Detta protokoll presenterar ett nytt, robust och reproducerbart odlingssystem för att generera och odla tredimensionella sfäroider från Caco2 kolon adenocarcinom celler. Resultaten ger det första proof-of-concept för lämpligheten av detta tillvägagångssätt för att studera cancer stamcellsbiologi, inklusive svaret på kemoterapi.