采集与测定手术伤口中的伤害性及炎性介质

摘要

一种在特定时间点采集和测定手术伤口生化介质的技术。

摘要

我们介绍一种能够采集并测定手术切口部位炎症和伤害性生化介质的方法。通过采集特定部位的生化标志物，我们可以评估手术切口与血清水平之间的关系；确定介质释放、疼痛程度及镇痛药消耗之间的关联；并评价全身性及外周药物给药对手术切口生化环境的影响。

该方法已应用于接受择期剖宫产并实施脊髓麻醉的健康女性。在剖宫产后1、6、24和48小时，测定伤口渗出液和血清中的介质水平，并结合疼痛评分及镇痛药物消耗量进行分析。检测到的生化介质包括IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-13、IL-17、TNFα、INFγ、G-CSF、GM-CSF、MCP-1和MIP-1β、神经生长因子（NGF）、前列腺素E2（PG-E2）以及P物质。我们未发现伤口与血清细胞因子浓度或其时间释放曲线之间存在显著相关性（J Pain. 2008 Jul 9(7):650-7）。本文描述并验证了在特定时间点采集和检测手术伤口中伤害性刺激及炎症介质的可行性。血清与伤口局部水平之间缺乏显著相关性，表明在研究手术伤口及局部病理状态时，确定局部特异性释放具有重要意义。

方案

伤害性与炎症生化介质采集

1. 手术团队在关闭切口前，将 On-Q® PainBuster® 疼痛缓解系统置入皮下层。该系统以 2 ml/h 的速率持续向切口部位皮下输注生理盐水（或局部麻醉药）。
2. 该系统配备三通旋塞阀，以便在指定时间点抽吸伤口渗出液。
3. 根据方案规定的时间点（例如剖宫产术后 1、6、24 和 48 小时），将 1 ml 伤口渗出液抽吸至含有 30 μl 蛋白酶抑制剂的聚乙烯杯中。
4. 在同一时间点，采集 10 ml 血液至含有锂肝素的绿色头盖采血管中，随后向血液样本中加入 300 μl 蛋白酶抑制剂。
5. 样本采集后 1 小时内置于冰上，并在 3000 rpm 条件下离心 10 分钟。
6. 分离血清和伤口上清液，转移至标准微量离心管中，于 -20°C 保存。

检测分析

1. 所有样本采集完成后，将同时进行解冻和分析。
2. 随后使用17重联珠阵列免疫测定板检测细胞因子。多重免疫测定技术可在低至50 μl的体液样本中同时检测多达100种分析物，其结果与ELISA方法获得的结果具有可比性。该检测板可测定白细胞介素1ß（IL-1ß）、白细胞介素2（IL-2）、白细胞介素4（IL-4）、白细胞介素5（IL-5）、白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素7（IL-7）、白细胞介素8（IL-8）、白细胞介素10（IL-10）、白细胞介素12（IL....

讨论

在缝合伤口前，应将On-Q® PainBuster®镇痛系统置入皮下层，并贯穿整个切口。这有助于在规定的时间间隔通过三通旋塞进行抽吸。On-Q®系统以2 ml/h的速度持续向伤口皮下输注生理盐水，防止导管堵塞，提高系统获取渗出液样本的可靠性。如果渗出液抽吸困难（约5%的病例），可考虑调整受试者体位（例如让患者坐起或平卧）、在切口上方轻柔按压、使用0.5–1 ml生理盐水冲洗，或回撤导管1–2 cm。

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材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
On-Q® PainBuster® 术后镇痛系统	I-Flow, Lake Forest, CA
完全蛋白酶抑制剂	Roche Group
17重磁珠免疫检测试剂盒 Bio-PlexTM 板	Bio-Rad
Bio-Plex 胺偶联试剂盒	Bio-Rad
NGF 抗体 DY256	R&D Systems
前列腺素 E2 和 P 物质 ELISA 试剂盒	Assay Designs