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Artigo de método

Co-fermentação de Marsdenia tenacissima com Ganoderma lucidum e efeito anticâncer de pulmão dos produtos de fermentação

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DOI:

10.3791/64687

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16 de dezembro de 2022

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Neste artigo

Resumo

Aqui, descrevemos um protocolo para estabelecer um sistema de co-fermentação sistemático e abrangente para produzir produtos de biotransformação ricos em saponinas pungentes usando Marsdenia tenacissima (Roxb.) Wight et Arn. (MT) como meio de fermentação para Ganoderma lucidum. Isso servirá como referência metodológica para o desenvolvimento de outras drogas étnicas.

Resumo

Marsdenia tenacissima (Roxb.) Wight et Arn. (MT), como um medicamento fitoterápico tradicional chinês e Dai, tem propriedades anti-inflamatórias, antibacterianas e antitumorais. No entanto, a maioria de suas principais substâncias ativas são agliconas, como tenacigenina A e tenacigenina B. Como a biodisponibilidade do MT é baixa e seus componentes ativos medicinais são difíceis de sintetizar, ele é estudado principalmente por biotransformação. Este estudo tem como objetivo produzir produtos de biotransformação ricos em saponinas pungentes usando MT como meio de fermentação para Ganoderma lucidum (G. lucidum).

Através da triagem preliminar de três fungos medicinais, verificou-se que G. lucidum e Ophiocordyceps sinensis (O. sinensis) geralmente podem crescer no meio para MT; Assim, a eficácia da fermentação dos dois tipos de fungos foi rastreada usando um modelo de câncer de pulmão em camundongos. Finalmente, a co-fermentação de G. lucidum e MT foi selecionada para investigação posterior. A análise metabolômica não-alvo foi realizada nos produtos de MT com co-fermentação de G. lucidum . Identificamos 12 saponinas específicas de MT a partir dos produtos de fermentação e obtivemos um composto monomérico, tenacigenina A, a partir de produtos de fermentação.

A maior parte da tenacigenina apresentou tendência ascendente significativa, através dos níveis de tenacigenina A e tenacigenina B. Os resultados mostraram que a eficácia do MT melhorou após a fermentação por G. lucidum. Além disso, a biotransformação de glicosídeos esteróides C21 em MT foi a reação central neste processo de fermentação. Em resumo, este estudo estabeleceu um sistema sistemático e abrangente de co-fermentação e método de avaliação farmacodinâmica para MT, que não apenas melhorou a utilização total de substâncias ativas eficazes em MT, mas também forneceu uma referência metodológica para o desenvolvimento de outras drogas étnicas.

Introdução

O câncer de pulmão pertence à categoria de "carbúnculo de pulmão" na medicina tradicional chinesa. A patogênese do carbúnculo pulmonar é uma fraqueza do "Qi" saudável dos pacientes, desequilíbrio de Yin e Yang, toxinas e estagnação no pulmão, levando à disfunção pulmonar, bloqueio sanguíneo e perda de líquido no pulmão. Assim, a estase sanguínea de longo prazo e as toxinas do escarro nos pulmões formam uma massa pulmonar1. Portanto, fortalecer o Qi e eliminar fatores patogênicos é o princípio básico do tratamento do câncer de pulmão. Os métodos de nutrir o Yin para equilibrar o Yin e o Yang, limpar o calor, des....

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Protocolo

Este estudo foi conduzido seguindo as recomendações do Centro de Animais Experimentais da Universidade de Minzu (No. ECMUC2019008AA). O protocolo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Animais Experimentais da Universidade de Minzu. MT foi coletado em Kunming, província de Yunnan.

1. Preparação do estudo

  1. Extrair MT com água quente (100 °C; MT/água = 1/10, p/v) durante 30 min e recolher o resíduo de extracção MT como material de ensaio.
  2. Manter a linha celular de câncer de pulmão de camundongo LLC no meio Eagle modificado de Dulbecco (DMEM) suplementado com 10% de soro fet....

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Resultados

Resultados preliminares da triagem de cepas
Para explorar fungos capazes de co-fermentar com MT, selecionamos três fungos: G. lucidum, I. obliquus e O. sinensis. Primeiramente, as cepas foram ativadas: G. lucidum, I. obliquus e O. sinensis foram inoculadas no meio BDA conforme mostrado na Figura 1A-C; A Figura 1D-F

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Discussão

Após experimentos de triagem de cepas, descobrimos que nem todos os fungos medicinais podem sobreviver normalmente em materiais de ervas. Sem qualquer meio adicional, a sobrevivência dos fungos medicinais depende da degradação dos componentes em materiais medicinais por meio de suas próprias enzimas para sintetizar as fontes de carbono e nitrogênio necessárias. Pode-se inferir que I. obliquus pode não conter enzimas capazes de degradar saponinas de MT. Para G. lucidum e.......

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Divulgações

Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes conhecidos ou relacionamentos pessoais que possam ter influenciado o trabalho relatado neste artigo.

Agradecimentos

Este trabalho foi apoiado por doações da Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (81973977). As amostras de MT foram identificadas pelo professor Tongxiang-Liu e mantidas na Escola de Farmácia da Universidade Minzu da China.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
AcetonitrilaTonguang Fine Chemicals Company, Pequim, China20200923
AgarSinopharm Chemical ReagentCo., Ltd., EUANO.20080107
AutoclaveBinJiang Medical Co., Ltd., Jiangyin, ChinaLS-50LD
incubadora de agitação constanteZhicheng Inc. Todos os direitos reservados., Xangai, ChinaZWY-100D
Ganoderma lucidumBeNa Culture Collection, Pequim, China31732
Inonotus obliquusBeNa Culture Collection, Pequim, China117822
LLC Célula de câncer de pulmão de camundongoInfraestrutura Nacional de Recursos de Linha Celular, Pequim, ChinaPUMC000673
Camundongos machos C57BL / 6JVital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd., Beiijng, ChinaNo.110011210107024684
MetanolTonguang Fine Chemicals Company, Pequim, China20210723
Ophiocordyceps sinensis< / em>BeNa Culture Collection, Pequim, China118371
Poly tetra fluoroetilenoJinteng Experiment Equipment Co., Ltd., Tianjing, ChinaNo.997
QTRAP 5500 LC/MSAB Sciex Pte. Ltd., EUACV20231711
Evaporador RotativoBUCHI Co., Ltd., Xangai, ChinaR-300
Zhiyu Medical Instrument Co., Ltd., Jinagsu, ChinaV500111
Bancada ultra-limpaBOXUN Medica Bioological Instrument Co., Ltd., Xangai, ChinaSW-CJ-LFD
Seringa

Referências

  1. Jansen, B. J., Liang, H., Ye, J. International Conference on Cognitive Based Information Processing and Applications (CIPA 2021). 85, Springer Nature. (2021).
  2. WANG, J., et al. Literature-based research on common syndromes of cough varian....

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