Neuroscience
A subscription to JoVE is required to view this content.
You will only be able to see the first 2 minutes.
The JoVE video player is compatible with HTML5 and Adobe Flash. Older browsers that do not support HTML5 and the H.264 video codec will still use a Flash-based video player. We recommend downloading the newest version of Flash here, but we support all versions 10 and above.
If that doesn't help, please let us know.
Yetişkin Zebra Balıklarında Künt Kuvvet Yaralanmasının Etkilerini Incelemek İçin Ölçeklenebilir Bir Model
Chapters
Summary May 31st, 2021
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the English version.
Yetişkin zebra balığı için Marmarou ağırlık düşürme modelini, künt travmatik beyin hasarı (TBI) ve sonraki nöronal yenilenmenin altında kalan mekanizmaların ardından çok çeşitli patolojileri incelemek üzere değiştirdik. Bu künt kuvvetli TBI modeli ölçeklenebilir, hafif, orta veya şiddetli bir TBI'ya neden oluyor ve insan TBI'sında gözlenen yaralanma heterojenliğini yeniden özetler.
Transcript
Bu protokol, yetişkin zebra balıklarında ölçeklenebilir künt cisim travmatik beyin hasarına neden olmak için basit, hızlı ve tekrarlanabilir bir yöntem sağlar. Bu künt cisim travmatik beyin hasarına maruz kalma eden yetişkin zebra balığı, insanlarda gözlenen ve künt bir kuvvet TBI'sından muzdarip birçok özelliği gösterir. Prosedürü gösterenler Bay James Hentig ve Bayan Kaylee Cloghessy olacak.
Bir Petri kabını modelleme kili ile doldurarak başlayın. Daha sonra ek modelleme kili ile yükseltilmiş bir platform oluşturmak için parmakları veya bir çift forsepsin arkasını kullanın. Yükseltilmiş platformu uzunlamasına bir jilet kullanarak yaklaşık eşit iki yarıya bölün.
İki yarıyı, yetişkin bir balığın uzunluğunu barındıracak şekilde bir kanala dönüştürün. Balık vücudunun 2/3'lerini başı açıkta sabitlemek için duvarlar inşa etmek için ek kil kullanın. Yaralanma üzerine başın dönmesini veya geri tepmesini önlemek için duvarlara dik olarak maruz kalan baş bölgesinde küçük bir destek kalıplama.
Kanalın kenarlarının düşen ağırlığı engellemediğine emin olun. 22 kalibrelik çelik yanıp sönen 3 milimetrelik çelik disk oluşturmak için mini delik delme kullanın. Uyuşturulmış bir balığı, dorsal tarafı yukarı olacak şekilde kanal içindeki kil kalıbına kuyruk sıkışmasına tepkisiz yerleştirin, böylece vücudu yanlara sabitlenmiştir.
3 milimetrelik 22 kalibrelik çelik diski, istenen darbe noktasının üzerine ortalanmış olarak kafaya yerleştirin. Kafasının bir tarafa eğilmemesi için balığı dik olarak hizalayın, bu da düzensiz bir darbeye neden olabilir. Çelik veya plastik boruyu sabitlemek için standart bir halka standı ve kol kelepçesi kullanın, böylece borunun tabanı zebra balığının başının 1,5 santimetre üzerindedir.
Çelik plakanın üzerine hizalı olduğundan emin olmak için boruya bakın. İstenilen yaralanma şiddetine göre uygun bilyalı rulmanı seçin. Bilyalı rulmanı önceden belirlenmiş bir yükseklikten borunun aşağısına çelik plakaya bırakın.
Daha sonra yaralı balıkları izlenecek kurtarma tankına yerleştirin. Bir Petri kabını modelleme kili ile doldurun ve diseksiyon sırasında vücudu desteklemek için küçük bir boşluk oluşturun. Balıkları sırt tarafı yukarı olacak şekilde kil kalıbına yerleştirin.
Biri vücudun ortasından, diğeri de başın tabanının arkasına yaklaşık 5 milimetre olacak şekilde iki diseksiyon pimi yerleştirin. Optik siniri açıkça kesmek ve gözleri çıkarmak için bir çift 5 Dumont tokadı kullanın. 5 yabanarı bir ucunun sağ parietal plakanın altına yerleştirin.
Rostral uca doğru hareket eden kasıtlı bir makas hareketi yapın ve sağ ön plakayı çıkarın. Daha sonra balığı saat yönünde 90 derece döndürün. 5 ön ucun bir ucunun sol parietal plakanın altına yerleştirin ve sol parietal ve ön plakaları çıkarmak için aynı makas hareketini kullanın ve beynin tüm dorsal yönünü açığa çıkarın.
Maksillayı, koku ampullerinin korunacağı ve zarar görmeyeceği şekilde açıkça transekte etmek için 5 tokmak kullanın. Aynı kümesleri kullanarak, doğru opercle, preopercle, interopercle ve subopercle çıkarın. Daha sonra omuriliği açığa çıkarmak için kalvaryumun kaudal ucundaki kasları açıkça resect.
Kürsüleri kullanarak omuriliği açıkça transekte edin. Beynin altına dikkatlice yerleştirin ve beyni yavaşça calvarium'dan çıkarın. Metin el yazmasındaki talimatları kullanarak tüm beyni veya ilgi bölgesini parçalara ayırın ve beyni bıçaklamamaya veya kazımamaya dikkat ederek ince tokalar kullanarak beyni hemen küçük bir tartım teknesine yerleştirin.
Beyni katranlı kurutma tartı teknesine aktarın ve beynin ıslak ağırlığını kaydedin. Beyinleri, sırt tarafı yukarı bakacak şekilde tartım teknesine düz bir şekilde yatırmak için yönlendirin. Daha sonra beyni ve kurutma tartım teknesini sekiz saat boyunca 60 santigrat dereceye ayarlanmış bir melezleme fırınına yerleştirin.
Beyni kurutulur sonra yeni bir katranlı küçük tartı teknesine aktarmak için, ince toparlayıpları birleştirin ve beynin ventral tarafından başlayarak yukarı doğru bir hareketle kepçeleyin. Islak bir sünger üzerinde kısmi bir kesi yapın. Ventral tarafı yukarıda olacak şekilde açıklığa her seferinde bir balık yerleştirin ve balığın vücuduna yaklaşık 40 milimolar EdU mikrolitre enjekte etmek için 30 kalibrelik bir iğne kullanın.
Daha sonra balıkları sistem suyuyla dolu tutma tankına geri verin. Beyinleri daha önce de belirtildiği gibi toplayın ve bir parçaya% 100 etanolden% 37 formaldehite kadar 2 mililitre içeren 9 mililitrelik bir cam şişeye grup olarak yerleştirin. Beyni bir rocker platformunda 4 santigrat derecede sabitle.
Beyinleri TFM'ye kuru buzun üzerine istediğiniz yönde gömmek için kriyostat aynası kullanın. Vasküler yaralanmanın bu model ile başarılı yaralanmayı tanımlamak için en kolay ve en belirgin patolojilerden biri olduğu bulunmuştur. Göstergeyi tanımlama yeteneği, yaralanma sırasında kullanılan balıkların suşu ile değişti.
Ab tipinde vasküler hasarın tanımlanması, pigmentasyon nedeniyle hafif veya orta derecede TBI ve hasarsız kontrol balıklarını ayırt etmek zordu. Yaralanmanın ardından, hafif TBI balıkları minimum yüzey aşınması gösterirken, ılımlı TBI balıkları sınırlı beyin kanaması gösterdi. Yaralanmanın boyutu şiddetli TBI balıklarında belirgindi.
Buna karşılık, albino veya Casper balığı kullanırken damar hasarı kolayca tespit edilebilir. Beyinkeninin yaralanmaya bağlı şişmesi ödem kullanılarak değerlendirildi. Buna karşılık, hem ılımlı TBI hem de şiddetli TBI anlamlı ödem, 1 dpi ve 3 dpi'ye sahipti, ancak hem ılımlı TBI hem de şiddetli TBI'nın akışkan içeriği 5 dpi hasarsız kontrollere benzeyen seviyelere geri döndü.
Bu künt cisim yaralanması, nöroaksileri kapsayan sağlam bir hücre çoğalması tepkisine neden oldu. Hasarsız kontrollere kıyasla forebranın ventrikül ve subventriküler bölgelerinde artmış EdU etiketlemesi gözlendi. Yaralı beyinler periventriküler gri bölgede, optik tekektal loblarda ve ön hipotalamusun yönlerinde hasarsız balık beynine kıyasla artan EdU etiketlemesi gösterdi.
Şiddetli TBI'ı takiben, arka beyindeki nörojenik bölgeler hasarsız beyne kıyasla hücre çoğalmasında artış gösterdi. Yaralanmanın uygun şekilde indüksiyonu için, balıkların kalıpta sabit ve stabil olduğundan ve merkez dışı darbeyi önlemek veya ağırlık düşürme yörüngesini değiştirmek için borunun düz olduğundan emin olun. Bu prosedür, özellikle tekrarlanan kafa travması veya yaralanmaya bağlı rejeneratif çalışmalar için geçerli olacak rejeneratif bir modele uygulanan hızlı ve uygun maliyetli bir künt cisim yaralanması indüksiyon yöntemi sağlar.
Related Videos
You might already have access to this content!
Please enter your Institution or Company email below to check.
has access to
Please create a free JoVE account to get access
Login to access JoVE
Please login to your JoVE account to get access
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Please enter your email address so we may send you a link to reset your password.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Your JoVE Unlimited Free Trial
Fill the form to request your free trial.
We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.
If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.
Thank You!
A JoVE representative will be in touch with you shortly.
Thank You!
You have already requested a trial and a JoVE representative will be in touch with you shortly. If you need immediate assistance, please email us at subscriptions@jove.com.
Thank You!
Please enjoy a free 2-hour trial. In order to begin, please login.
Thank You!
You have unlocked a 2-hour free trial now. All JoVE videos and articles can be accessed for free.
To get started, a verification email has been sent to email@institution.com. Please follow the link in the email to activate your free trial account. If you do not see the message in your inbox, please check your "Spam" folder.