Name: 靶向激光消融术在乳酸杆菌胚胎中的应用 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-03-11T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 30 s
Description: 了解靶向激光消融术在褐藻胚胎发育中的应用方法。该技术可精确消融特定细胞，研究细胞命运决定与相互作用，为藻类胚胎发育研究提供可靠工具。

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S.B. 的博士研究资助由布列塔尼大区（ARED 项目编号 COH20020）和索邦大学提供。I.T. 的博士研究资助由布列塔尼大区（ARED 项目编号 COH18020）和挪威生命科学大学（NMBU）提供。本项目获得了法国国家科学研究中心（CNRS）通过 MITI 跨学科项目提供的财政支持。&#160;MRic 是法国生物成像国家基础设施（France-BioImaging）的成员，该基础设施由法国国家科研署（ANR-10-INBS-04）资助。

1. 制备 Saccharina latissima 配子体
<ol>
	<li>按照先前所述方法20,21从野外采集大型海带（S. latissima）的成熟孢子体。确保所选孢子体无附生生物（可见于叶片表面的小型生物）或内部寄生虫（存在于叶片上漂白区域或斑点中）。</li>
	<li>使用解剖刀切割叶片中心颜色最深的部分（可育的产孢组织22），将其切成1-5块（每块1 cm²），若存在漂白斑点，则应避开。</li>
	<li>用解剖刀背面轻轻擦拭切好的组织块，并配合吸水纸，去除残留的附生生物。</li>
	<li>将清洗后的组织块放入盛有无菌天然海水的玻璃培养皿中（见材料表），静置45分钟，以释放孢子，操作参照先前发表的研究22。</li>
	<li>取出叶片组织块，将海水通过40 µm细胞筛网过滤，以去除碎屑或不需要的生物体。</li>
	<li>将滤液中的孢子稀释至塑料培养皿中，浓度为20–40个孢子/mL22。</li>
	<li>将孢子悬液置于培养柜中（见材料表），设置最佳培养条件（13 °C，光照强度24 µE.m-2.s-1，光周期16:8 L:D）。</li>
	<li>让孢子萌发并发育成配子体。 
	注：在培养柜中培养2天后即可观察到孢子萌发，配子体细胞的首次分裂通常在接下来的48小时内发生。</li>
	<li>5天后更换培养基，使用经微滤的天然海水并添加0.5倍浓度的普罗瓦索利溶液（NSW1/2）（见材料表）。 
	注：为避免重复上述步骤，可选择特定的雄性和雌性配子体，并通过营养繁殖方式维持数月。在上述相同培养条件下（步骤1.7），若使用红光（波长至少580 nm，光照强度4 µE.m-2.s-1）培养，配子体可长期保持营养生长状态23。</li>
</ol>
2. 卵子发生过程中的组织碎裂与诱导
<ol>
	<li>使用细胞刮刀收集配子体。</li>
	<li>用小型塑料研杵在1.5 mL离心管中将收集的配子体研磨成4–5个细胞大小的片段。</li>
	<li>向离心管中加入1 mL NSW1/2（步骤1.9）。</li>
	<li>取2.5 µL研磨后的配子体溶液加入3 mL含1×Provasoli溶液的天然海水（NSW）中，并转移至培养皿中。 
	注意：建议使用25 mm玻璃底培养皿，便于操作。</li>
	<li>将制备好的培养皿置于培养柜中，在13 °C、白光光照强度为24 µE·m-2·s-1&#160;（弱光，光周期16:8 L:D）条件下诱导配子形成。 
	注意：约5天后可观察到最初的配子囊（雌性卵囊和雄性精囊）。雄性结构高度分枝，细胞较小；雌性由较大细胞组成，形成较长的丝状结构15,22。首次观察到卵细胞约在10天后，合子的第一次分裂通常在随后的2天内发生。</li>
	<li>在首次观察到卵细胞6天后，将培养皿转移至较强白光条件下：50 µE·m-2·s-1，光周期16:8 L:D，温度仍保持13 °C。</li>
</ol>
3. 用于选择胚胎进行消融及监测后续生长的图像采集
<ol>
	<li>对整个培养皿进行成像，以（重新）定位在消融步骤中选定的胚胎（无需将培养皿移回目镜显微镜），并监测所选胚胎的后续发育情况。 
	注意：使用倒置激光扫描共聚焦显微镜（见材料表）进行成像（图1），激光消融操作详见步骤5。</li>
	<li>将培养皿放置在载物台上，并利用视觉标记（例如，用永久性记号笔画一条线）进行定向。</li>
	<li>使用10x/0.45物镜对准某个胚胎进行聚焦。记录培养皿四个基准点的位置。</li>
	<li>启动拼图扫描。以低分辨率获取整个培养皿的透射光/荧光图像：256 × 256像素，像素驻留时间为1.54 µs，双向扫描，数字放大倍数为0.6倍，使用561 nm激光，透射率为1.2%。 
	注意：对整个直径2.5 cm的培养皿进行扫描约需6分钟，共225个图像块（图2）。此处使用561 nm激光进行透射光和荧光成像。&#160;荧光信号由共聚焦光电倍增管（PMT）在580–720 nm波长范围内收集，透射光则由透射光PMT收集。在此步骤中，561 nm激光也可用于监测叶绿素，但并非必要，因其仅有助于区分信号噪声与生物体本身。</li>
	<li>保存拼图扫描图像，并在图像采集软件（见材料表）窗口中保持该图像打开状态。</li>
	<li>更换物镜，但不要取下培养皿。 
	注意：将40x/1.2水浸物镜移至载物台一侧，以便在不移动培养皿初始位置的情况下向物镜添加浸没介质（水）。</li>
	<li>通过先前获取的拼图扫描图像导航，选择目标胚胎。一旦在该图像上确定胚胎位置，即移动载物台至该胚胎的精确位置，并以高分辨率采集该胚胎的透射光/荧光图像。 
	注意：高分辨率设置参数为：512 × 512像素，0.130 µm/像素，像素驻留时间为0.208 µs，单向扫描，数字放大倍数为2倍，使用561 nm激光，透射率为0.9%。</li>
	<li>对每个拟进行激光消融的胚胎候选者在拼图扫描图像上进行标注（图2B），然后进入激光消融步骤。</li>
</ol>
4. 激光校准
<ol>
	<li>校准激光器，并将图像采集软件与激光驱动软件同步 &#34;点击 &amp;#38; 火焰模式&#34; 和一个脉冲355 nm激光器。 
	注意：此步骤对于确保鼠标光标在激光驱动软件中的位置实现完美同步至关重要（参见 材料表与采集软件中实时图像的位置对齐。</li>
	<li>打开激光驱动软件包并点击 活体 在图像采集软件包中。</li>
	<li>通过单击同步两个软件包 开始采集 在激光驱动软件包中。实时图像现在也同时记录在紫外激光驱动软件中。</li>
	<li>通过点击定义感兴趣区域（AOI） 选择感兴趣区域 按钮，并在紫外激光驱动软件包中点击图像的边缘（右、左、上和下）。 
	注意：完成此校准步骤后，采集软件包中的像素大小、图像格式和缩放倍数设置必须保持不变。</li>
	<li>选择培养皿上的一个空白区域，将载物台高度降低至样品焦平面以下20 µm，以聚焦于玻璃底部。</li>
	<li>通过点击设置消融激光和成像激光的轨迹 开始校准 并选择 手动校准.</li>
	<li>选择足够高的激光功率，以便在实时图像中心看到一个黑点，该黑点对应于玻璃盖玻片上的小孔（所有快门必须处于打开状态）。</li>
	<li>用鼠标光标点击这个中央黑色圆点并单击 18 个额外的点 由软件建议以完成比对流程。</li>
	<li>检查校准情况 &#34;点击 &amp;#38; 火焰模式&#34; 在同一盖玻片上。 
	注意：激光校准取决于成像参数。激光校准完成后，需确保成像参数（即 512 × 512 像素，0.130 µm/像素，0.208 µs 像素驻留时间，单向扫描，2 倍数字放大）未发生改变。</li>
</ol>
5. 激光消融
<ol>
	<li>选择感兴趣的胚胎。在图像采集软件中启动延时成像记录。</li>
	<li>使用40倍/1.2数值孔径水镜，在高分辨率条件下（即512 × 512像素，0.130 µm/像素，像素驻留时间1.54 µs，单向扫描，2倍数字放大）结合561 nm激光（透射率0.9%）采集透射光/荧光图像。以最高速度进行时间序列成像记录。</li>
	<li>在延时记录开始时，先缩小观察区域，然后放大至感兴趣区域（AOI）。</li>
	<li>使用 &#34;点击 &amp;#38; 火灾&#34; 使用激光驱动软件的功能，对胚胎中目标细胞施加损伤性照射。参数设置如下：45% 激光透射率（对应最大功率 40 µW），脉冲持续时间 1 ms（步骤 4）。 
	注意：建议在激光发射期间进行视频记录。</li>
	<li>在 688 nm 下，监测叶绿体从细胞质中排出的自发荧光现象。</li>
	<li>如果细胞内容物仍保留在细胞内，请使用 &#34;点击 &amp;#38; 火灾&#34; 再次使用该功能以扩大细胞上的破口。重复操作，尽量减少击打次数，直至大部分细胞内容物被释放。</li>
	<li>在胚胎稳定后停止延时录像（即无法再检测到进一步的细胞内运动，约1-5分钟）。</li>
	<li>如有必要，更新瓷砖扫描图像上的注释。</li>
</ol>
6. 监测辐照胚胎的生长
注意：监测需持续数天。
<ol>
	<li>通过监测激光消融后发育的胚胎数量，并与死亡的胚胎数量进行比较，确定存活率。 
	注意：部分胚胎可能因各种原因在消融后立即死亡。高且快速的死亡率通常表明激光参数设置不当，或在实验过程中及后续转移期间对胚胎施加了过高的/过长时间的应激。</li>
	<li>通过每天测量经激光照射胚胎的长度，并与完整未处理的胚胎进行比较，确定其生长延迟情况。 
	注意：经激光照射的生物体生长速率通常比未经处理的生物体慢。然而，某些（不恰当的）激光设置可能导致生长抑制持续超过一周，之后生长才恢复。</li>
	<li>通过监测被消融细胞邻近细胞的反应，判断是否存在邻近损伤。在某些情况下，细胞破裂后的减压可能引起邻近细胞破裂。</li>
	<li>检查是否存在微生物污染。监测培养基中微藻和细菌的生长情况。如果培养皿中出现异常水平的微生物，则应弃用该样本，并从第2步或第3步开始重复实验流程。 
	注意：激光消融后，受损的 S. latissima 胚胎已处于高度应激状态，额外的外部应激可能导致死亡率升高。由于处理后的胚胎无法在无菌条件下生长，存在发生细菌或病毒感染的风险。</li>
	<li>通过研究表型并理解靶向区域在发育过程中的作用，评估被照射生物体的整体发育情况。</li>
</ol>

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</ol>

作者无任何利益冲突需要披露。

局部细胞激光消融能够以高精度实现时间和空间上的特异性消融。然而，由于靶细胞可能难以接近，其效率可能会受到限制；例如，在三维胚胎中的所有细胞即属此类情况。本实验方案基于褐藻Saccharina latissima的胚胎，该胚胎发育形成单层叶片结构，其中所有细胞均可被清晰分辨，并可利用激光束逐个进行消融。
激光功率与波长 
近红外飞秒脉冲激光常用于动物发育研究24,25。然而，在褐藻（如海带属 Saccharina）中，激光在不灼伤整个胚胎的情况下无法实现细胞爆破。该反应可能与叶绿体光捕获系统的高活性有关。
采用纳秒脉冲紫外激光进行消融时，测试了两种方法：（1）在较短时间内使用高功率脉冲，或（2）在较长时间内使用较低的激光照射。激光所传递的能量是激光功率与脉冲持续时间的综合结果，会影响被照射细胞所接收的能量。传递的能量还可能通过反射和衍...

数十年来，激光消融技术一直被用于研究胚胎发育。通过激光束照射胚胎细胞，可以监测胚胎发生过程中细胞的再生潜能和细胞谱系的变化，并研究靶向消融对细胞分裂和细胞命运的影响。激光消融方法所使用的模式生物通常是动物，例如昆虫1,2、线虫3,4、脊椎动物5,6，偶尔也包括植物7,8。此外，1994年和1998年曾采用激光显微消融技术对褐藻Fucus进行研究，以证明细胞壁在早期胚胎光极化过程中的作用9,10。
褐藻属于茸鞭生物（Stramenopiles）类群，于约16亿年前在真核生物进化树的根部分化。因此，它们在系统发育上独立于其他多细胞生物，如动物和植物11。Saccharina latissima 属于海带目（Laminariales），通常被称为海带，是地球上最大的生物之一，体长可超过30米。Saccharina sp.&#160;是一种大型海藻，广泛应用于食品和饲料领域，其多糖成分被提取后用于全球范围内的农业、制药和化妆品工业12,13。该物种的养殖主要在亚洲进行，近年来也在欧洲开展，其过程需要在育苗场中预先培育胚胎，然后将幼体释放到开放海域中。与其他所有海带一样，它&#160;具有双相生活史：包括一个微观的配子体阶段，在此阶段中单倍体配子体生长并产生配子以进行受精；以及一个二倍体的宏观孢子体阶段，在此阶段中，从固着器延伸出大型扁平叶状体，附着于海底或岩石上。孢子体在成熟时释放单倍体孢子，从而完成其生活史14,15,16。
S. latissima 具有一些有趣的&#160;形态学特征17。其胚胎最初发育为单层平面状细胞层15,18,19&#160;，随后在不同类型组织出现时转变为多层结构。此外，海带目（Laminariales）是褐藻中少数几个胚胎在发育过程中仍附着于母体配子体组织的类群之一（线叶藻目 Desmarestiales 和孢根藻目 Sporochnales 也是如此15）。这一特征为研究母体组织在胚胎发育过程中的作用提供了机会，并可用于比较褐藻与动物和植物之间的母体调控机制。
本文介绍了在早期海带胚胎中进行激光消融的首个完整实验方案。该方案采用紫外纳秒脉冲技术，可特异性破坏胚胎中的单个细胞，以研究这些细胞在胚胎发育过程中的各自作用。该方法为研究海带目（Laminariales）胚胎发育过程中的细胞相互作用和细胞命运提供了可靠的途径。

<table><tbody><tr><td>25 mm 玻璃底培养皿</td><td>NEST</td><td>801001</td><td></td></tr><tr><td>高压灭菌海水</td><td>-</td><td></td><td>采集自法国罗斯科夫附近海域，靠近阿斯坦浮标（48&amp;deg;44.934 N 003&amp;deg;57.702 W），水深 20 m。</td></tr><tr><td>细胞刮刀</td><td>MED 2</td><td>83.3951</td><td></td></tr><tr><td>40 &amp;micro;m 细胞筛</td><td>Corning / Falcon</td><td>352340</td><td></td></tr><tr><td>培养柜</td><td>Snijders Scientific 植物生长培养柜 ECD01</td><td></td><td>其他品牌亦可使用，只要能够控制光照强度、光周期和温度即可。</td></tr><tr><td>LSM 880 Zeiss 共聚焦显微镜</td><td>Carl Zeiss microscopy, Jena, Germany</td><td></td><td>使用 40x/1.2 水镜进行消融和成像</td></tr><tr><td>研磨杵</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Z359947</td><td>蓝色聚丙烯材质（可高压灭菌）</td></tr><tr><td>Provasoli 添加剂</td><td>-</td><td></td><td>配方见此处：http://www.sb-roscoff.fr/sites/www.sb-roscoff.fr/files/documents/station-biologique-roscoff-preparation-du-provasoli-2040.pdf</td></tr><tr><td>脉冲 355 激光器（UGA-42 Caliburn 355/25）</td><td>Rapp OptoElectronic, Wedel, Germany</td><td></td><td></td></tr><tr><td>手术刀</td><td>Paramount</td><td>PDSS 11</td><td></td></tr><tr><td>SysCon 软件</td><td>Rapp OptoElectronic, Wedel, Germany</td><td></td><td>激光驱动软件</td></tr><tr><td>ZEN 软件</td><td>Carl Zeiss microscopy, Jena, Germany</td><td></td><td>成像软件，与 SysCon 软件配合使用；Black 2.3 版本</td></tr></tbody></table>

saccharina latissima 胚胎中的靶向激光消融

Targeted Laser Ablation in the Embryo of Saccharina latissima

在Saccharina latissima中，胚胎&#160;发育为单层细胞片，称为叶片（lamina）或叶状体（blade）。每个胚胎细胞易于观察，与相邻细胞界限清晰，可进行单独靶向操作。数十年来，激光消融技术已被用于胚胎发育研究。本文针对褐藻S. latissima的早期胚胎建立了一种细胞特异性激光消融实验方案。本研究内容包括：（1）Saccharina胚胎的制备，以及对关键参数（如培养条件）的详细说明；（2）激光消融参数设置；（3）利用延时显微成像技术监测辐照后胚胎的后续生长过程。此外，本文还提供了将胚胎从成像平台运回实验室的最佳条件细节，该过程可能对后续胚胎发育产生显著影响。属于海带目（Laminariales）的藻类其胚胎发育模式与Saccharina相似，因此本方案可轻松推广至该分类群中的其他物种。

S. latissima 的配子体被培养，并诱导配子发生以产生合子和胚胎。在诱导配子发生后第12天，对胚胎进行激光消融。本实验旨在评估特定细胞在 S. latissima 胚胎整体发育过程中的作用。实验靶向了最顶端细胞、最基部细胞以及中间细胞。经过图块扫描后，整个培养皿（图2A）中一个感兴趣的胚胎被确定为适合进行激光照射的候选对象（图2B）。选择该胚胎中的一个特定细胞，对其进行定位，并使用脉冲紫外激光束照射，激光功率最高为40 µW（对应所用设备最大功率的45%），持续时间为1 ms（视频 1）。该细胞释放出其内容物（叶绿体和细胞质）。有趣的是，邻近细胞对受照细胞的破裂作出反应，向细胞间隙扩展。受照胚胎的位置被记录下来，以便在随后的10天内进行持续观察（图3）。大多数受照胚胎继续发育，但表现出生长改变（胚胎形态）。在明确每种受照细胞对整体发育机制调控的具体功...

在胚胎中特异性地破坏特定细胞是研究细胞命运相关细胞相互作用的有力工具。本方案描述了在褐藻Saccharina latissima早期胚胎中对靶向细胞进行激光消融的技术。

Saccharina latissima 胚胎中的靶向激光消融

在海带（Saccharina latissima）中，胚胎发育形成单层细胞片，称为叶片或叶状体。每个胚胎细胞易于观察，且 readily ...

本方案是首个针对早期海带胚胎的完整激光消融方案。该操作为研究褐藻胚胎发生过程中的细胞命运决定及细胞间相互作用提供了可靠的方法。局部细胞激光消融可实现对细胞和组织高精度的时间和空间特异性消融。该方法是研究褐藻早期胚胎中细胞命运和相互作用的一种有前景的技术，经过少量修改后也可应用于其他藻类系统。首先对整个培养皿进行成像，以定位胚胎，便于在消融步骤中进行选择，并监测所选胚胎的后续发育过程。启动图块扫描。记录培养皿四个基点的位置。按照文本手稿中定义的参数进行设置，并以低分辨率采集整个培养皿的透射光或荧光图像。保存平铺扫描图像，并在图像采集软件窗口中保持打开状态。更换物镜时不要移除培养皿。在扫描图像上找到感兴趣的胚胎。为了校准激光器，打开激光驱动程序和图像采集软件包，然后初始化激光光路。通过在激光驱动软件包中点击开始采集，使两个软件包同步。设置激光消融参数，然后点击“live”。在培养皿上选择一个空白区域，并将载物台高度调至低于培养皿顶部表面20微米处，以聚焦于玻璃底部。通过点击UV激光驱动软件包中的“choose AOI”按钮，并点击图像边缘，来确定感兴趣区域。单击开始校准，选择手动校准以设置消融激光和成像激光的轨迹。确保所有快门均已打开。选择足够高的激光功率，以便在实时图像中心看到一个黑点，该黑点对应于玻璃盖玻片上的孔洞。使用鼠标光标单击中央的黑色圆点，并选择软件提供的另外18个圆点以完成校准程序。单击“单击并触发”模式。在同一盖玻片上检查校准结果，然后单击激光照射痕迹可见的玻璃层。在图块扫描中选择感兴趣的胚胎，通过点击它来移动载物台。启动时间序列。在活体状态下测试延时成像参数，并根据需要进行调整。在图像采集软件中以最高速度开始延时记录。调整放大倍数，以聚焦于目标区域并观察整个胚胎。在记录消融过程中，为持续追踪胚胎，请点击按钮“采集最新图像”。将参数设置为45%激光透射率，对应最大40微瓦和1毫秒的脉冲持续时间。使用激光驱动软件的点击触发功能，对目标胚胎细胞施加损伤性辐照。在688纳米下，监测叶绿体自细胞质中自发荧光排出的情况。如果细胞内容物仍留在细胞内，可再次使用点击和击发功能，以增大细胞上的破口。重复此过程，直至大部分细胞内容物被释放，同时尽量减少击发次数。在胚胎稳定且无法再检测到细胞间运动后，停止延时记录。更新平铺扫描图像上的注释，覆盖现有的平铺扫描图像，并保存该图像。通过监测激光消融后继续发育的胚胎数量，并与死亡的胚胎数量进行比较，确定存活率。通过每天测量接受激光照射的胚胎长度，并与完整未处理的胚胎进行比较，确定生长延迟情况。通过监测被消融细胞邻近细胞的反应来确定邻近损伤情况。所关注的靶向细胞包括最顶端的细胞、最基底的细胞以及中间位置的细胞。在对整个培养皿进行逐块扫描后，选择一个合适的胚胎作为激光照射的候选对象。当以45%功率的脉冲紫外激光束照射时，细胞释

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Research

科研

JoVE Journal

Developmental Biology

发育生物学

靶向激光消融术在乳酸杆菌胚胎中的应用

本文描述了一种利用钛宝石飞秒激光振荡器的双光子吸收效应，对含有笼锁型荧光蛋白的单个细胞进行光激活的方法。为了对光激活的细胞进行命运图谱绘制，采用免疫组织化学技术。该技术可应用于任何类型的细胞。...

斑马鱼单细胞命运图谱绘制

本文所述方法包括利用高能激光脉冲对活体斑马鱼胚胎进行精确损伤，并随后随时间推移分析这些损伤及其恢复过程。我们还展示了如何在激光诱导损伤期间及之后，对经基因标记的单个或成组骨骼肌细胞进行追踪。...

斑马鱼胚胎骨骼肌激光损伤

来源： Morsch, M.,  et. al., 利用常规紫外激光共聚焦显微镜诱导细胞应激与死亡。 J. Vis. Exp. (2017)...

使用共聚焦显微镜对斑马鱼幼鱼进行单神经元选择性激光消融

来源： Muto, A., et al．利用双光子激光消融神经元群体并结合钙成像与斑马鱼幼鱼行为记录进行评估．J. Vis. Exp. (2018)...

利用双光子显微镜在斑马鱼幼体中进行靶向神经元消融

两栖类片脚类动物Parhyale hawaiensis...

八细胞期端足类甲壳动物Parhyale hawaiensis单细胞消融

本方案展示了如何在农场动物的受精卵中进行细胞质显微注射。该技术可用于将任何溶液注入单细胞胚胎中，例如基因组编辑工具，以生成基因敲除动物。...

家畜受精卵的激光辅助胞质内显微注射

激光消融是一种广泛适用于研究生物系统再生的技术。本方案描述了如何使用标准的激光扫描共聚焦显微镜对斑马鱼侧线中的中间神经丘细胞进行激光消融，并随后进行再生过程的延时成像。...

基于共聚焦显微镜的斑马鱼中间神经丘细胞激光消融与再生检测方法

胚胎发育需要细胞运动的大规模协调。双光子激发介导的激光消融技术可实现对深层大量细胞进行空间可控的三维消融。此外，该技术还可用于探究集体迁移细胞的反应 体内...

利用双光子显微镜在斑马鱼原肠胚中实现深度与空间可控的体积消融

本实验方案描述了一种利用激光损伤系统结合用于幼鱼处理的自动化微流控平台，在斑马鱼幼鱼中诱导组织特异性且高度可重复损伤的方法。...

用于研究斑马鱼幼鱼脊髓再生的可控半自动激光诱导损伤

本方案展示了在完整的Drosophila幼虫中对单个神经元进行激光细胞消融的技术。该方法可用于研究在发育中的神经系统中降低神经元之间竞争所产生的影响。...

完整组织中的激光细胞消融 果蝇 幼虫揭示突触竞争

本方案描述了一种在斑马鱼幼鱼中进行的双光子激光消融方法，该模型可用于研究骨再生以及免疫反应对消融的影响。...

利用双光子激光消融发育期斑马鱼幼鱼中的成骨细胞

了解靶向激光消融术在褐藻胚胎发育中的应用方法。该技术可精确消融特定细胞，研究细胞命运决定与相互作用，为藻类胚胎发育研究提供可靠工具。

Saccharina latissima 胚胎中的靶向激光消融

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