Name: Murine Stellate Ganglionun Yeri, Diseksiyonu ve Analizi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-12-22T14:45:00.000+00:00
Duration: 7 min 50 s
Description: Öğrenin, farelerde stellate ganglionun yerini belirleme ve diseksiyon tekniklerini kullanarak kardiyak otonom sinir sistemi değişikliklerini inceleyin. Bu yöntem, ventriküler aritmilerin tedavisinde yeni terapötik yaklaşımlar geliştirmeye yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Hartwig Wieboldt'a mükemmel teknik yardımı için ve Hamburg-Eppendorf Üniversitesi Tıp Merkezi UKE Mikroskopi Görüntüleme Tesisi'ne (Umif) mikroskop ve destek sağladığı için teşekkür ediyor. Bu araştırma DZHK (Alman Kardiyovasküler Araştırmalar Merkezi) [FKZ 81Z4710141] tarafından finanse edildi.

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Va başlangıcından önce sempatik sinir sisteminin nöronlarında ve glial hücrelerinde hücresel ve moleküler süreçlerin anlaşılması, ani kalp durması dünya çapında en yaygın ölüm nedeni olmaya devam ettiği için yüksek ilgi çekicidir5. Bu nedenle, mevcut yazıda, bu ağdaki bir murine elemanı olan murine SG'yi tanımlamak ve RNA, protein ve hücresel düzeyde sonraki analizleri yapmak için temel bir yöntem repertuarı sunuyoruz.
Murine SG'nin bir zorluğu büyüklüğü ve sınırlı sayı...

Kardiyak otonom sinir sistemi, kalbin uygun fizyolojik yanıtla çevresel değişikliklere uyum sağlamasını sağlayan sempatik, parasempatik ve duyusal bileşenlerin sıkı bir şekilde düzenlenmiş bir dengesidir1,2. Bu dengedeki bozukluklar, örneğin sempatik aktivitenin artması, başlangıç için önemli bir sürücü olarak ventrikül aritmilerinin (VA) bakımı olarak belirlenmiştir3,4. Bu nedenle, beta-blokerlerle sempatik aktivitenin farmakolojik olarak azaltılması yoluyla elde edilen otonom modülasyon, on yıllardırVA'lıhastaların tedavisinde bir temel taşı olmuştur 5,6. Ancak farmakolojik ve kateter bazlı müdahalelere rağmen, ilgili sayıda hasta hala tekrarlayan VA7'denmuzdariptir.
Kalbe sempatik giriş çoğunlukla, beyin sapından kalbe çok sayıda intratorasik sinir yoluyla bilgi aktaran sempatik zincirin yıldız gangliyonlarındaki (SG) çift taraflı yıldız şeklindeki yapılarındaki nöronal hücre cisimleri aracılığıylaaracılıkeder 8 ,9,10. Yaralanmadan sonra SG'den filizlenen sinir VA ve ani kardiyak ölüm ile ilişkilidir11,12, SG'yi otonom modülasyon için bir hedef olarak vurgulayarak13,14. Kalbe sempatik girişin azaltılması geçici olarak lokal anesteziklerin perkütan enjeksiyonu ile veya video destekli torakoskopi ile SG'nin kısmen çıkarılması ile kalıcı olarak elde edilebilir15,16. Kardiyak sempatik denervasyon, umut verici sonuçlarla tedavi-refrakter VA'lı hastalar için bir seçenek sunar14,16,17. Bu hastaların eksiz SG'lerinden nöronal ve nörokimyasal remodeling, nöro-inflamasyon ve glial aktivasyonun otonomik disfonksiyona katkıda bulunabilecek veya ağırlaştırabilecek sempatik yeniden şekillendirmenin ayırt edici özellikleri olduğunu öğrendik18,19. Yine de, bu nöronlardaki altta yatan hücresel ve moleküler süreçler, örneğin, nöronal transdifferentiasyonun kolinerjik fenotip20,21'erolü gibi bugüne kadar belirsizliğini korumamaktadır. Deneysel çalışmalar VA'yı tedavi etmek için yeni yaklaşımlar sunar, örneğin, optogenetik22yoluyla sempatik sinir aktivitesinin azaltılması , ancak SG'nin derinlemesine karakterizasyonu VA ile birlikte giden birçok kardiyak patolojide hala eksiktir. Bu patolojileri taklit eden fare modelleri, aritmilerin başlangıcından önce potansiyel olarak12,23olan nöronal yeniden şekillendirmeyi incelemeye izin verir. Bunlar, kalbin ve sinir sisteminin otonom karakterizasyonu için daha fazla morfolojik ve fonksiyonel analizlerle tamamlanabilir. Mevcut protokolde, VA'nın anlaşılmasını geliştirmek için murine SG'yi parçalamaya ve karakterize etmeye izin veren temel bir yöntem repertuarı sunuyoruz.

<table><tbody><tr><td>96 oyuklu plaka</td><td>TPP</td><td>92097</td><td>RNAscope</td></tr><tr><td>Yapışma Slaytları SuperFrost plus&nbsp; 25 x 75 x 1 mm</td><td>R. Langenbrinck</td><td>03-0060</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskopi Albümin sığır Fraksiyonu V reseptör sınıfı liyofil.</td><td>Serva</td><td>11924.03</td><td>Tüm montaj boyama</td></tr><tr><td>bisBenzimide H33342 trihidroklorür (Hoechst)</td><td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABD</td><td>B2261</td><td>Bütün montaj boyama</td></tr><tr><td>Tavuk anti nörofilament</td><td>EMD Millipore</td><td>AB5539</td><td>Bütün montaj boyama</td></tr><tr><td>Dimetil sülfoksit (DMSO)</td> <td>Merck, KGA, Darmstadt, Almanya</td><td>D8418</td><td>Tüm montaj boyama</td></tr><tr><td>Eşek anti tavuk IgY Alexa 647&nbsp;</td><td>Merck, KGA, Darmstadt, Almanya</td><td>AP194SA6</td><td>Bütün dağı boyama</td></tr><tr><td>Eşek anti keçi IgG Alexa 568 & nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A11057</td><td>Tüm montaj boyama</td></tr><tr><td>Eşek anti tavşan IgG Alexa 488 & nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A21206</td><td>Tüm montaj boyama</td></tr><tr><td>Kurutma bloğu 37-100 mm</td><td>Whatman (Sigma Aldrich)</td><td>WHA10310992&nbsp;</td><td>Bütün montaj boyama</td></tr><tr><td>Eosin Y Sigma</td><td>Aldrich</td><td>E4009</td><td>MEK</td></tr><tr><td>, IPA ve Bitrex ile denatüre edilmiş %99 tüm montaj boyama Etanol (min. %99,8)</td><td>Th.Geyer</td><td>2212.5000</td><td>Tüm montaj boyama</td></tr><tr><td>Eukitt montaj ortamı</td><td>AppliChem</td><td>253681.0008</td><td>Tüm montaj boyama</td></tr><tr><td>Fluoromount-G</td><td>Southern Biotech</td><td>0100-01</td><td>Tüm montaj boyama</td></tr><tr><td>Fluoromount-G + DAPI</td><td>Southern Biotech</td><td>0100-20</td><td>Bütün montaj boyama</td></tr><tr><td>Keçi anti kolin asetiltransferaz</td><td>EMD Millipore</td><td>AP144P</td><td>Tüm montaj boyama</td></tr><tr><td>H2 O 2 %30 (a/a)</td><td>Merck, KGA, Darmstadt, Almanya</td><td>H1009</td><td>Tüm montaj boyama</td></tr><tr><td>Heparin Sodyum 25.000 UI / 5ml</td><td>Rotexmedica</td><td>PZN: 3862340</td><td>Hazırlık SG</td></tr><tr><td>Yüksek kapasiteli cDNA ters transctipasyon kiti</td><td>Yaşam teknolojileri</td><td>&nbsp; 4368813</td><td>RNA izolasyonu</td></tr><tr><td>İzofluran (Forene)</td><td>Abbott Laboratories</td><td>2594.00.00</td><td>Hazırlık SG</td></tr><tr><td>Mayer'in hemalum çözeltisi</td><td>Merck</td><td>1.09249.0500</td><td>Tüm montaj boyama</td></tr><tr><td>Metanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>34860</td><td>Tüm montaj boyama</td></tr><tr><td>Mikroskop kapak camları 20x20 mm veya daha küçük</td><td>Marienfeld</td><td>0101040</td><td>Tüm montaj boyama</td></tr><tr><td>miRNeasy Mini Kit</td><td>Qiagen</td><td>217004</td><td>RNA izolasyonu</td></tr><tr><td>NanoDrop 2000c</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>ND-2000C</td><td>RNA izolasyonu</td></tr><tr><td>Opal 570 Reaktif Paketi</td><td>Akoya Bioscience</td><td>FP1488001KT</td><td>RNAscope</td></tr><tr><td>Paraformaldehit, %16 w/v aq. soln., metanol içermez&nbsp;</td><td>Alfa Aesar</td><td>43368</td><td>Bütün montaj boyama</td></tr><tr><td>Pastör pipetleri, LDPE, steril olmayan, 3 ml, 154 mm</td><td>Th.Geyer</td><td>7691202</td><td>Tüm montaj boyama</td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu tuzlu su tabletleri</td><td>Gibco</td><td>18912-014</td><td>Bütün montaj boyama</td></tr><tr><td>Pinzette Dumont SS Forseps</td><td>FineScienceTools</td><td>11203-25</td><td>Hazırlık SG</td></tr><tr><td>QIAzol Lizis Reaktifi</td><td>Qiagen&nbsp;</td><td>79306</td><td>RNA izolasyonu</td></tr><tr><td>Tavşan anti tirozin hidroksilaz</td><td>EMD Millipore</td><td>AB152</td><td>Tüm montaj boyama</td></tr><tr><td>RNAlater</td><td>Merck</td><td>R0901-100ML</td><td>RNA izolasyonu (isteğe bağlı)</td></tr><tr><td>RNAscope Multipleks Floresan Reaktif Kiti v2</td><td>biyoteknoloji (ACD)</td><td>323100</td><td>RNAscope</td></tr><tr><td>RNAscope Probe-MM-S100b-C2</td><td>biyoteknoloji (ACD)</td><td>431738-C2</td><td>RNAscope</td></tr><tr><td>RNAscope Probe-Mm-Tubb3</td><td>biyoteknoloji (ACD)</td><td>423391</td><td>RNAscope</td></tr><tr><td>Paslanmaz çelik boncuklar 7 mm&nbsp;</td><td>Qiagen&nbsp;</td><td>69990</td><td>RNA izolasyonu</td></tr><tr><td>Sudan siyah B</td><td>Roth</td><td>0292.2</td><td>Tüm montaj</td></tr> boyama <tr><td>TaqMan Gen Ekspresyon Testi Cdkn1b (Mm00438168_m1)</td> <td>Thermo Fisher Bilimsel</td><td>4331182</td><td>Gen ekspresyon analizi</td></tr><tr><td>TaqMan Gen Ekspresyon Testi Kolin asetiltransferaz (Mm01221880_m1)</td> <td>Thermo Fisher Scientific</td><td>4331182</td><td>Gen ekspresyon analizi</td></tr><tr><td>TaqMan Gen Ekspresyon Testi MKi67 (Mm01278617_m1)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>4331182</td><td>Gen ekspresyon analizi</td></tr><tr><td>TaqMan Gen Ekspresyon Testi PTPCR (Mm01293577_m1)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>4331182</td><td>Gen ekspresyon analizi</td></tr><tr><td>TaqMan Gen Ekspresyon Testi S100b (Mm00485897_m1)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>4331182</td><td>Gen ekspresyon analizi</td></tr><tr><td>TaqMan Gen Ekspresyon Testi Tyrosin Hidroksilaz (Mm00447557_m1)</td><td>Thermo Fisher Bilimsel</td><td>4331182</td><td>Gen ekspresyon analizi</td></tr><tr><td>TaqMan mastermix</td><td>Uygulamalı biyosistemler</td><td>4370074</td><td>Gen Ekspresyon analizi&nbsp;</td></tr><tr><td>Doku Lyser II</td><td>Qiagen</td><td>85300</td><td>RNA izolasyonu</td></tr><tr><td>Triton X-100 %10 çözelti</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>93443-100ml</td><td>Tüm montaj boyama</td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9416-100ML</td><td>RNAscope</td></tr><tr><td>Wacom bambu kalem</td><td>Wacom</td><td>CTL-460/K</td><td>Hücre boyutu ölçümleri</td></tr><tr><td>Whatman önceden hazırlanmış kalitatif filtre kağıdı, Sınıf 595 1/2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>WHA10311647</td><td>Bütün montaj boyama</td></tr><tr><td>Buğday Tohumu Aglütinin, Alexa Fluor 633 Eşlenik</td><td>Termo Fisher Scientific</td><td>W21404</td><td>RNAscope</td></tr></tbody></table>

murine stellate ganglion'un yeri, diseksiyonu ve analizi

Location, Dissection, and Analysis of the Murine Stellate Ganglion

Otonom sinir sistemi, kardiyak elektrofizyolojinin önemli bir sürücüsüdür. Özellikle sempatik dalının rolü, ventriküler aritmilerin (VA) patofizyolojisinde devam eden bir araştırma konusudur. Sempatik zincirin çift taraflı yıldız şeklindeki yapıları olan yıldız gangliyonlarındaki (SG)     nöronlar sempatik altyapının önemli bir bileşenidir. SG, tedavi-refrakter VA'lı hastalarda kardiyak sempatik denervasyon yoluyla tedavi için tanınan bir hedeftir. VA'lı hastalarda SG'de nöronal remodeling ve glial aktivasyon tanımlanmış olmakla birlikte, aritmi başlangıcından önce potansiyel olarak altta kalan hücresel ve moleküler süreçler sadece yeterince anlaşılmamıştır ve otonom modülasyonu iyileştirmek için aydınlatılmalıdır. Fare modelleri sempatik nöronal yeniden şekillendirmeyi incelememize izin verir, ancak murine SG'nin tanımlanması deneyimsiz araştırmacı için zordur. Bu nedenle, murine SG'nin derinlemesine hücresel ve moleküler biyolojik çalışmaları birçok yaygın kardiyak hastalık için eksiktir. Burada, yetişkin farelerde SG'nin RNA düzeyinde analizler (gen ekspresyon analizleri için RNA izolasyonu, yerinde hibridizasyon), protein seviyesi (immünofluoresan bütün montaj lekelenmesi) ve hücresel düzeyde (temel morfoloji, hücre büyüklüğü ölçümü) incelenmesi ve incelenmesi için temel bir repertuar açıklıyoruz. Hazırlık tekniğindeki zorlukların üstesinden gelmek için potansiyel çözümler sunuyoruz ve otofluoresansların söndürülerek boyamanın nasıl iyileştirileceği. Bu, hücre kompozisyonunu ve yeniden şekillendirme süreçlerini belirlemek için nöronların yanı sıra glial hücrelerin yerleşik belirteçler aracılığıyla görselleştirilmesine izin verir. Burada sunulan yöntemler, SG'nin VA'ya eğilimli farelerde otonomik disfonksiyon hakkında daha fazla bilgi edinmesine izin verir ve kalpteki otonom sinir sisteminin nöronal ve glial bileşenlerini araştıran ek tekniklerle tamamlanabilir.

Şekil 1, SG'nin nasıl tanımılacağını ve inceldiğini görselleştirir. Şekil 1A, konumun şematik bir çizimini gösterirken, Şekil 1B, kalp-akciğer paketinin çıkarılmasından sonra görünümü toraksa sunar. SG ve göğüs kafesinden gelen sol ve sağ longus colli kasları oryantasyon için önemli yerlerdir. Diseksiyon kaslar ve ilk kaburga arasındaki noktalı çizgiler boyunca gerçekleştirilir. SG ve sempatik zincir beyaz yapılar olarak görünür hal...

Kardiyak otonom sinir sistemindeki patofizyolojik değişiklikler, özellikle sempatik branşında, ventriküler aritmilerin başlamasına ve korunmasına katkıda bulunur. Mevcut protokolde, alttaki moleküler ve hücresel süreçlerin anlaşılmasını geliştirmek için murine stellat gangliyonunun nasıl karakterize edilir olduğunu gösteriyoruz.

Murine Stellate Ganglion'un Yeri, Diseksiyonu ve Analizi

The autonomic nervous system is a substantial driver of cardiac electrophysiology. Especially&#160;the role of its sympathetic branch is an ongoing matter ...

Her kalp atışı sempatik sinir sisteminin sıkı kontrolü altındadır. Kardiyak nörokontrol içindeki çoğu nöron, yıldız gangliyonları ile etkileşime girer. Protokolümüz, altta yatan süreçleri incelemeyi mümkün kılar.Eldeki video ve görüntülerle, deneyimsiz araştırmacı bile farelerde yıldız ganglionunu bulabilir ve teknikleri farklı hastalık modellerine uygulayabilir. Sempatik sinir sistemi, kardiyak aritmogenezin önemli bir bileşenidir. Yıldız gangliyonlarının modülasyonu, hayatı tehdit eden ventriküler aritmileri olan hastaların tedavisinde umut verici görünmektedir.Nöronlardaki ve glial hücrelerdeki hücresel ve moleküler süreçleri anlamak, hedefe yönelik tedavilerin önünü açabilir. Bu protokolün ana zorluğu yıldız gangliyonlarını bulmaktır. Preparat kalitesini değerlendirmek için başlangıçta tirozin hidroksilaz için kontrol boyaması yapmanızı öneririz.Kalp ve akciğerlerin çıkarılmasından sonra, farenin gövdesini stereo mikroskop altına yerleştirin. Harici bir ışık kaynağı ile iyi bir aydınlatma sağlayın ve göğüs kafesi PBS ile yıkayın. Longus colli kaslarındaki ilk kaburgayı bulun, ardından Dumont forsepslerinin ucunu kullanarak longus colli kasının lateral bağ dokusunu nazikçe açığa çıkarın.İkinci yıldız ganglionunu bulmak için bu işlemi karşı tarafta tekrarlayın, ardından forsepsleri 180 derece çevirin ve düz tarafı kullanarak yıldız ganglionunu kavrayın ve minimum basınçla dışarı çekin. Her iki yıldız gangliyonunu PBS ile doldurulmuş bir tabağa yerleştirin ve uygun büyütme ile inceleyin. Fazla damarları, yağ dokusunu ve daha büyük sinirleri çıkarın.Yıldız gangliyonlarını oda sıcaklığında iki saat boyunca %4 metanol içermeyen paraformaldehit içinde sabitleyin. Otofloresansın azaltılması ve sinyalin arka plan oranının iyileştirilmesi için Sudan Black stok çözümünü hazırlayın. Oda sıcaklığında manyetik bir karıştırıcı üzerinde iki ila üç saat çözün.Ardından, kalıntıları gidermek için stok çözeltisini 13.000 kez G'de 30 dakika santrifüjleyerek Sudan Black çalışma çözeltisini hazırlayın. Stoğu %70 etanol içinde %0.25 Sudan Siyahı nihai konsantrasyonuna kadar seyreltin. Metanol,% 30 hidrojen peroksit ve dimetil sülfoksiti dörde bire bir oranında karıştırarak yoğun ağartıcı hazırlayın.Antikor geçirgenliğini iyileştirmek için yıldız ganglion başına 200 mikrolitre ağartıcı ekleyin ve plakayı oda sıcaklığında bir saat boyunca bir çalkalayıcı üzerine yerleştirin. Bir çalkalayıcı üzerinde %100, 75, 50 ve 25 metanol kullanarak azalan bir dizi rehidrasyon gerçekleştirin ve her solüsyonda 10 dakika inkübe edin. Geçirgenlik için, yıldız gangliyonlarını PBS'de iki kez% 1 Triton ile her biri oda sıcaklığında 60 dakika inkübe edin.Geçirgenlik solüsyonunu yıldız gangliyonlarından çıkarın ve Sudan Black çalışma solüsyonu ekleyin, ardından bir çalkalayıcı üzerinde iki saat inkübe edin. Plakayı eğerek ve dik taraftan pipetleyerek Sudan Black solüsyonunu dikkatlice çıkarın, ardından 200 mikrolitre PBST ekleyin. Bir çalkalayıcı üzerinde beş dakika yıkayın.PBST'yi bir pipetle aspire ederek çıkarın ve yıkamayı iki kez tekrarlayın. Son yıkamadan sonra 200 mikrolitre bloke edici solüsyon ekleyin. Bir çalkalayıcı üzerinde gece boyunca dört santigrat derecede inkübe edin.Ertesi gün, antikor konsantrasyonlarını yerleşik protokollerden uyarlayarak bloke edici çözeltiye birincil antikorlar ekleyin. Blokaj solüsyonunu yıldız gangliyonlarından çıkarın ve birincil antikorları ekleyin. Yıldız gangliyonlarını bir çalkalayıcı üzerinde dört santigrat derecede 36 ila 48 saat inkübe edin.Antikor çözeltisini dikkatlice çıkarın ve 200 mikrolitre PBST ekleyin. Plakayı 30 dakika boyunca bir çalkalayıcıya yerleştirin. PBST'yi çıkarın ve yıkamayı beş kez daha tekrarlayın.İkincil antikor çalışma çözeltisini, floresan Alexa etiketli ikincil antikorları 13.000 kez G'de bir dakika boyunca santrifüjleyerek hazırlayın. Antikorları bir ila 500 oranında bloke edici çözelti içinde seyreltin ve bunları yıldız gangliyonlarına ekleyin. Plakayı bir çalkalayıcı üzerinde dört santigrat derecede 12 ila 24 saat inkübe edin. Antikor çözeltisini dikkatlice çıkarın ve 200 mikrolitre PBST ekleyin.Gömmek için, bir cam slayt üzerine floresan montaj ortamı ekleyin ve stereo mikroskop altına yerleştirin. Dumont forsepslerini kullanarak, yıldız ganglionunu alın, bir ucunu bir filtre kağıdına batırarak fazla sıvıyı çıkarın ve montaj ortamına yerleştirin. Gerekirse, Dumont forsepslerini kullanarak yıldız ganglionunun konumunu düzeltin, ardından yavaşça bir cam kapak kayması yerleştirin.Slaytları gece boyunca oda sıcaklığında karanlıkta kurumaya bırakın. Hücre boyutu ölçümü için 200 kat büyütmede tirozin hidroksilaz için boyanmış yıldız gangliyonlarını görüntüleyin ve her yıldız gangliyonu için dört ila altı rastgele görüntü alın. Hücre boyutunu tahmin etmek için ImageJ yazılımını kullanarak görüntüleri analiz edin.Nöronal hücre gövdelerini kaplayan glial hücrelerde sempatik belirteç tirozin hidroksilaz ve kolin asetiltransferaz için pozitif boyanmış bir murin yıldız gangliyonuna genel bir bakış, nöronal belirteç PGP9.5 ile kombinasyon halinde S100B için boyama ile görselleştirilebilir. Bir yıldız ganglionunun tüm mount in situ hibridizasyonunun ve immünofloresan birlikte boyanmasının örnek bir analizi, tirozin hidroksilaz proteini ve beta-3 tübülinin mRNA moleküllerinin büyük nöronal hücre gövdelerinde eksprese edildiğini, S100B'nin mRNA'sının ise çevredeki glial hücrelerde de tespit edilebildiğini göstermektedir. Birleştirmede, bazı nöronların tirozin hidroksilaz için negatif olduğu, ancak beta-3 tübülini eksprese ettiği, S100B mRNA'nın ise buradaki büyütmede gösterildiği gibi çevredeki hücrelerde de tespit edilebileceği görülmektedir.ImageJ ile hücre boyutu ölçümleri için tirozin hidroksilaz lekeli yıldız gangliyonlarının görüntüleri kullanıldı ve veriler, Mann-Whitney testi kullanılarak kontrol yıldız gangliyonlarından alınan nöronal somat ile diyabetik yıldız gangliyonlarından karşılaştırıldı. Yıldız gangliyonlarının farklı hücre tiplerinden genlerin ekspresyonu burada gösterilmektedir. Formalin sabit bir yıldız ganglionunun hematoksilen ve eozin boyaması, üstteki bağ dokusunu ve hücreleri görselleştirir.Bu protokolü denerken, özellikle omurga servikal çıkık sırasında kırıldıysa, yıldız gangliyonlarını tanımlamak için şeridi bulmayı ve longus colli kası boyunca incelemeyi unutmayın. Kardiyak sinir sistemindeki glial hücreler hakkında çok az şey bilinmektedir. Tekniklerimiz, yıldız gangliyonlarındaki rollerini incelemek için uyarlanabilir.

location-dissection-and-analysis-of-the-murine-stellate-ganglion

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Biz Amerikan ıstakoz mide stomatogastric sinir sisteminin ince diseksiyon tarif...

Homarus americanus Stomatogastric Sinir Sistemi Diseksiyon

Jonah yengeç stomatogastric sinir sistemi (STNS)...

Kanser Borealis Stomatogastric Sinir Sistemi Diseksiyon

Burada yengeç stomatogastric ganglion nöronlar detaylı aktivite, hızlı ve yüksek çözünürlüklü floresan voltaj duyarlı boya görüntüleme için bir metodoloji mevcut.

Gerilim duyarlı Boyalar ile Yengeç Stomatogastric Ganglion Nöronlar Optik Görüntüleme

Burada SC'ler uzanan aksonlar boyunca geliştirmek için mümkün olduğu bir Schwann hücresi (SC) göç tahlil tarif.

Büyüyen Aksonlar boyunca murin Schwann Hücresi Kalkınma Analizi

Bu iletişim kuralı, enterik gangliyon lazer yakalama mikrodiseksiyon (LCM) kullanarak sabitlenmemiş, taze rezeke insan bağırsak dokusundan izole yüksek bütünlük RNA örnekleri almak için hedeftir. Bu protokol flaş donmuş örnekleri insan bağırsak dokusu, cryosectioning, ethanolic boyama ve dehidratasyon, LCM, hazırlanıyor içerir ve RNA çıkarma.

Lazer-yakalama mikrodiseksiyon optimizasyonu gelen insan dokusu taze donmuş enterik gangliyon yalıtım için

Büyük pelvik gangliyonlar pelvik organları innerve parasempatik ve sempatik nöronlar içerir. Burada bir diseksiyon yöntemi tanımlamak ve bu gangliyonlar ve ilişkili sinirlerin belirlenmesi için şemalar sağlar. Bu yöntemler daha fazla çalışma için in vivo veya removal post-mortem bu ganglia deneysel manipülasyon uygulanabilir.

Erkek ve Dişi Sıçanlarda Pelvik Otonom Ganglia ve İlişkili Sinirlerin Diseksiyonu

Bu protokol, fare üstün servikal ve yıldız gangliyonunun diseksiyonu, hücre ayrışması, kriyoprezervasyon, çekirdek izolasyonu ve hashtag barkodlaması dahil olmak üzere tek çekirdekli dizileme için ayrıntılı, düşük girişli numune hazırlığını açıklar.

Düşük Girişli Çekirdek İzolasyonu ve Tek Çekirdekli RNA Dizilimi için Fare Sempatik Ganglia'nın Barkodlu Antikorları ile Çoklama

Bu protokol, superior servikal ganglionu tanımlayarak ve rezeke ederek adrenerjik innervasyonun ablasyonunun bir fare modelini tanımlamaktadır.

Bir Murin Modelinde Superior Servikal Ganglionektomi için Cerrahi Teknik

Stria vascularis, endokoklear potansiyelin oluşumu için hayati öneme sahiptir. Burada, yetişkin fare stria vascularis'in tek çekirdekli dizileme veya immün boyama için diseksiyonu sunulmuştur.

Tek çekirdekli dizileme veya immün boyama için yetişkin fare stria vascularis'in diseksiyonu

Dorsal kök ganglionları (DRG), birincil duyusal nöron hücre gövdelerini içerir ve çevresel duyusal sinyalleri omuriliğe iletir. Bu protokol, yapısal olarak sağlam gangliyonların standartlaştırılmış izolasyonunu, anatomik segmental tanımlamayı, yeni başlayanlar için sezgisel rehberliği ve prosedürel doku hasarını azaltmayı destekleyen fare DRG diseksiyon yöntemini tanımlar.

Fare Dorsal Kök Gangliyonlarının Diseksiyonu ve İzolasyonu

Öğrenin, farelerde stellate ganglionun yerini belirleme ve diseksiyon tekniklerini kullanarak kardiyak otonom sinir sistemi değişikliklerini inceleyin. Bu yöntem, ventriküler aritmilerin tedavisinde yeni terapötik yaklaşımlar geliştirmeye yardımcı olur.

Murine Stellate Ganglion'un Yeri, Diseksiyonu ve Analizi

Daha fazla video keşfet