Fare Hindlimb Lazer Doppler Perfüzyon Görüntüleme

Yara iyileşmesi yetersiz olan cilt ülserasyon, insan hastalarda amputasyonun önde gelen nedenlerinden biridir. Yeterli yara iyileşmesi, periferik arteriyel hastalığı olan hastalarda tehlikeye giren sağlam cildi korumak için gereken daha yüksek arteriyel bolluk seviyeleri gerektirir. Diğer birçok romatolojik durum ve diyabet de yaraları iyileştirmek için rahatsız ve yetersiz cilt mikroskrkülasyonuna yol açabilir.

Birçok diyabetik hastada eşlik eden periferik arteriyel hastalık vardır ve bu da onları özellikle amputasyon riskiyle karşı karşıya bırakarak. Lazer Doppler perfüzyon görüntüleme veya LDPI, klinik durumlarda cilt mikrosirkülasyonunu değerlendirmek için olduğu gibi deneysel hindlimb iskemi, iskemi reperfüzyonu ve mikrocerrahi kapaklardan sonra kan akışını ve kan akışı iyileşmesini değerlendirmek için araştırma durumlarında kullanılır. LDPI sistemi, ilgi çekici bir bölge üzerinde hareket etmek için bir tarama aynası tarafından saptırılan düşük güçlü bir lazer ışını yansıtır.

Bu, akış dektiyometrisi probu ile doğrudan temas halinde küçük doku alanı için perfüzyon ölçümü sağlayan lazer Doppler akış debisinden farklıdır. Lazer ışını mikrovaskülürdeki hareketli kanla etkileşime girdiğinde, tarayıcı tarafından foto algılanan ve rastgele perfüzyon ünitelerine dönüştürülen bir Doppler frekans değişimine uğrar. LDPI ışık tabanlı bir teknik olduğundan, penetrasyon derinliği açısından 0,3 ila 1 milimetre ile sınırlıdır, yani çoğunlukla dermal perfüzyon değerlendirilir.

Dermal akış, cilt sıcaklığı ve çeşitli anestezik ajanlardan etkilenebilecek sempatik sinir sistemi ile değiştirilebilir. Optik lazerden yapılan ölçümler de ortam aydınlatma koşullarından, cilt pigmentasyonundan etkilenir ve aşırı kürk veya saç ile engellenebilir. LDPI, iskemi sonrası bol miktarda iyileşmeyi izlemek için en sık kullanılan araştırma tekniğidir, çünkü invaziv değildir, kontrast yönetimi gerektirmez ve birden fazla hayvanda veri toplanmasına izin vermek için hızlı tarama sürelerine sahiptir.

Bu, terapötik arteriogenez veya anjiogenez amaçlayan tedavilerin küçük hayvan modellerinde etkili olup olmadığını belirlemeye yardımcı olmak için idealdir. LDPI ile ölçülen hindlimb iskemi sonrası kan akışı iyileşmesi, mikro dolgu dökümü veya mikro BT gibi diğer yollarla değerlendirildiğinde kollateral arter gelişimi ile iyi ilişkilidir. Bu protokolün amacı, LDPI kullanılarak hindlimb perfüzyonunun değerlendirilmesini göstermektir. Tarayıcı yüksekliğini, tarama konusuna olan mesafe yaklaşık 30 santimetre olacak şekilde ayarlayın.

Görüntüleyiciyi açın ve ilişkili yazılımı başlatın. Ölçüm programını açın. Yazılım tarayıcı ile doğru iletişim kuruyorsa kızılötesi lazer açma uyarısı görünecektir.

Tarayıcı ayarlarını, odadaki arka plan malzemesi ve aydınlatma kurulumuna uygun olacak şekilde ayarlayın. Lazer ışınını siyah arka plan malzemesine doğrultarak arka plan eşiğini ayarlayın ve Otomatik BK Seti'ne basın. Atık gazın uygun şekilde atılması ile izofluran indüksiyon odasını kurun.

İndüksiyon odasını bir ısıtma pedi üzerine yerleştirmek, anestezi indüksiyonu sırasında fare sıcaklık kaybını önlemeye yardımcı olacaktır. Yansıtıcı olmayan bir yüzeyin altındaki tarama alanına yerleştirilen homeotermik battaniyeyi açın. Bu durumda, siyah bir neopilen kumaş.

Homeotermik battaniye, vücut sıcaklığını 37 santigrat derece koruyacak şekilde ayarlanmıştır. Sıcaklık probunu ve yağlayıcıları yerleştirmeye hazır olacak şekilde konumlandırın. Anestezi yüz maskesini ve atma sistemini de tarama alanına yerleştirin.

Fareyi bir izofluran buharlaştırıcı ile uyuşturun. Oksijen hızı dakikada bir litre akışa ayarlanır. Ve izofluran anestezi indüksiyonu için% 4'e ayarlanır.

Akış anestezi indüksiyon odasına açılır ve fare solunum hızı yavaşlar. Fare sağ refleksini kaybettiğinde yeterli anestezi elde edilir. Fareyi ekli atık gaz leş yiyici ile anestezik maske burun konisine aktarın ve izofluranları% 1.5'e ayarlayın Bu anestezi seviyesi genellikle tarama sırasında fareyi nispeten hareketsiz tutmak için yeterlidir, ancak cerrahi anestezi seviyeleri sağlamak için tasarlanmamıştır.

Yani anestezinin derinliği kontrol edilir. İzofluran seviyesini değiştirmek kalp atış hızında, solunumda ve dermal profusionda değişikliklere neden olur. Bu nedenle, herhangi bir zaman kursu deneyi boyunca ve tüm deneysel denekler için tutarlı bir yüzde kullanılmalıdır.

Ketamin ksilazinin IP enjeksiyonu gibi alternatif anestezi teknikleri de kullanılabilir, ancak farklı anestezikler dermal profusion'u farklı şekilde etkilediği için herhangi bir ders çalışması boyunca aynı anestezi tekniği kullanılmalıdır. Taranacak plan bölgesi kürkle kaplıysa, saçı ilgi çekici bölgeden çıkarmak için küçük bir elektrikli düzeltici ve/veya depilatör krem kullanın. Islak cilt lazerden yansımalara neden olabileceğinden, depilatör kremler tamamen çıkarılmalı ve taramadan önce fare derisi kurutulmalıdır Homeotermik battaniye ile ilişkili yağlanmış rektal sıcaklık probunu fare rektumuna yerleştirin.

Tarama sıcaklığını arzulamak için fare sıcaklığını dengele, 37 santigrat derece. Bu beş ila 10 dakika kadar sürebilir. Üst menüden veya Tarayıcı Kurulumu simgesinden erişilebilen Tarayıcı Kurulumu'nu seçin.

Tarama alanı, ilgi alanına uyum sağlamak için X, Y koordinatları değiştirilerek ayarlanmalıdır. Tarama hızı tarama çözünürlüğüne bağlı olacaktır. Daha yüksek çözünürlük, daha uzun tarama süreleri sağlar.

Anatomik perfüzyona odaklanan daha yüksek çözünürlüğün aksine, küresel profusion'a odaklanan tekrar tarama için, piksel başına dört milisaniyelik en yüksek tarama hızı yeterlidir. Yineleme taramaları yapıyorsanız, Yineleme ve Satır Taraması sekmesini seçin. Tarama sayısı değiştirilebilir.

Bu durumda, üç taramanın yanı sıra yineleme aralığı. Yineleme aralığı için en az süre, kutunun sağındaki gri renkteki alanda gösterilen, tarama alanı ve tarama çözünürlüğü ile belirlenen tahmini tarama süreleri olacaktır. Birkaç saniye eklemek, kullanıcının taramalar arasında gerekirse fareyi duraklatmasını ve yeniden konumlandırmasını sağlar.

Bu durumda toplam tarama süresi üç dakika 21 saniyedir. Görüntü Taraması sekmesini seçin ve İşaretle düğmesini seçin. Bu, lazerin tarama alanını ana hatlarıyla belirlemesine neden olur.

Taranacak hedef işaretli alan içinde olacak şekilde fare konumunu ayarlayın. Taramayı Yinele simgesini seçip taramayı başlatmak için Oynat düğmesine basarak tekrarlanan ölçümü başlatın. Tarama mesafesini onaylayan bir açılır pencere görünecektir.

Taramaya başlamak için Tamam'ı tıklatın. Hindlimb iskemi indüksiyonu öncesi bir farenin ilk taraması gerçek zamanlı olarak gösterilir. İkinci ve üçüncü tekrar taramaları 16x hıza hızlandırılmıştır.

Ana pencere, yazılım tarafından oluşturulan taramanın sonuçlarını gösterir. Sağ alttaki içe, lazerin fare ayaklıklarını tarayıp taramasını gösterir. Ayak takımı veya ayak takımı ve dorsal baldır taraması için, kuyruğa doğru uzatılmış arkalıklarla eğilimli konumlandırma, sırtüstü konumlandırmaya daha tutarlı bir ilgi alanı sağlar.

Femoral arter, saphenöz arter ve kollateraller uyluk ve baldırın ventral yüzeyine çok yakındır. Bu nedenle, bu ilgi alanlarını kullanıyorsanız supine konumlandırma tercih edilir. Fare hareketini tarama sırasında fareyi izleyin.

Fare, ayak altlıklarının artık taramanın ortasındaki tarama bölgesinde olmayacak kadar hareket ederse, taramayı yeniden başlatın. Fare ayak takımı konumundaki küçük varyasyonlar analiz yazılımında bulunabilir. Ayrıca, tarama işlemi sırasında fare sıcaklığını izleyin, çünkü homeotermik battaniyenin kullanımıyla bile dalgalanabilir.

Fare sıcaklığında çok fazla değişiklik varsa, bu taramalar arasında önemli bir değişime neden olabilir. Genellikle, 36,8 ila 37,2 sıcaklık aralığı kabul edilebilir verilerle sonuçlanacaktır. Yakalanan taramayı Farklı Kaydet penceresinin altına, daha kolay veri çözümlemesi için fare tanımlayıcısı ve zaman noktası içeren bir dosya adıyla kaydedin.

Konu Ayrıntıları penceresinde istenirse fare ve zaman noktası ayrıntılarını girin. Arkadaki fare ile ventral hindlimb taraması, tarama alanı ayarlandıktan sonra burada gösterilir. Fare supine ile önermenin, ayağın yan tarafının değişken bir kısmının taranmasıyla sonuçlandığını unutmayın.

Rektal sıcaklık probını çıkarın ve bir sonraki fare için hazır olacak şekilde% 70 etanol ile dezenfekte edin. İsoflurane'yi% 0'a düşürün Fare oksijen almaya devam ederse daha hızlı iyileşir, ancak ek oksijen olmadan da kurtarılabilir. Farenin anesteziden kafese dönmeden önce supine konumundan eğilimli konuma dönerek sağa doğru refleks gösterdiği noktaya kadar iyileşmesine izin verin.

İyileşme izofluran için bir ısıtma battaniyesi üzerinde gerçekleştirilebilir, çünkü iyileşme çok hızlıdır veya ketamin ksilazin için sıcak bir iyileşme kafesindedir. Görüntüleme gözden geçirme yazılım programını açın. Taramaları gözden geçirmek için yeni bir pencere açılacaktır.

Dosya menüsüne gidin, Kaydedilen dosyayı açın ve bulun. Araç çubuğundan yatırım getirisi simgesini seçin. Çokgen Ekle simgesini seçin.

Fareyi kullanarak ilgi çekici bölgenin etrafındaki bir alanı izleme. İşiniz bittiğinde, araç çubuğuna geri dönün ve İstatistikler simgesini seçin. Bu, ilgi çekici bölgeden istatistikleri gösteren bir pencere açacaktır.

Veri incelemesinde, ortalama bolluk birimi veya PU değerleri, her ayak takımı için tekrarlanan taramalar üzerinde 100 ila 150 PU'dan fazla değişmez. Bu kabul edilebilir bir taramadır ve tarama sırasında farenin iyi dengelenmiş olduğunu gösterir. Tekrarlanan taramalar üzerinde çalışmayan bir fare ayak takımı için ortalama perfüzyonun% 10'undan fazlasına karşılık gelen 100 ila 150 PU'dan daha büyük varyasyona sahip ortalama PU değerleri, farenin iyi dengelenmemiş olduğunu gösterir ve tekrar tarama şiddetle önerilir.

Tarama tamamlandıktan hemen sonra hızlı bir analiz yapmak, fare hala uyuşturulurken tekrar tarama yapılmasına izin verir ve taramalar daha sonraki bir tarihte analiz edilirse ve tekrarlanan taramalar arasındaki önemli değişiklik nedeniyle bir tarama kabul edilemez kabul edilirse oluşabilecek bir veri noktasını kaybetmekten kaçının. Sonuçlar, fareler başlangıçta vasodilat ve daha sonra içsel teminatlarını geliştirirken kontrol hindlimb perfüzyonu üzerinde cerrahi hindlimb bolluğu oranı olarak ifade edilir, LDPI ile kan akışı iyileşmesi ameliyat sonrası bir zaman seyrinde görülmelidir. İyileşme derecesi, fare zorlanmasına ve hindlimb iskemi modelinin şiddetine bağlıdır.

Bu rakam, LDPI'nın femoral arter ligasyonu ve P27 nakavt ve vahşi tip C57Bl / 6 fareler sonrasında zaman içinde ayaküstü kan akışı iyileşmesini ölçmek için kullanıldığı 28 gün boyunca tamamlanmış bir zaman kursu deneyini göstermektedir. Vahşi tip farelerde her iki P27 nakavt da, genelleştirilmiş bir matris metalloproteinaz inhibitörü olan oral doksiksin ile tedavi edildiğinde kan akışı iyileşmesini bozmuştu ve MMP aktivitesinin arteriogenezi kolaylaştırdığını düşündürmektedir. Kazanç kurulumu ve arka plan eşiği, tüm zaman kursu denemesi için sabit tutulmalıdır.

Arka plan eşiği çok düşük ayarlanmışsa, arka plan malzemesini taramak düşük bolluk değerlerine neden olur. Bu, arka plan bol miktarda değerin çokgen seçimi sırasında ilgi alanına ortalamasına neden olur. Bu sorunu ortadan kaldırmak için, arka plan eşiği Genel sekmesinin altındaki Tarayıcı Kurulumu penceresinde ayarlanabilir.

Bu durumda, arka plan eşiğinin 118 bolluk birimine çıkarılması, herhangi bir analize dahil edilmeyecek gri arka planla sonuçlanır. Akı görüntüsünün paleti veya renk ölçeği hem ölçüm yazılımında hem de görüntü inceleme yazılımında ayarlanabilir. Ölçekteki maksimum değerden büyük tüm bolluk değerleri en yüksek bolluk rengi olarak görüntülenir.

Bu durumda, kırmızı. Dinamik aralığın artırılması, örneğin ölçeğin sıfırdan 1500'e değiştirilmesi, 1000 ila 1500 bolusion birimi arasındaki alanlar artık kırmızı olarak gösterilmek yerine renk gradyanı kullanılarak görüntüleneceğinden, tekrar tarama varyasyonunu gözle daha belirgin hale getirecektir. Burada gösterilen tarama, tekrarlanan taramanın başlangıcında çekirdek vücut sıcaklığı başlangıçta 36,8'in altında olan ve daha sonra tekrarlanan taramalar üzerinde artan bir farede elde edildi.

Kontrol ayak takımı ortalama bollaşmasının, iskemik ayak altlığa göre daha soğuk çekirdek vücut sıcaklığından daha fazla etkilendiğini unutmayın. Daha soğuk vücut sıcaklığının tek bir taraması, bu veri noktası için daha yüksek bir bol miktarda kaydedilmesine neden olurdu. C57Bl/6 farelerde görülebileceği gibi fare derisi pigmentasyonundaki varyasyon, tarama alanının arka plan eşik değerinin altında olmasına neden olabilir ve bu da pigmentli alanlar içeren ilgi alanlarının analizini zorlaştırır.

Genel olarak fare ayak altlıkları hiperpigmentasyona sahip değildir, bu da bu fare zorlanması için taramak için en uygun alandır. Araştırmacı ventral hindlimb'i incelemek istiyorsa, beyaz bir fare suşu seçilmelidir. LDPI, genel arteriyel perfüzyonun bir yansıması olarak hindlimb dermal profusion ölçümü için etkili, kolay gerçekleştirilen ve tekrarlanabilir bir yöntemdir.

Güvenilir veri elde etmek için LDPI kullanırken tutarlı teknik gereklidir.