0.5 cm x 0.5 cm 조각으로 자르고 소화 완충액으로 원추형 플라스크에 넣습니다(표 1). 플라스크를 37°C의 마그네틱 믹서위에 놓고 교반 막대를 30-60분 동안 저어메로조이트 방출합니다. 배양 30분 후, 5분마다 현미경 검사로 메로조이산의 방출을 모니터링합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>여과 및 원심 분리에 의해 메로 조이트 정제.<ol>
<li>거즈14의4 층을 사용하여 소화 된 메로 조이트 함유 현탁액을 걸러내고 600 x g에서 원심 분리기를 10 분 동안 걸러내다.</li>
		<li>원심 분리 후 장 파편이 들어있는 상한자를 버리십시오. 정제된 메로조이트로 침전물을 1.5 mL 튜브로 옮김을 옮김.</li>
		<li>PBS의 1 mL로 강수량을 다시 중단하고 혈세포계를 사용하여 merozoites를 계산합니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 메로조이트 또는 포자형의 핵
<ol><li>기생충의 핵형성 전에 준비<ol>
<li>한 튜브에 약 107 개의 메로 조이또는 포자형염을 준비하십시오. 메로조이스를 트랜스페팅하는 경우 3-4개의 튜브를 준비하십시오.</li>
		<li>10 μg 보다 크거나 같은 플라스미드 DNA 또는 정제된 PCR 단편의 양을 준비한다. 참고: 본 연구에 사용된 플라스미드는 2개의 유전자를 포함합니다: 향상된 황색 형광 단백질 (EYFP) 및 톡소플라즈마 곤디(TgDHFR-TS)15에서유래한 디하이드로폴레이트 환원효소 신타제.</li>
		<li>제한 효소 25U를 준비합니다. 플라스미드가 선형화되면, 제한 효소는 형질감염 효율을 향상시킬 수 있다. 플라스미드가 원형이면 제한 효소를 생략하십시오.</li>
		<li>85 μL의 핵 형성 완충액을 준비: 20 μL의 핵형성 완충제 I 및 1 mL의 핵형성 완충제 II를 혼합하고, 용액의 일부를 사용한다. 총 버퍼의 부피는 100 μL입니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>핵 형성<ol>
<li>10 분 동안 600 x g에서 스포로 조이트 또는 메로 조이트 현탁액을 원심 분리기. 그런 다음 상급을 버리십시오.</li>
		<li>다음 순서로, 핵 형질전환 완충제 85 μL, 플라스미드 10 μg (PCR 단편), 그리고 25 U의 제한 효소 (보통 5 μL)를 스포로조이트 또는 메로조이스를 함유하는 1.5 mL 튜브에 추가합니다.</li>
		<li>서스펜션을 핵 형질전환 컵으로 옮김을 옮김으로 옮김. 컵을 핵 이송 홈에 넣습니다.</li>
		<li>전원 버튼을 사용하여 핵 형성 장치를 켜고 형질 전환 절차 U-033을선택합니다. 핵 제거 장치가 자유 프로그램 선택 모드에서 시작되면 X 버튼을 눌러이 모드를 종료합니다.</li>
		<li>프로그램이 완료되면 핵 형성 장치의 X 버튼을 누르면 화면이 확인되어핵이 성공했음을 나타냅니다.</li>
		<li>Dulbecco의 수정 된 독수리의 매체 (DMEM)8의 0.5-1 mL을 핵 패드에 추가하여 반응을 멈추고 부드럽게 혼합 한 후 현탁액을 1.5 mL 튜브로 옮니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. 클로아칼 접종 또는 정맥 주사
<ol><li>핵에 감염된 기생충을 7일 된 닭으로 접종합니다. Cloacal 경로를 통해 E. necatrix 또는 E. tenella의 포종자체의 메로조이스를 접종하지만 정맥 주사를 통해 E. acervulina sporozoites를 접종합니다. 각 닭에 약 2 x10 7백만 개의 포자를 접종하고 각 새에 대해 메로조이107을 접종합니다.</li>
</ol>5. 전파 및 FACS 분류
<ol><li>형질 감염된 포자화염으로 접종 후 5-9 일 동안 대변에서 난모낭을 수집하십시오. 형질 전환 된 메로 조이트 (merozoites)로 접종 한 후 3 일째에 난모낭을 수집하십시오.</li>
	<li>형광 활성화 세포 선별 (FACS) 및 150 mg /kg 피리메타민8을 사용하여 형질전환 인구 비율을 연속적으로 증가시다. 참고: 피리메타민을 피드에 직접 추가하여 사용하십시오. 보다 편리하게 사용시 수용성 피리메타민을 준비하십시오. 0.2 mL pf H2SO4 및 N-메틸 피롤리돈 (NMP)의 9.8 mL에 피리메타민 1 g을 녹인 다음 이 스톡 용액 1.5 mL을 조류용 식수 1L에 넣습니다.</li>
</ol>6. 선택적 컬럼 정화
참고 : 더 순수한 스포로 조이또는 메로 조이가 필요한 경우, 디에틸 아미노 에틸 -52 셀룰로오스 (DE-52 셀룰로오스) 컬럼을 통해 그들을 정화하는 선택적 방법이 있다.
<ol><li>DE-52 셀룰로오스 컬럼을 적어도 하루 전에 준비하십시오.<ol>
<li>글리신 용리화 완충제를 준비한다(표1). 글리신 용리액 완충액의 pH를 7.6 에서 8.0으로 조정하고 41°C로 미리 따뜻하게 한다.</li>
		<li>열에 DE-52 셀룰로오스 2.5 g을 추가합니다. 물을 넣고 하룻밤 동안 담가 둡니다. 상급제는 버리십시오.</li>
		<li>물을 넣고 1시간 동안 담그세요.</li>
		<li>0.1 M NaOH를 넣고 적어도 2시간 동안 담가 둡니다. 이 단계를 반복합니다.</li>
		<li>상급물을 물로 바꿉습니다. 셀룰로오스가 바닥에 완전히 정착 한 후 (약 반 시간), 이 단계를 반복하십시오.</li>
		<li>상급제는 버리고 0.1 M HCl을 추가하고 적어도 2 시간 동안 담가 둡니다. 이 단계를 반복합니다.</li>
		<li>상온제를 버리고 글리신 용리온 완충제로 셀룰로오스를 두 번 담급니다.</li>
		<li>0.1 M HCl 또는 0.1 M NaOH를 추가하여 pH를 7.6에서 8.0으로 측정하고 조정합니다. 참고 :이 부분에서 액체는 DE-52 셀룰로오스보다 적어도 5 배 더 많은 부피를 가지고 있습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>유량을 40-50r/min 사이로 조정합니다.</li>
	<li>셀룰로오스의 침전이 완료되면, 크로마토 그래피 컬럼에 스포로 조이트 또는 메로 조이트 현탁액을 추가하십시오. 유량을 30-40r/min로 조정합니다. 참고: 크로마토그래피 컬럼을 추가하기 전에 글리신 용리산 완충제으로 스포로조이트 또는 메로조이트 침전물을 다시 일시 중단합니다.</li>
	<li>50 mL 튜브에 글리신 용리액 버퍼로 수집합니다. 용출 과정에서 포자이트 또는 메로조이의 현미경 검사 결과에 따라 수집을 중지하십시오.</li>
	<li>600 x g에서 10분 동안 수집된 글리신 용리액 완충액을 원심분리기. 스포로조이트 또는 메로조이트 침전물을 새로운 1.5 mL 튜브로 옮긴다.</li>
	<li>혈세포계를 사용하여 포자형 또는 메로조이트 수를 계산합니다.</li>
</ol>

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</ol>

1990 년대에, 형질 전환 시스템은 apicomplexan 기생충을 위해 개발되고, eimerian 기생충에 대한 연구를 위해 이용되었습니다. 최근에는 E. 테넬라8,9 및 E. nieschulzi15에서안정적인 형혈이 수행되었다. 2세대 메로조이트11을트랜스펙팅하여 E. 네카트릭스의 안정적인 형혈을 달성했습니다. 날개 정맥을 통해 E. acervulina의 형질 감염 된 포자형의 접종은 Cloacal 경로를 통해 접종 될 E. acervulina의 포자 졸의 무능력을 해결 (장 외, 게시되지 않은 데이터). 여기에서, 우리는 연구원이 에이머리안 기생충을 핵을 돕기 위하여 상세한 형질감염 절차를 기술했습니다.
...

Eimeria spp. 가축 및 가금류 산업에 상당한 경제적 손실로 이어지는 coccidiosis를 일으키는 원인이 됩니다. 항구균 약물, 그리고 어느 정도, 감쇠된 항구균 백신은, cocciiosis의 통제를 위해 널리 이용되고 있더라도, 그들의 약 저항, 약 잔류물 및 독성을 되찾는 백신 긴장의 잠재적인 확산에 관하여 아직도 결점이 있습니다1. 분자 생물학의 발달과 함께, 형질감염은 유전자 기능을 연구하고, 새로운 백신을 개발하고, Eimeria를위한 새로운 약 표적을 검열하기 위한 중요한 공구가 되었습니다.
지난 수십 년 동안, 형질감염은 플라스모듐과 톡소플라즈마 곤디2,3,4,5,6과같은 복합기생충에 성공적으로 적용되었다. E. 테넬라에서 형질 감염에 대한 기자로 β-gal을 사용하여 연구는 에이메리아에서이러한 작업을 조종7. E. tenella8,9, E. 미염10,및 E. acervulina (장 외, 미공개 데이터)의 형질감염은 닭에서 성공적이었다. 최근에는핵11을통해 E. necatrix의 메로조이스를 사용하여 형질혈을 달성했습니다.
연구 결과에 따르면 이종항균을 발현하는 에이메리아는 캄필로박터 제자니 항원 A(CjaA) 또는 닭인터류친 2(chIL-2)12,13을 발현하는 것과 같은 재조합 백신으로 개발될 가능성이 있는 것으로 나타났다. 따라서, 이 프로토콜은 닭에 있는 Eimeria spp. 의 핵 제거 연구 결과 기술합니다. 절차는 포자형 Eimeria 기생충에 대한 연구를 시작하는 연구원을 돕기 위하여 포자조이트 또는 merozoites의 정화, 플라스미드 DNA를 가진 핵, cloacal 접종/정맥 주입 및 생체 내 전파를 기술합니다.

<table><tbody><tr><td>ATP-디소듐</td><td>시그마</td><td>A26209</td><td></td></tr><tr><td>셀룰로오스 DE-52</td><td>Solarbio</td><td>C8350</td><td></td></tr><tr><td>정유량 펌프</td><td>SHANGHAI JINGKE INDUSTRIAL CO., LTD.</td><td>HL-2B</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>MACGENE</td><td></td><td></td></tr> CM15019 <tr><td>유리 구슬</td><td>Sigma</td><td>Z250473-1PAK</td><td></td></tr><tr><td>포도</td>당 <td>시그마</td><td>V900116</td><td></td>번</tr><tr><td>글리신</td><td>바이오톱</td><td>G6200</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>MACGENE</td><td>CC016</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>시그마</td><td>V900041</td><td></td></tr>번 <tr><td>저속 원심분리기</td><td>베이징 시대 BEILI 분리기 CO., LTD.</td><td>DT5-2</td><td></td></tr><tr><td>마그네틱 믹서</td><td>SCILOGEX</td><td>MS-H280-Pro</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>시그마</td><td>449164</td><td></td></tr><tr><td>MoFlo 세포 분류기</td><td>BeckMan Coulter, US</td><td>201309995</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sigma</td><td>144-55-8</td><td></td></tr><tr><td>핵 발굴 장치</td><td>LONZA/amaxa</td><td>90900012 (Nucleofector II)</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Solarbio</td><td>P1010</td><td></td></tr><tr><td>Percoll (DG 그라디언트 스톡 솔루션)</td><td>GE Healthcare</td><td>17-0891-09</td><td></td></tr><tr><td>타우로데옥시콜레이트 나트륨 수화물</td><td>시그마</td><td>T0875</td><td></td></tr><tr><td>Sorvall Legend Micro 17 마이크로 원심분리기</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>75002430</td><td></td></tr><tr><td>DMEM의 구성: 피루브산 나트륨, L-글루타민 및 25mM HEPES가 포함된 4.5g/L 포도당.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>Solarbio</td><td>T8150</td><td></td></tr><tr><td>와류 믹서</td><td>베이징 북부 TZ-Biotech Develop.co.</td><td>HQ-60-II</td><td></td></tr><tr><td>수조 온도 조절기</td><td>Grant Instruments(Cambridge), Ltd.</td><td>GD120,GM0815010</td><td></td></tr></tbody></table>

닭 에이메리아 기생충의 핵 과 생체 내 전파

Nucleofection and In Vivo Propagation of Chicken Eimeria Parasites

형질감염은 DNA와 이중 가닥 RNA와 같은 유전 물질이 관심있는 유전자를 수정하기 위해 세포로 전달되는 기술적 과정입니다. 현재, 형질전환 기술은 가금류 및 가축에서 coccidiosis의 원인 인 Eimeria의연구를위한 필수 도구가되고있다. 이 프로토콜은 에이메라체 기생충의 안정적인 형질 감염에 대한 자세한 설명을 제공합니다 : 포자형 또는 2 세대 메로 조이의 정제 및 핵, 형질 감염된 기생충의 생체 전파. 이 프로토콜을 사용하여, 우리는 Eimeria의여러 종에서 형질 감염을 달성했다. 종합하면, 핵은 에이메리안 기생충의 유전자 조작을 촉진하는 유용한 도구입니다.

이 프로토콜은 에이메라 기생충을 트랜스펙트하는 데 사용되었습니다. 본 연구에서,2세대 메론트 및 E. 네카트릭스의 메로조이트는 도 2A 및 도 2B에나타내었으며, 도 2C 및 도 2D는 밀도 그라데이션 용액을 사용한 후 E. 테넬라의 스포로조이스트 및 스포로조이스를 나타내보였다. E. 네카트릭스(그림 3A)및 E. 테넬라(그림 3</str...

여기서, 우리는 포자조이트 또는 2세대 메로조이트에 의한 닭에이메리아 기생충의 안정적인 형질변환을 달성할 수 있는 방법을 제공했다. 이종 항원 유전자를 발현하는 유전자 변형 에이메리안 기생충은 백신 전달 차량으로 사용될 수 있었다.

Transfection is a technical process through which genetic material, such as DNA and double-stranded RNA, are delivered into cells to modify the gene of ...

아이메리아 종에 대한 경질 프로토콜의 설립은 유전자 기능의 연구를 진행하는 데 도움이 될 것입니다, 새로운 백신을 개발, 아이메리아에 대한 새로운 약물 목표를 선별. 이 기술을 사용하여, 우리는 Eimeria의 몇몇 종의 전염을 달성하고, 핵은 eimerian 기생충에 있는 유전 조작의 적용을 용이하게 하기 위하여 유용한 공구입니다. Eimeria의 핵은 시험관에서 배양될 수 없는 그밖 기생충의 transfection를 위한 참조를 제공하고 그들의 유전 조작의 연구를 가속화할 것입니다.이 기술을 처음으로 시도하면 실험 중에 스크램블을 피하기 위해 트랜스펙트 시작 전에 모든 시약과 악기를 잘 준비해야합니다. 이 방법의 실현은 이 실험의 복잡한 세부 사항을 볼 수있는 Eimeria의 트랜스포메이션에 집중하는 사람들을 돕는다. 스포로시스트의 방출로 시작하려면, 원심분리기는 칼륨 이드로메이트 용액의 7개의 포자화 난모세포에 1회 10회, 5분 동안 300배.PBS로 세 번 씻으시면 됩니다. PBS의 1 밀리리터로 펠릿을 다시 중단하고 혼합물을 15 밀리리터 튜브로 옮기십시오. 1mm 직경의 유리 구슬의 동일한 볼륨을 추가하고, 스포로시스트를 방출하기 위해 소용돌이 믹서를 사용하여 난모성 서스펜션을 진동.매 분마다 현미경 검사법에 의한 스포로시스트의 방출을 모니터링합니다. 난모종의 90% 이상이 파손되면 소용돌이를 멈추십시오. 스포로시스트 서스펜션을 새로운 1.5밀리리터 튜브로 옮기고 원심분리기를 5분 동안 1, 600배 g로 옮긴다.침전을 50% 밀도 그라데이션 용액1밀리리터로 재일시 중단하고 원심분리기는 1분 동안 10, 000배 g로 재주합니다. 스포로조이트를 방출하려면 침전물을 침전 버퍼로 재중단하고 42도의 섭씨 수조에서 40~60분 동안 배양하여 산포로조이트방출한다. 퇴출 시 5분마다 한 번씩 튜브를 흔들어 줍니다.산포로조이트 중 90% 이상이 방출되면 인큐베이팅을 중단하십시오. 원심 분리기는 600배 g에서 10분 동안. 55% 밀도 그라데이션 용액의 1밀리리터로 침전을 다시 중단하고 1분 동안 10, 000배 g에서 튜브를 원심분리합니다.PBS의 1 밀리리터로 강수량을 다시 중단하고 혈우세포계를 사용하여 스포로조이트수를 계산합니다. 아이메리아 괴사트릭스의 2세대 메로조이트를 수집하려면 노른자 줄기에서 일레오세칼 오리피스까지 닭장 내 장수를 세로로 자르고, 페트리 접시에 PBS 또는 HBSS로 부드럽게 세

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

좋은 팁을 사용하면 우리가 닭 somites이나 신경 튜브의 하위 도메인에 플라스미드 DNA를 주입 micropipettes. 플라스미드의 농도는 단일 transfected 세포를 생성하기 위해 조정됩니다. 우리는 다음 세포가 clonal 인구로 발전 수 있습니다.

칙 태아의 단일 세포 Transfection

나중에 인큐베이션 단계 (햄버거와 해밀턴 무대 (HH) 22 세 이상)에서 닭 배아에 유전자 전달의 방법을 설명합니다. 이 방법은 단점을...

에 의한 이전 치킨 태아에 유전자 이체<em&gt; 전 비켜</em&gt; Electroporation

출처: Yates, J. G. E., 외. 요막액으로부터 고역가 재조합 뉴캐슬병 바이러스의 생산. J. Vis. Exp. (2022)이 영상은 바이러스에 감염된 유정란에서 수집하여 정제한 요막액으로부터 바이러스 입자를 정제하고 농축하는 과정을 보여줍니다. 여기에는 온전한 바이러스를 분리하기 위한 뎁스 필터레이션(depth filtration), 접선 유동 여과(tangential flow filtration) 및 밀도 구배 초원심분리를 포함한 일련의 여과 및 분리 단계가 제시됩니다. 이후 바이러스가 풍부한 분획물을 투석하여 잔류 염과 구배 성분을 확산으로 제거하고, 고장액을 이용한 삼투 현상을 통해 농축합니다. 그 결과, 실험에 적합한 정제된 고역가 바이러스 조제물이 얻어집니다. Yates, J. G. E., 외 등 요막액으로부터의 고역가 재조합 뉴캐슬병 바이러스 생산. J. Vis. Exp. (2022)본 영상에서는 바이러스에 감염된 유정란에서 수집하여 정제한 요막액으로부터...

유정란 요막액으로부터의 바이러스 정제

이 비디오에서는 형광 리포터 단백질 인코딩 플라스미드 DNA를 닭 Eimeria 기생충의 포자암 형태로 전달하는 전기천공법 기반 형질 주입 절차인 nucleofection에 대해 설명합니다.

기생충 형태의 핵 발굴: 형광 단백질 인코딩 플라스미드를 포자 핵에 전달하는 전기천공법 기반 형질 주입 방법

배아 병아리 망막 세포 배양은 광 수용체 생물학의 연구에 유용한 도구를 구성한다. 우리는 이전에 배양 망막의 플라스미드 일렉트로 오보 EX에 기초한 효율적인 유전자 전달 기술을 개발했다. 이 기술은 상당히이 시스템에 대한 가능한 유전자 조작을하고, 현재 사용 가능한 프로토콜을 통해 형질 전환 효율을 증가시킨다.

차 세포 배양 연구 병아리 망막에 효율적인 유전자 전송 : 전 비켜 Electroporation에 접근

수정 가능한 닭고기 달걀은 높은 수율의 바이러스를 증명하는 편리하고 비용 효율적인 시스템을 제공하기 때문에 많은 양의 인간 인플루엔자 A 바이러스를 생산하는 데 널리 사용됩니다.

인간 백신 닭 계란에 인플루엔자 바이러스 전파

닭의 Eimeria 감염 진단은 여전히 까다롭습니다. 기생충 형태학 및 숙주 병리학 주도 접근법은 일반적으로 결론을 내리지 못하는 반면, PCR을 기반으로 하는 분자 접근법은 비용과 전문성 면에서 까다로운 것으로 입증되었습니다. 이 프로토콜의 목적은 루프 매개 등온 증폭(LAMP)을 eimerian 감염에 대한 간단한 분자 진단으로 확립하는 것입니다.

의 종 특이 검출을위한 루프 - 매개 등온 증폭 (LAMP) 분석 실험<em&gt; 에이 메리아</em&gt; 닭을 감염이

이 논문의 전반적인 목표는 닭 배아에 외인성 물질의 난소 세포 내 주사를 수행하는 방법을 설명하는 것입니다. 이 접근법은 닭 배아의 발달 생물학을 연구하는 데 매우 유용합니다.

오보에서 닭 배아에 혈관 내 주사

이 방법은 닭 배아를 박테리아 병원균 L. monocytogenes를 생존 가능하지만 배양할 수 없는(VBNC) 상태에서 되살리고 박테리아 휴면 메커니즘에 대한 이해에 잠재적으로 더 사용할 수 있는 간단하고 비용 효율적인 생체 내 모델로 보여줍니다.

생존 가능하지만 배양할 수 없는 병원체를 되살리기 위한 생체 내 모델로서의 닭 배아

인간의 배아 줄기 (ES) 세포의 전파

학습하세요 닭 에이메리아 기생충의 핵전이 기법으로 유전자 조작 및 백신 개발 연구를 진행하는 방법을. 뉴클레오펙션을 활용한 이 실험은 생체 내 전파 가능성을 검증합니다.

닭 에이메리아 기생충의 핵 과 생체 내 전파

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