/
/
En reporterbaserad cellulär analys för övervakning av splitsningseffektivitet
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Chapters
- 00:04Introduction
- 00:31Cotransfection of HeLa Cells with the Reporter and U1 Small Nuclear RNA (snRNA) Plasmids
- 02:0032P-Labeling of Oligonucleotides
- 02:52Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Primer Extension
- 03:53Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Fluorescent RT-PCR
- 05:08Analysis of Variant U1 snRNA Expression by RT-qPCR
- 05:38Setup and Running of Urea-PAGE Gels
- 06:27Results: Reporter Based Splicing Efficiency of U1 snRNA Constructs
- 08:09Conclusion
Detta protokoll beskriver en minigene reporter analys för att övervaka effekten av 5's-skarvning webbplats mutationer på skarvning och utvecklar suppressor U1 snRNA för räddning av mutation-inducerad splitsning hämning. Reportern och suppressorn U1 snRNA konstruktioner uttrycks i HeLa celler, och splitsning analyseras av primer förlängning eller RT-PCR.
