Name: Uzun Süreli Yetiştirme için İnsan Miyokard Dokusunun Hazırlanması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-06-02T14:10:00.000+00:00
Duration: 10 min 58 s
Description: Keşfedin, insan miyokard dokusunun uzun süreli yetiştirilmesi için biyomimetik odada ekz vivo kültür protokolü. Bu yöntem, kontraktif kuvvet ve kinetiği değerlendirerek kardiyovasküler ilaç tarama çalışmalarına olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Araştırma DZHK hibeleri 81Z0600207 (JH, PS ve DM) ve 81X2600253 (AD ve TS) tarafından finanse edildi.
Yazarlar, Claudia Fahney, Mei-Ping Wu ve Matthias Semisch'e, kurulumların hazırlanmasındaki destekleri ve doku ekiminin düzenli olarak sürdürülmesi için teşekkür eder.

Burada açıklanan deneyler için doku toplama, Münih Üniversitesi ve Bochum Ruhr Üniversitesi Kurumsal İnceleme Kurulları tarafından onaylanmıştır. Çalışmalar Helsinki Deklarasyonu kılavuzlarına göre yürütülmüştür. Hastalar doku toplamadan önce yazılı bilgilendirilmiş onamlarını verdiler.
1. Doku edinimi
<ol><li>Kalp nakli veya kalp ameliyatı geçiren hastalardan insan dokusu elde edin.</li>
	<li>Dokuyu tedarik etmeden önce, 2 L kardiyoplejik çözelti hazırlayın (ayrıca dilimleme tamponu olarak adlandırılır (Tablo 1)).</li>
	<li>4 cm x 4 cm boyutlarında transmural sol ventrikül (LV) biyopsisi elde edildikten sonra, dokuyu derhal (eksizyondan sonraki 5 dakika içinde) yaklaşık 70 mL soğuk (4 °C) dilimleme tamponu içeren kapatılabilir plastik tek kullanımlık steril bir beherin içine yerleştirin. 4 °C'de tutun. NOT: Bu protokolde kullanılan dilimleme tamponu, dokunun 36 saate kadar soğuk depolanmasına (4 °C) izin verir. Bu, dokunun laboratuvara yakın olmayan kliniklerden soğuk taşınmasına izin verir. Bununla birlikte, 24 saat ≤ taşıma sürelerinin en uygun olduğu kanıtlanmıştır.</li>
</ol>2. Agaroz ve vibratomun hazırlanması
<ol><li>Yeterli yetiştirme odalarının hazırlandığından ve sterilize edildiğinden emin olun (Şekil 1A).<ol>
<li>Odaları ve grafit elektrotları% 10'luk bir izopropanol çözeltisinin 1 L'sine batırın ve gece boyunca çalkalayın. Ertesi gün, odaları 3 dakika boyunca% 100 izopropanol çözeltisine aktarın ve grafit elektrotları 10 dakika boyunca 120 ° C'de otoklav yapın.</li>
		<li>Haznelerin ve grafit elektrotların laminer bir akış başlığı altında hava ile kurumasını bekleyin.</li>
		<li>Rocker üzerindeki mevcut konumlara göre odaların her birine bir devre kartı takın. Üreticinin talimatlarına göre devre kartına iki grafit elektrot yerleştirin.</li>
		<li>Kirlenmeyi önlemek için haznenin üstüne 35 mm'lik bir Petri kabı kapağı yerleştirin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Sistemi bir bilgisayara bağlayarak bir inkübatörde 37 °C ve% 5 CO2'de Miyodish yetiştirme sistemini (Malzeme Tablosuna bakınız) kurun (Şekil 1B).</li>
	<li>% 4 düşük eriyik agarozunu dilimleme tamponunda hazırlayın (glikoz olmadan; Tablo 2). Agaroz 6 ay boyunca 4 ° C'de saklanabilir.<ol>
<li>Deney gününde, 80 ° C'de ayarlanmış bir su banyosu kullanarak bir stok hacmi agaroz çözeltisini eritin. Miktara bağlı olarak, erime yaklaşık 30 dakika sürer.</li>
		<li>Agaroz sıvı olduğunda, ek 2 mL hava ile 10 mL'lik bir şırıngaya 8 mL sıvı agaroz çekin. Şırıngayı steril bir kapakla kapatın ve agarozun katılaşmasını önlemek ve numunenin hipertermi hasarını önlemek için sıcaklığını dengelemek için 20 dakika boyunca 37 ° C'lik bir su banyosuna baş aşağı yerleştirin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Varsa, yeterli soğutma kapasitesine izin vermek için doku dilimlemeden en az 30 dakika önce vibratomun su soğutma cihazını açın. Su sirkülasyonunun sıcaklığını 4 °C'ye ayarlayın. NOT: Burada kullanılan kesme tepsisi ve soğutma plakasının her ikisi de dahili bir su sirkülasyonu içeriyordu. Bu, soğutma ve kontaminasyon risklerini azaltmak için şiddetle tavsiye edilir. Bununla birlikte, buzu bir soğutma tekniği olarak kullanmak da mümkündür. Ayrıca, su soğutma cihazının protokolün bu noktasında vibratomun kesme tepsisine ve / veya soğutma plakasına bağlanması gerekmez.</li>
	<li>Vibratomun dilimleme tepsisini ve numune plakasını, tüm yüzeyleri en az 3 dakika boyunca% 100 izopropanol ile yıkayarak temizleyin. NOT: Kullanılan vibratom sistemine bağlı olarak, vibratom kurulumu farklı olabilir. Kurulum ve bıçak kalibrasyon yöntemleri hakkında bilgi için laboratuvarda bulunan vibratomun el kitabına bakın.</li>
	<li>Kesme tepsisini dilimleme tamponu ile %90-%95'e kadar doldurun. Şu anda kullanılan kurulumda, bu yaklaşık 400 mL'ye karşılık gelir. Su soğutma cihazının borusunu, vibratomun kesme tepsisindeki ve soğutma plakasındaki valflere bağlayın.</li>
	<li>Hazırlık için gerekli tüm aletleri, 5 s için% 100 izopropanol çözeltisine batırarak dezenfekte edin. Aletleri izopropanol çözeltisinden çıkarın ve laminer akış başlığının altında hava ile kurulayın.</li>
</ol>3. Numunelerin kesilmesi ve gömülmesi
<ol><li>Doku örneğini soğuk dilimleme tamponu ile doldurulmuş 100 mm'lik bir Petri kabına aktarın. Çanağı 4 ° C'de bir soğutma plakasında tutun (soğutucuya bağlı veya buz üzerine yerleştirilmiş).</li>
	<li>Endokardın cımbızla tutulmasını ve yaklaşık 3 mm endokardiyal dokuyu kesmek için makas kullanılmasıyla endokardiyal trabekülleri çıkarın. Aynı şekilde, varsa epikardın altındaki aşırı yağ dokusunu çıkarın.</li>
	<li>Kesilmiş doku numunesini, endokardiyal tarafı yukarıya, kare konumda (0,9 cm x 0,9 cm; Şekil 1C, D). Her iğne ucunun çapraz kenarının içe dönük olduğundan emin olun. Bu, fiksasyonu arttırır ve miyokardın zarar görmesini önler. DİKKAT: Yukarıda belirtilen karenin oryantasyonu, beklenen baskın miyofiber yönüne ortogonal olmalıdır.</li>
	<li>Bir neşter kullanarak dört iğne karesinin dışındaki tüm fazla dokuları kesin. Orijinal numunenin boyutu izin veriyorsa, bu preparat sırasında aynı ham numuneden iki miyokard dokusu örneği kullanın.</li>
	<li>Cımbız kullanarak, numune üzerinde kalan fazla dilimleme tamponunu çıkarmak için kesilmiş numuneyi steril bir doku parçasına yerleştirin. Numunenin kurumasını önlemek için, numuneyi doku üzerinde 10 saniyeden daha uzun süre tutmayın.</li>
	<li>Numuneleri 35 mm'lik bir Petri kabına yerleştirin, böylece bıçak kardiyomiyosit hizalamasına dik olarak kesilir ve epikard aşağı doğru bakar. Preparat iki numune içeriyorsa, numunelerin ortalandığından ve birbirine temas etmediğinden emin olun.</li>
	<li>Agaroz şırıngasını su banyosundan alın ve örnekleri agaroza batırın. (Şekil 2A). Agarozun bir soğutma plakası üzerinde 5 dakika katılaşmasına izin verin. Numune (ler) Petri kabı ile temas halinde kalmalıdır, bu da kesme düzleminin baskın miyokard lifi yönüne paralel olmasını sağlayacaktır. DİKKAT: Hava kabarcıklarını önlemek için şırıngayı tamamen boşaltmayın. Numunelerin daldırılması sırasında şırıngada kalan agaroz miktarına dikkat edin. Numunelerle birlikte tabakta hava kabarcıkları olması durumunda, hava kabarcıklarını dikkatlice şırıngaya geri çekin.</li>
</ol>4. Numunelerin kesme tepsisine yerleştirilmesi
<ol><li>Numuneyi (ler) i içeren katılaşmış agarozu, bir spatula veya benzeri bir alet kullanarak, numune ile Petri kabının yan tarafı arasına sokarak 35 mm'lik Petri kabından çıkarın. Örnekleri kapalı tutarken agarozun bir kısmını neşter kullanarak kesin. DİKKAT: Agarozu çok fazla çıkarmayın. X/Z düzleminde uzun ve kısa kenarlarda en az 5 mm agaroz kalmalıdır. NOT: Adım 4.2-4.4'ün hızlı bir şekilde art arda (yani, maksimum 5 sn) gerçekleştirilmesi gerekir. Başlamadan önce gerekli tüm araçları elinizin altında bulundurun. Yerleştirmeden sonra numunenin yeniden konumlandırılması mümkün değildir. Tutkalın havaya ve neme maruz kalmasını sınırlamaya çalışın. Hava veya sıvılarla temas, yapıştırıcıyı katılaştıracak ve kullanılamaz hale getirecektir.</li>
	<li>Bir pipetle, kesme platformunun ortasına ve çevresine 60 μL yapıştırıcı yerleştirin ve dağıtın.</li>
	<li>Agarozda bulunan numunenin epikardiyal tarafını cımbız kullanarak yapıştırılmış alanın üzerine yerleştirin. Yeniden konumlandırmayın. Numunenin endokardiyal tarafı agarozda görünür olmalıdır. Tutkalın 1 dakika katılaşmasına izin verin. Numuneyi içeren agarozu üstten künt bir aletle (örneğin cımbız) hafifçe bastırırken, agarozun kesilmesini veya zarar görmesini önleyin.</li>
	<li>Numune platformunu, dilimleme tamponu ile doldurulmuş vibratomun kesme tepsisine belirlenen konumuna yerleştirin.</li>
</ol>5. Vibratomu başlatma
<ol><li>Titreşim genliğini 1 mm'ye ve ilk kesme hızını 0,07 mm/sn'ye ayarlayın. Dilimleri kesmek için dilimin kalınlığını 300 μm'ye ayarlayın.</li>
	<li>Bıçak sadece agarozu kestiği sürece, kesme hızını maksimuma çıkarın, bu durumda 1,50 mm / s'dir. Vibratom dokuyu kesmeye başlar başlamaz, hızı hemen 0,07 mm / s'ye düşürün. NOT: Doku düzgün bir şekilde dilimlenmezse, örneğin numunede geniş fibrotik alanlar varsa, kesme genliğini 1,5 mm'ye kadar artırmaya ve kesme hızını 0,04 mm / s'ye düşürmeye yardımcı olabilir.</li>
</ol>6. Dilimleme prosedürü sırasında orta ve inkübatör hazırlığı
<ol><li>Her yetiştirme odasını 2,4 mL tam yetiştirme ortamı ile doldurun (Tablo 3).</li>
	<li>Yetiştirme sistemi üzerinde ortamla dolu yetiştirme odalarını 37 °C, %5 CO 2, %21 O 2 ve %80 nem olarak ayarlanmış inkübatöre yerleştirin. Ortamı en az 20 dakika boyunca dengeleyin.</li>
	<li>Yetiştirme sistemini bir bilgisayara bağlayın ve ilgili yazılım programını başlatın.</li>
	<li>Rocker hızını 60 rpm'ye ayarlayın ve stimülasyon parametrelerini (stimülasyon darbeleri ve frekansı) önceden ayarlayın. İnsan kalp dilimleri için, standart stimülasyonu, her biri 3 ms pozitif akım, 1 ms duraklama ve 3 ms ters akım darbesinden oluşan, dakikada 30 atım (BPM) hızında 50 mA akımlı bifazik impulslara ayarlayın. NOT: İyi korunmuş dokularda, tipik stimülasyon eşiği yaklaşık 15 mA'dır. Güvenilir stimülasyonu sağlamak ve stimülasyon eşiğindeki olası herhangi bir artışı hesaba katmak için, akımı stimülasyon eşiğini iki ila üç kat aşan bir değere ayarlamanız önerilir.</li>
	<li>Yetiştirme odalarının elektrotlarının doğru çalıştığını doğrulamak için yazılımın elektrot göstergelerini kontrol edin. NOT: Yetiştirme yazılımındaki kanal göstergesi kırmızıya döndüğünde harekete geçilmesi gerekir. Bu durumda, bipolar nabız yükleri dengeli değildir.</li>
</ol>7. Dilimlerin hazırlanması
NOT: İlk subendokardiyal dilimler genellikle doku ekimi için uygun değildir ve düzensiz morfoloji nedeniyle atılması gerekir. İlk beş ila 10 dilimden sonra, dilim dokusu ve morfolojisi gelişir. İdeal dilim en az 1 cm x 1 cm'dir, fibrotik yamaları yoktur veya sadece sınırlı değildir, parçalanmamıştır ve homojen lif hizalamasına sahiptir (Şekil 2B, D). Miyozit lifleri arasında yer alan interstisyel fibroz, başarısız insan miyokardında sıklıkla bulunur. Şaşırtıcı bir şekilde, bu uygulama başarısının olumsuz bir göstergesi değildir.
<ol><li>Dilimlerin kurumamasını sağlamak için 5 cm'lik Petri kabı kapağına yeterli miktarda soğuk dilimleme tamponu dökün. Dilimleri, soğuk dilimleme tamponunu içeren Petri kabı kapağına yerleştirin.</li>
	<li>Ağarozu cımbız kullanarak dokudan ayırın. Dokuya dokunmayı önleyin. Dokuyu dikkatli bir şekilde ele alın, çünkü dokudaki herhangi bir hasar, yetiştiriciliğin başarı oranını azaltacaktır.</li>
	<li>Bir ışık kaynağına karşı yakın inceleme yaparak miyokard liflerinin yönünü belirleyin. Bu, plastik üçgenleri adım 7.6'da dokuya bağlarken önemlidir. NOT: Adım 7.4 ve 7.5'in 5 saniye içinde hızlı bir şekilde art arda gerçekleştirilmesi gerekir.</li>
	<li>Dokuyu yetiştirme odalarının içine sabitlemek için yapıştırıcı kullanarak bir numuneye iki plastik üçgen takın.<ol>
<li>Steril bir Petri kabı kapağına 1 μL yapıştırıcı yerleştirin. Otoklavlanmış plastik üçgenlerden birini almak için kancalı bir cımbız kullanın. Üçgenin ön kenarını hızlı bir şekilde yapıştırıcıya batırın ve üçgeni kardiyomiyosit hizalamasına dik olarak numuneye yapıştırın. Diğer üçgen için bu işlemi tekrarlayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Üçgen genişliğini aşan dokuyu bir neşter ile kesin (Şekil 2C). Dilimi, takılı iki üçgenle birlikte kesme tepsisinin dilimleme tamponuna geri yerleştirin. NOT: Yetiştirme odalarını doldurmak için yeterli dilim hazırlanana kadar 7.2 ila 7.5 arasındaki adımları tekrarlayın. Dilimlerin zayıf kasılma ile değiştirilmesine izin vermek için birkaç ek dilim hazırlamanızı öneririz.</li>
</ol>8. Dilimlerin montajı
NOT: Son yük, yetiştirme odalarındaki yay telinin sertliği ile belirlenir. Yay telinin kalınlığına bağlı olarak üç farklı tip mevcuttur.
<ol><li>Kuluçka makinesinden orta dolgulu bir ekim odası alın. Hazırlanan dilimlerden birini seçin ve her pime bir üçgen bağlayarak hazneye yerleştirin.</li>
	<li>Montaj pimleri arasındaki mesafeyi numune boyutuna göre ayarlayın. Numunenin ortama batırıldığından emin olun. Odayı, inkübatördeki yetiştirme sisteminin belirlenmiş soketine geri yerleştirin. DİKKAT: Dokuyu aşırı germeyin ve yay telini aşırı bükmeyin!</li>
	<li>Tabağın rocker'a yerleştirilmesinden sonra ön yük gerilimini ayarlayın.<ol>
<li>Ayar vidasını saat yönünün tersine çevirerek ön yükü azaltın. Bilgisayar ekranındaki ilgili grafiğin taban çizgisi artık değişmeyene kadar bunu yapın.</li>
		<li>Ayar vidasını saat yönünde çevirerek ön yükü dikkatlice artırın (yani gerilimi artırın). En yüksek sertliğe sahip odalar için, grafikteki karşılık gelen taban çizgisi, 1 mN ön yüke karşılık gelen 1000-1200 birim artana kadar devam edin. NOT: Kesin ayarlama, üreticinin talimatlarına göre bir deneyden önce kalibrasyonla belirlenebilen bir yetiştirme odasının bireysel yay sabitine bağlı olacaktır. Kayıt yazılımı, kuvvetlerin μN cinsinden eşit olarak görüntülenmesi için bireysel oda kalibrasyonunun dikkate alınmasına izin verir. Yetiştiriciliğin başlangıcından itibaren elektriksel stimülasyon uygulanması tavsiye edilir. Bu nedenle, ön yük ayarı sırasında dilimin büzülmeye başlaması mümkündür. Bu durumda, ön yükü değerlendirmek için diyastolik taban çizgisine odaklanın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>9. Ortamın değiştirilmesi
<ol><li>Tablo 3'teki tarife göre yetiştirme ortamı hazırlayın. Ortamın kullanımından kısa bir süre önce, 50 mL'lik bir tüpe 50 μL β-merkaptoetanol (50 mM) ekleyin. 4 °C'de saklayın.</li>
	<li>Her 2 günde bir, ekim ortamını kısmen değiştirin. Miyokard dilimlerinin uzun süreli ekimi isteniyorsa, ortamı her 2 günde bir yenileyin.</li>
	<li>Taze ortamı bir su banyosunda veya sıcak hava inkübatöründe 37 ° C'de 30-45 dakika önceden ısıtın. Bir yetiştirme odasını inkübatörden çıkarın ve laminer bir akış başlığının altına yerleştirin. DİKKAT: Düşük sıcaklığa bağlı hiper kontraktürleri önlemek için odayı ve ortamı 37 ° C'de (> 35 ° C) sıcak tutmak önemlidir. Orta değişimden sonraki birkaç saat içinde diyastolik gerilimin artması olarak daha az belirgin hasar mevcut olabilir. Bu iyileşmiş gibi görünebilir, ancak tekrarlanan stres biriken bozulmaya neden olabilir.</li>
	<li>Ortamı ekim odasından çıkarın, odada yaklaşık 0,8 mL bırakın. Aynı odaya 1,6 mL taze ortam ekleyin. Toplam ortam hacmi, oda başına yaklaşık 2,4 mL olmalıdır.</li>
	<li>Odanın kapağını geri yerleştirin ve yetiştirme odasını tekrar kendi konumuna getirin.</li>
</ol>

<ol><li>George, S. A., Brennan, J. A., Efimov, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+cardiac+electrophysiology+assessment+by+dual+voltage+and+calcium+optical+mapping+of+human+organotypic+cardiac+slices%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Expereiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Preclinical cardiac electrophysiology assessment by dual voltage and calcium optical mapping of human organotypic cardiac slices.</a> Journal of Visualized Expereiments: JoVE. (160), e60781(2020).</li>
<li>Lu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progressive+stretch+enhances+growth+and+maturation+of+3D+stem-cell-derived+myocardium%5BTitle%5D)+AND+%22Theranostics%22%5BJournal%5D)">Progressive stretch enhances growth and maturation of 3D stem-cell-derived myocardium.</a> Theranostics. 11 (13), 6138-6153 (2021).</li>
<li>Pontes Soares, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((2D+and+3D-organized+cardiac+cells+shows+differences+in+cellular+morphology%2C+adhesion+junctions%2C+presence+of+myofibrils+and+protein+expression%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">2D and 3D-organized cardiac cells shows differences in cellular morphology, adhesion junctions, presence of myofibrils and protein expression.</a> PloS one. 7 (5), 38147(2012).</li>
<li>Klumm, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+cultivation+of+human+atrial+myocardium%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">Long-term cultivation of human atrial myocardium.</a> Frontiers in Physiology. 13, 839139(2022).</li>
<li>Krane, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sequential+defects+in+cardiac+lineage+commitment+and+maturation+cause+hypoplastic+left+heart+syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Sequential defects in cardiac lineage commitment and maturation cause hypoplastic left heart syndrome.</a> Circulation. 144 (17), 1409-1428 (2021).</li>
<li>Miller, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+slice+culture+system+reliably+demonstrates+clinical+drug-related+cardiotoxicity%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicology+and+Applied+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">Heart slice culture system reliably demonstrates clinical drug-related cardiotoxicity.</a> Toxicology and Applied Pharmacology. , 406(2020).</li>
<li>Fischer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+functional+and+structural+preservation+of+precision-cut+human+myocardium+under+continuous+electromechanical+stimulation+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Long-term functional and structural preservation of precision-cut human myocardium under continuous electromechanical stimulation in vitro.</a> Nature Communications. 10 (1), 1-12 (2019).</li>
<li>Kang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+organotypic+cultured+cardiac+slices%3A+new+platform+for+high+throughput+preclinical+human+trials%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Human organotypic cultured cardiac slices: new platform for high throughput preclinical human trials.</a> Scientific Reports. 6 (1), 1-13 (2016).</li>
<li>Ou, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Slicing+and+culturing+pig+hearts+under+physiological+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Slicing and culturing pig hearts under physiological conditions.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (157), e60913(2020).</li>
<li>Ou, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiological+biomimetic+culture+system+for+pig+and+human+heart+slices%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+research%22%5BJournal%5D)">Physiological biomimetic culture system for pig and human heart slices.</a> Circulation research. 125 (6), 628-642 (2019).</li>
<li>Watson, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomimetic+electromechanical+stimulation+to+maintain+adult+myocardial+slices+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Biomimetic electromechanical stimulation to maintain adult myocardial slices in vitro.</a> Nature Communications. 10 (1), 1-15 (2019).</li>
<li>Abu-Khousa, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+degree+of+t-system+remodeling+predicts+negative+force-frequency+relationship+and+prolonged+relaxation+time+in+failing+human+myocardium%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Physiology%22%5BJournal%5D)">The degree of t-system remodeling predicts negative force-frequency relationship and prolonged relaxation time in failing human myocardium.</a> Frontiers in Physiology. 11, 182(2020).</li>
<li>Bojkova, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((SARS-CoV-2+infects+and+induces+cytotoxic+effects+in+human+cardiomyocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">SARS-CoV-2 infects and induces cytotoxic effects in human cardiomyocytes.</a> Cardiovascular Research. 116 (14), 2207-2215 (2020).</li>
<li>Esfandyari, D. A. -O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MicroRNA-365+regulates+human+cardiac+action+potential+duration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">MicroRNA-365 regulates human cardiac action potential duration.</a> Nature Communications. 13 (1), 1-15 (2022).</li>
<li>Moretti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Somatic+gene+editing+ameliorates+skeletal+and+cardiac+muscle+failure+in+pig+and+human+models+of+Duchenne+muscular+dystrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Somatic gene editing ameliorates skeletal and cardiac muscle failure in pig and human models of Duchenne muscular dystrophy.</a> Nature Medicine. 26 (2), 207-214 (2020).</li>
<li>Pitoulis, F. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Remodelling+of+adult+cardiac+tissue+subjected+to+physiological+and+pathological+mechanical+load+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Remodelling of adult cardiac tissue subjected to physiological and pathological mechanical load in vitro.</a> Cardiovascular Research. 118 (3), 814-827 (2021).</li>
<li>Curtis, T. M., Scholfield, C. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nifedipine+blocks+Ca2%2B+store+refilling+through+a+pathway+not+involving+L-type+Ca2%2B+channels+in+rabbit+arteriolar+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Nifedipine blocks Ca2+ store refilling through a pathway not involving L-type Ca2+ channels in rabbit arteriolar smooth muscle.</a> The Journal of Physiology. 532 (3), 609-623 (2001).</li>
<li>de Weille, J. R., Schweitz, H., Maes, P., Tartar, A., Lazdunski, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calciseptine%2C+a+peptide+isolated+from+black+mamba+venom%2C+is+a+specific+blocker+of+the+L-type+calcium+channel%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Calciseptine, a peptide isolated from black mamba venom, is a specific blocker of the L-type calcium channel.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 88 (6), 2437-2440 (1991).</li>
<li>Schleifer, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+molecular+modelling+study+of+the+calcium+channel+blockers+nifedipine+and+black+mamba+toxin+FS2%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Computer-Aided+Molecular+Design%22%5BJournal%5D)">Comparative molecular modelling study of the calcium channel blockers nifedipine and black mamba toxin FS2.</a> Journal of Computer-Aided Molecular Design. 11 (5), 491-501 (1997).</li>
<li>Thomas, G., Chung, M., Cohen, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dihydropyridine+%28Bay-K8644%29+that+enhances+calcium+currents+in+guinea+pig+and+calf+myocardial+cells.+A+new+type+of+positive+inotropic+agent%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">A dihydropyridine (Bay-K8644) that enhances calcium currents in guinea pig and calf myocardial cells. A new type of positive inotropic agent.</a> Circulation Research. 56 (1), 87-96 (1985).</li>
<li>Pitoulis, F. G., Watson, S. A., Perbellini, F., Terracciano, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myocardial+slices+come+to+age%3A+an+intermediate+complexity+in+vitro+cardiac+model+for+translational+research%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Myocardial slices come to age: an intermediate complexity in vitro cardiac model for translational research.</a> Cardiovascular Research. 116 (7), 1275-1287 (2020).</li>
<li>Watson, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+viable+adult+ventricular+myocardial+slices+from+large+and+small+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Preparation of viable adult ventricular myocardial slices from large and small mammals.</a> Nature Protocols. 12 (12), 2623-2639 (2017).</li>
</ol>

JH, PS, DM ve KL'nin açıklayacak hiçbir şeyi yoktur. AD ve TS, Myodish yetiştirme sistemini sağlayan InVitroSys GmbH'nin hissedarlarıdır.

Geçmişte, kardiyovasküler araştırmalar kardiyomiyositlerin yetiştirilmesinde büyük ilerlemeler kaydetmiştir. Bununla birlikte, bozulmamış geometriye sahip kardiyomiyositlerin 3D ekimi henüz iyi kurulmamıştır. Miyokard dokusunun ex vivo yetiştirilmesi için uygulanan önceki protokollerle karşılaştırıldığında, burada anlattığımız protokol, dokunun in vivo ortamını daha yakından andırmaktadır. Ayrıca, yükleme öncesi ve sonrası uygulama daha biyomimetik bir ortam sağlar. Kasılma verilerinin ve dokunun kasılm...

Son on yılda, miyokard hücrelerinin in vitro yetiştirilmesi, 2D ve üç boyutlu (3D) tekniklerden, organoidlerin kullanımına ve kardiyak miyositlere farklılaştırılmış pluripotent kök hücrelerin kullanımına kadar büyük ilerlemeler kaydetmiştir 1,2,3. Ex vivo ve primer hücre yetiştiriciliğinin, özellikle genetik çalışmalar ve ilaç geliştirme için büyük bir değere sahip olduğu gösterilmiştir 4,5,6. İnsan dokularının kullanılması, sonuçların translasyonel değerini arttırır. Bununla birlikte, bozulmamış geometriye sahip miyokard dokularının uzun süreli 3D yetiştiriciliği iyi kurulmamıştır. Bozulmamış geometri, in vivo koşulları taklit etmek için önemli bir özelliktir, çünkü uygun kalp fonksiyonu, farklı hücreler arasındaki iletişim ve hücre-matris etkileşimleri ön koşuldur. Miyokard doku yetiştiriciliği, gelişimin çeşitli aşamalarından geçti. Ex vivo miyokard doku yetiştiriciliğinin başarı oranı ve stabilitesi başlangıçta oldukça düşüktü, ancak son yaklaşımlar umut verici sonuçlar verdi 7,8,9,10,11.
Bunlar arasında, Fischer ve ark., insan miyokard dokusunun yaşayabilirliğinin ve kontraktil performansının ex vivo hücre yetiştiriciliğinde7. hafta boyunca korunabileceğini gösteren ilk kişilerdi. Teknikleri, tanımlanmış biyomekanik koşullar ve sürekli elektriksel stimülasyon sağlayan yeni geliştirilen yetiştirme odalarına monte edilen ekilen insan miyokardından kesilen ince doku dilimlerine dayanıyordu. Bu yetiştirme yöntemi, miyokard dokusunun in vivo fonksiyonuna çok benzemektedir ve birkaç bağımsız araştırma grubu2,12,13,14,15 tarafından çoğaltılmıştır. Daha da önemlisi, Fischer ve ark. tarafından kullanılan odalar, gelişmiş kuvvetlerin 4 aya kadar sürekli olarak kaydedilmesini sağladı ve böylece bozulmamış insan miyokardının7 fizyolojik ve farmakolojik araştırması için benzeri görülmemiş fırsatlar yarattı.
Benzer teknikler diğer gruplar tarafından bağımsız olarak geliştirilmiş ve insan, sıçan, domuz ve tavşan miyokard 7,10,11'e uygulanmıştır. Pitoulis ve ark. daha sonra bir büzülme döngüsü sırasında normal kuvvet-uzunluk ilişkisini yeniden üreten, ancak yüksek verimli analiz için daha az uygun olan daha fizyolojik bir yöntem geliştirdiler16. Bu nedenle, biyomimetik yetiştiriciliğin genel yaklaşımı, hayvan deneylerinin azaltılması, iyileştirilmesi ve değiştirilmesi (3R) için bir sonraki adım olarak kabul edilebilir.
Bununla birlikte, bu potansiyelden yararlanmak için standartlaştırılmış prosedürler, yüksek içerik analizleri ve yüksek bir verim seviyesi gerekir. Yaşayan insan miyokardının otomatik dilimlenmesini, ticari olarak temin edilebilen biyomimetik bir yetiştirme sisteminde in vitro bakım ile birleştiren bir teknik sunuyoruz (bakınız Malzeme Tablosu). Önerilen yaklaşımla, tek bir transmural miyokard örneğinden üretilebilecek bireysel dilimlerin sayısı sadece işlem süresi ile sınırlıdır. Yeterli boyut ve kalitede (3 cm x 3 cm) bir örnek genellikle otomatik bir vibratom ile uygun şekilde kesilen 20-40 doku dilimi verir. Bu dilimler sisteme ait yetiştirme odalarına yerleştirilebilir. Odalar, parametreleri modüle edilebilen elektriksel stimülasyona (yani, darbe süresi, polarite, hız ve akım) ve ayrıca odaların içindeki yaylı teller kullanılarak ön ve son yükün ayarlanmasına izin verir. Her dilimin büzülmesi, bir yay teline bağlı küçük bir mıknatısın hareketinden kaydedilir ve yorumlanabilir bir grafik olarak görüntülenir. Veriler her zaman kaydedilebilir ve serbestçe kullanılabilen yazılımlar kullanılarak analiz edilebilir. Sabit taban çizgisi hızının yanı sıra, refrakter dönemlerini, stimülasyon eşiğini, duraklama sonrası potansiyellerini ve kuvvet-frekans ilişkilerini işlevsel olarak değerlendirmek için planlanmış protokoller gerçekleştirilebilir.
Bireysel bir kalpten çoklu miyokard dilimlerinin bu uzun süreli biyomimetik ekimi, hem insan hem de hayvan dokusunda gelecekteki ex vivo araştırmaların yolunu açar ve kardiyovasküler tıpta terapötik ve kardiyotoksik ilaç etkilerinin taranmasını kolaylaştırır. Çeşitli deneysel yaklaşımlara zaten uygulanmıştır 2,12,13,15. Burada, insan dokusunun hazırlanmasının ayrıntılı bir adım adım tanımını veriyoruz ve sık karşılaşılan yetiştirme sorunlarına çözümler sunuyoruz.

<table><tbody><tr><td><güçlü > Kimyasallar< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Agaroz Düşük erime noktası</td><td>Roth</td><td>6351.2</td><td></td></tr><tr><td>Bay-K8644</td><td>Cayman Chemical</td><td>19988</td><td></td></tr><tr><td>BDM (2,3-Bütandion monoksim)</td> <td>Sigma</td><td>B0753-1kg</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2 * H2O</td><td>Merck</td><td>2382.1</td><td></td></tr><tr><td>Kalsiseptin</td><td>Alomone Labs</td><td>SPC-500</td><td></td></tr><tr><td>Glikoz*H2O</td><td>AppliChem</td><td>A3730.0500</td><td></td></tr><tr><td>H2O</td><td>BBraun</td><td>3703452</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>AppliChem</td><td>A1069.0500</td><td></td></tr><tr><td>Histoakril</td><td>BBraun</td><td>1050052</td><td></td></tr><tr><td>İzopropanol %100</td> <td>SAV LP GmbH</td><td>UN1219</td><td></td></tr><tr><td>ITS-X takviyesi</td><td>Gibco</td><td>5150056</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Merck</td><td>1.04933.0500</td><td></td></tr><tr><td>Orta 199</td><td>Gibco</td><td>31150-022</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2*6H2O</td><td>AppliChem</td><td>A1036.0500</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma</td><td>S5886-1KG</td><td></td></tr><tr><td>NaH2PO4*H2O</td><td>Merck</td><td>1.06346.0500</td><td></td></tr><tr><td>Nifedipin</td><td>Sigma</td><td>N7634-1G</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin / streptomisin x100</td><td>Sigma</td><td>P0781-100ML</td><td></td></tr> <tr><td>ve beta; -Merkaptoetanol</td><td>AppliChem</td><td>A1108.0100</td><td></td></tr> <tr><td>< güçlü > Laboratuvar ekipmanları< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Akış kabini</td><td>Thermo Scientific</td><td>KS15</td><td></td></tr><tr><td>Frigomix su pompası ve soğutma + BBraun Thermomix BM</td><td>BBraun</td><td></td><td>Şirket içi soğutma ve ısıtma çözümü kombinasyonu.</td></tr><tr><td>Kuluçka Makinesi</td><td>Bağlayıcı</td><td>CB240</td><td></td></tr><tr><td>MyoDish kültür sistemi</td><td>InVitroSys GmbH</td><td>MyoDish 1</td><td>Myodish kültür sistemi</td></tr><tr><td>Vibratom</td><td>Leica</td><td>VT1200s</td><td></td></tr><tr><td>Su banyosu 37 derece</td><td>Haake</td><td>SWB25</td><td></td></tr><tr><td>Su banyosu 80 derece</td><td>Daglef Patz KG</td><td>7070</td><td></td></tr><tr><td><güçlü>Malzemeler</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>100 mL plastik tek kullanımlık beher</td><td>Sarstedt</td><td>75.562.105</td><td></td></tr><tr><td>Filtrasyon ünitesi, Steritop Hızlı Açılan</td><td>Millipore</td><td>S2GPT05RE</td><td></td></tr><tr><td>İğneler 0,9 x 70 mm 20G</td><td>BBraun</td><td>4665791</td><td></td></tr><tr><td>Plastik üçgenler</td><td></td><td></td><td>Şirket içi yapım</td></tr><tr><td>Razor Derby premium</td><td>Derby Tokai</td><td>B072HJCFK6</td><td></td></tr><tr><td>Razor Gillette Gümüş Mavi</td><td>Gillette</td><td>7393560010170</td><td></td></tr><tr><td>Neşter Tek Kullanımlık</td><td>Tüy</td><td>02.001.30.020</td><td></td></tr><tr><td>Şırınga 10 mL Luer ucu BD Discardit</td><td>BBraun</td><td>309110</td><td></td></tr><tr><td>Doku Kültürü Kabı 10 cm</td><td>Falcon</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>Doku Kültür Kabı 3,5 cm</td><td>Falcon</td><td>353001</td><td></td></tr><tr><td>Tüpleri 50 mL</td><td>Falcon</td><td>352070</td><td></td></tr></tbody></table>

uzun süreli yetiştirme için İnsan miyokard dokusunun hazırlanması

Preparation of Human Myocardial Tissue for Long-Term Cultivation

Kardiyomiyosit yetiştiriciliği, iki boyutlu (2D) hücre yetiştiriciliğinden iPSC türevi organoidlere kadar çok sayıda gelişme göstermiştir. 2019 yılında, miyokard kasılmasının in vivo durumuna yaklaşırken, insan kalp örneklerinden elde edilen miyokard dilimlerini yetiştirmenin ex vivo bir yolu gösterilmiştir. Bu örnekler çoğunlukla kalp transplantasyonlarından veya sol ventrikül destek cihazı yerleşimlerinden kaynaklanmaktadır. Bir vibratom ve özel olarak geliştirilmiş bir yetiştirme sistemi kullanılarak, sabit ve yaylı bir tel arasına 300 μm kalınlığında dilimler yerleştirilir ve birkaç hafta boyunca istikrarlı ve tekrarlanabilir bir ekime izin verir. Yetiştirme sırasında, dilimler bireysel ayarlara göre sürekli olarak uyarılır. Kasılmalar gerçek zamanlı olarak görüntülenebilir ve kaydedilebilir ve farmakolojik ajanlar kolayca uygulanabilir. Kullanıcı tanımlı stimülasyon protokolleri, duraklama sonrası potansiyel, stimülasyon eşiği, kuvvet-frekans ilişkisi ve refrakter dönem gibi hayati kasılma parametrelerini değerlendirmek için planlanabilir ve gerçekleştirilebilir. Ayrıca, sistem daha fizyolojik bir yetiştirme için değişken bir ön ve son yük ayarı sağlar.
Burada, ticari bir biyomimetik yetiştirme çözeltisi kullanarak, insan sol ventrikül miyokard dilimlerinin başarılı bir şekilde uzun vadeli bir şekilde nasıl yetiştirileceğine dair adım adım bir kılavuz sunuyoruz.

Miyokard dilimlerinin daralması, yetiştirme odasının karşılık gelen konektörüne yerleştirilmesinden sonra bilgisayar ekranında görüntülendi (Şekil 3). İnsan miyokard dilimlerinin kasılması, stimülasyondan hemen sonra başladı. Dilimler 5-10 dakika boyunca hiperkontrakte edildi. Bu, hasarlı doku fraksiyonlarının tonik kontraktürünün neden olduğu diyastolik kuvvetlerin artması olarak görülebiliyordu. Bu işlem 1-1.5 saat içinde değişen derecelere geri döndürüldü. Stabilize edildikten sonra, insa...

İnsan ventriküler miyokard dokusunun ex vivo ekimi için bir protokol sunuyoruz. Kasılma kuvveti ve kinetiğin ayrıntılı analizinin yanı sıra, in vivo fizyolojik ortamı daha yakından taklit etmek için ön ve son yükün uygulanmasına izin verir.

Uzun Süreli Yetiştirme için İnsan Miyokard Dokusunun Hazırlanması

Cardiomyocyte cultivation has seen a vast number of developments, ranging from two-dimensional (2D) cell cultivation to iPSC derived organoids. In 2019, ...

Bu protokolü kullanarak, insan sol ventrikül dokusu dilimleri biyomimetik bir odada ex vivo olarak yetiştirilebilir. Ön ve son yüklerin uygulanması, fizyolojik ortamın benzerliğini arttırır. Bu teknik, doku kasılmasının sürekli olarak kaydedilmesini sağlar.Kullanıcı tanımlı stimülasyon protokolleri, duraklama sonrası potansiyel, stimülasyon eşiği, kuvvet-frekans ilişkisi ve refrakter dönem gibi hayati kasılma parametrelerinin değerlendirilmesine izin verir. Bu kurulumu kullanarak miyokard dilimlerinin uzun süreli ekimi, gelecekteki ex vivo araştırmaların yolunu açacak ve kardiyovasküler tıpta terapötik ve kardiyotoksik ilaç etkileri için bu taramayı kolaylaştıracaktır. Başlamak için, yetiştirme odalarını ve grafit elektrotlarını% 10'luk bir izopropanol çözeltisinin bir litresine batırın ve gece boyunca çalkalayın.Ertesi gün, odaları 3 dakika boyunca% 100 izopropanol çözeltisine aktarın, ardından odaların ve grafit elektrotların laminer bir akış başlığı altında hava ile kurumasına izin verin. Rocker üzerindeki mevcut konumlara göre her odaya bir devre kartı takın. Üreticinin talimatlarına göre devre kartına iki grafit elektrot yerleştirin, ardından enfeksiyonu önlemek için odaya 35

preparation-of-human-myocardial-tissue-for-long-term-cultivation

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Yetişkin, kardiyak miyositler hayvan kalpleri izole edilebilir ve birkaç gün kültüre temel hücrelerdir. Bu kültür süre içinde adenoviral gen transferi, genetik olarak kodlanmış biyosensörler (GEBs) ya da floresan füzyon proteinleri ifade etmek için kullanılır. Her iki yaklaşım konfokal mikroskobi ile hücresel soruşturma izin verir.

Konfokal Görüntüleme İzolasyon ve Yetişkin kardiyak miyositler Genetik Manipülasyon

Biz yetişkin fare kardiyomiyositlerin izolasyonu için güvenilir bir yöntem açıklanmaktadır. Bu protokol, genetik olarak tadil edilmiş farelerin çeşitli fonksiyonel yetişkin kardiyomiyositlerde kültürü için tutarlı bir sonuç elde edilir.

İzolasyon ve Kültür Yetişkin Fare Hücre Sinyal için kardiyomiyositlerin ve<em&gt; In vitro</em&gt; Kalp hipertrofisi

Bu el yazması, yüzey işaretleyici ekspresyonu ve hücre sıralaması kullanılarak tanımlanmış tasarlanmış kardiyak dokuların oluşturulmasını açıklar. Tanımlanan dokular daha sonra insan kalbinin işlevsel, ancak kontrollü bir model sistemini sağlamak için kardiyak hücre tedavisi mekanizmalarını araştırmak için çok dokulu bir biyoreaktörde kullanılabilir.

Tanımlı İnsan Engineered Kalp Dokuların inşaatı Kardiyak Hücre Tedavisinin Mekanizmaları Eğitim için

Bir fare kalpten farklı kardiyak hücre tiplerinin izolasyonu için çeşitli protokoller geliştirilmiş ve açıklanmıştır. Burada, yüksek kaliteli ana kardiyak hücre tiplerinin (kardiyomiyosit, endotel hücreleri ve fibroblastların) tek bir preparasyondan izole edilmesini sağlayan deneysel maliyetleri düşüren optimize edilmiş bir protokol tarif edilmiştir.

Bir Yetişkin Sıçan Kalpten Yüksek Kalitede Kardiyomiyosit, Endotel Hücresi ve Fibroblastların Eşzamanlı İzolasyonu

Bu iletişim kuralı tam decellularization insan Miyokardiyum, hücre dışı matriks bileşenlerinin koruma sırasında açıklar. Microparticles ve cytoprotective kendi kendine montaj hidrojel üretiminde hücre dışı matriks sonuçlarının daha fazla alay.

İnsan kalp dokusu hücre dışı matriks hidrojel Vitro ve In Vivo uygulamaları için kendi kendine montaj doğru işlenmesi

Bu protokol, 6 gün boyunca fizyolojik koşullar altında kalp dokusunun nasıl dilimlenir ve kültürlenir. Bu kültür sistemi yeni kalp yetmezliği terapötik etkinliğini test etmek için bir platform olarak yanı sıra bir 3D kalp modelinde akut kardiyotoksisite güvenilir test olarak kullanılabilir.

Fizyolojik Koşullar altında Domuz Kalpleri Dilimleme ve Culturing

Sunulan vibratome kesilmiş miyokardiyal dilimlerden insan ve hayvan ventriküler kardiyomiyosit izolasyon için bir protokoldür. Kalsiyuma dayanıklı hücrelerin yüksek verimi (200 hücre/mg'a kadar) az miktarda dokudan (&lt;50 mg) elde edilebilir. Protokol soğuk iskemiye maruz kalan miyokardiyum için 36 saate kadar geçerlidir.

Vibratome-Cut Miyokardiyal Dilimlerden İnsan Ventriküler Kardiyomiyositlerin İzolasyon

Miyositlerin ve miyosit olmayanların tek bir yetişkin fare kalbinin hem atria hem de ventriküllerinden eşzamanlı izolasyonu için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu protokol, yüksek oranda uygulanabilir kardiyak miyositlerin ve miyosit olmayanların tutarlı verimini sağlar ve fenotipleme ve in vitro analiz için en uygun hücreye özgü kültür koşullarını detaylandırmaz.

Yetişkin Fare Kalbinden Atriyal Miyositler, Ventrikül Miyositleri ve Miyosit Olmayanların Eşzamanlı İzolasyonu ve Kültürü

Farklı hipotermi derecelerinin miyokard koruması üzerindeki belirgin etkileri ayrıntılı olarak değerlendirilmemiştir. Bu çalışmanın amacı, insan kardiyomiyosit tabanlı bir modelde farklı hipotermi tedavilerinin ardından hücre ölüm seviyelerini ölçmek ve gelecekteki derinlemesine moleküler araştırmaların temelini atmaktı.

İnsan Kardiyak Miyosit Modelinde Hipotermi-Önkoşullama Sonrası Miyokard Korumasının İn vitro Değerlendirmesi

Burada, miyokard enfarktüsü sonrası (MI) fare kalbinden yüksek canlılığa sahip yeterli miktarda tek kardiyomiyosit olmayan izole etmek için bir protokol açıklanmaktadır. Bu, sonraki tek hücreli dizileme, akış sitometri analizi ve birincil hücre kültürü için kullanılabilir.

Miyokard Enfarktüsü Sonrası Yetişkin Fare Kalbinden Tek Hücreli RNA Dizilimi için Kardiyomiyosit Olmayan Hücre Süspansiyonunun Hazırlanması

Kök hücre kaynaklı kardiyomiyositler kullanılarak biyomühendislik yapılan üç boyutlu kalp dokuları, doğal kardiyak nişin temel yönlerini özetlerken, sağlıklı ve hastalıklı insan miyokardını in vitro incelemek için umut verici modeller olarak ortaya çıkmıştır. Bu makale, insan kaynaklı pluripotent kök hücre kaynaklı kardiyomiyositlerden üretilen yüksek içerikli tasarlanmış kardiyak dokuların üretilmesi ve analiz edilmesi için bir protokolü açıklamaktadır.

Tasarlanmış Kardiyak Dokuların Veri Toplamasını ve Model Verimini İyileştirmek için Bir Biyoreaktör Tasarlama

Keşfedin, insan miyokard dokusunun uzun süreli yetiştirilmesi için biyomimetik odada ekz vivo kültür protokolü. Bu yöntem, kontraktif kuvvet ve kinetiği değerlendirerek kardiyovasküler ilaç tarama çalışmalarına olanak tanır.

Uzun Süreli Yetiştirme için İnsan Miyokard Dokusunun Hazırlanması

Daha fazla video keşfet