Ensayos de migración celular y adhesión celular para investigar la interacción entre Leishmania y la célula huésped

Yasmin da Silva Luz; Amanda R. Paixão; Carla Polyana O. S. Bernardes; Thaílla Souza da Silva; Natalia Machado Tavares; Claudia I. Brodskyn; Patricia S. T. Veras; Juliana P. B. de Menezes

doi:10.3791/62461

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Artículo de método

Ensayos de migración celular y adhesión celular para investigar la interacción entre Leishmania y la célula huésped

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DOI:

10.3791/62461

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4 de agosto de 2021

Yasmin da Silva Luz^*¹ , Amanda R. Paixão^*¹ , Carla Polyana O. S. Bernardes¹ , Thaílla Souza da Silva¹ , Natalia Machado Tavares¹ , Claudia I. Brodskyn¹ , Patricia S. T. Veras¹ , Juliana P. B. de Menezes¹

¹Laboratory of Host - Parasite Interaction and Epidemiology, Gonçalo Moniz Institute

^* These authors contributed equally

En este artículo

Resumen

Aquí estudiamos las implicaciones de la interacción entre Leishmania y el huésped mediante la exploración de la migración de células dendríticas infectadas por Leishmania. Se describe la diferenciación e infección de células dendríticas, el análisis de la migración y la evaluación de los complejos de adhesión y la dinámica de la actina. Este método se puede aplicar a otros estudios de migración de células huésped cuando se infectan con Leishmania u otras especies de parásitos intracelulares.

Resumen

La leishmania es un parásito protozoario intracelular que causa un amplio espectro de manifestaciones clínicas, que van desde lesiones cutáneas localizadas que se resuelven por sí mismas hasta una forma visceral altamente mortal de la enfermedad. Se estima que 12 millones de personas en todo el mundo están infectadas actualmente, y otros 350 millones corren el riesgo de infectarse. Se sabe que las células huésped infectadas por parásitos de Leishmania , como los macrófagos o las células dendríticas, pueden migrar a diferentes tejidos del huésped, pero aún no se conoce bien cómo la migración contribuye a la diseminación del parásito y a la localización del parásito. Por lo tanto, la evaluación de la capacidad de estos parásitos para modular la respuesta, la adhesión y la migración de las células huésped arrojará luz sobre los mecanismos involucrados en la diseminación y visceralización de la enfermedad. La migración celular es un proceso complejo en el que las células sufren polarización y protuberancia, lo que les permite migrar. Este proceso, regulado por la dinámica de los microtúbulos basada en actina y tubulina, involucra diferentes factores, entre ellos la modulación de la adhesión celular al sustrato. Los procesos de adhesión y migración celular se han investigado utilizando varios modelos. En este trabajo describimos un método para caracterizar los aspectos migratorios de las células huésped durante la infección por Leishmania . Este protocolo detallado presenta la diferenciación e infección de las células dendríticas, el análisis de la motilidad y migración de la célula huésped, y la formación de complejos de adhesión y dinámica de actina. Este protocolo in vitro tiene como objetivo dilucidar aún más los mecanismos involucrados en la diseminación de Leishmania dentro de los tejidos del huésped vertebrado y también puede modificarse y aplicarse a otros estudios de migración celular.

Introducción

La leishmaniasis, una enfermedad tropical desatendida causada por parásitos protozoarios pertenecientes al género Leishmania, da lugar a un amplio espectro de manifestaciones clínicas, desde lesiones cutáneas localizadas autocurativas hasta formas viscerales mortales de la enfermedad. Se ha estimado que anualmente surgen hasta un millón de nuevos casos de leishmaniasis, con un total de 12 millones de personas infectadas actualmente en todo el mundo¹. La leishmaniasis visceral (LV), que puede ser mortal en más del 95% de los casos si no se trata, causa más de 50.000 muertes al año, afectando a millones ....