Name: Maus Brustepithelzellen Form Mammospheres Während lactogenic Differenzierung (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-10-06T16:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 51 s
Description: Lernen Sie die Induktion lactogener Differenzierung in HC11-Mausbrustepithelzellen durch Mammosphärenbildung. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung hormoneller Regulationsmechanismen in vitro.

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Funds from vom Kongress Regie Medical Research Fund gewähren (DAMD17-01 bis 0264) zu ML Cutler und United States Military Cancer Institute zu ML Cutler unterstützte die Arbeit.

<ol><li> Die HC11 Zellen wurden bis zur Konfluenz für 6 Tage in RPMI 1640 Medium mit 10% fötalem Kälberserum, 5μg/ml Insulin, 10 mM HEPES, 10ng/ml epidermal growth factor (EGF), um Kompetenz zu etablieren ergänzt gewachsen. </li><li> Die Zellen wurden mit PBS gewaschen und gepflegt in Nährmedien ohne EGF für 24 Stunden. </li><li> Zur Induktion lactogenic Differenzierung wurden die Zellen bei der Differenzierung Medien, dh RPMI mit Dexamethason (10 -6 M), Insulin (5 ug / ml) und Prolaktin (5 ug / ml) genannt DIP inkubiert. </li><li> Bei den angegebenen Zeiten post-DIP Zusätzlich wurden mammospheres fotografiert und aufgelistet durch Phasenkontrast-Mikroskopie mit einer Olympus IX71-Mikroskop mit Digitalkamera. </li></ol> Repräsentative Ergebnisse: Geringe Leistungsaufnahme Vergrößerung der normalen Brustepithelzellen Zellmonoschichten und mehrere mammospheres sowie hohe Leistung Vergrößerung eines einzelnen mammosphere sind in Abbildung 1 gezeigt. <img src="/files/ftp_upload/1265/1265fig1.jpg" alt="" /> Abbildung 1. Mammospheres. (A) Normal Brustepithelzellen Zellmonoschichten sollte als eine flache Schicht von konfluenten Zellen angezeigt werden. (B) Nach 3-5 Tagen der DIP Stimulation mehrerer mammospheres erscheinen. Foto genommen 5 Tage nach der DIP hinaus. (C) Höhere Vergrößerung eines einzelnen Feld mit mammospheres bei 5 Tage nach der DIP hinaus.

<ol><li>Blatchford, D. R., Hendry, K. A., Turner, M. D., Burgoyne, R. D., Wilde, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vectorial+secretion+by+constitutive+and+regulated+secretory+pathways+in+mammary+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Epithelial+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Vectorial secretion by constitutive and regulated secretory pathways in mammary epithelial cells.</a> Epithelial Cell Biol. 4, 8-16 (1995).</li>
<li>Wang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glucocorticoid+induced+expression+of+connective+tissue+growth+factor+contributes+to+lactogenic+differentiation+of+mouse+mammary+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Glucocorticoid induced expression of connective tissue growth factor contributes to lactogenic differentiation of mouse mammary epithelial cells.</a> J Cell Physiol. 214, 38-46 (2008).</li>
</ol>

Um für diese Technik erfolgreich zu sein und von bester Qualität, die Epithelzellen sind bei Konfluenz gehalten werden, bevor die mit lactogenic Hormone induziert. Es kann Situationen geben, wo es zahlreiche mammospheres, die die Quantifizierung erschwert werden. So quantitative Zwecke ist es am besten, die mammospheres zu einem Zeitpunkt fotografieren, wenn die Zahl der mammospheres kann gezählt werden. Zwar gibt es verschiedene molekulare Marker verwendet werden, um den Grad der Differenzi...

<table><tbody><tr><td>RPMI</td><td>Invitrogen</td><td>21870076</td><td></td></tr><tr><td>Fötales Rinderserum</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S11550</td><td></td></tr><tr><td>L-Glutamin</td><td>GIBCO, von Life Technologies</td><td>25030</td><td></td></tr><tr><td>PenStrep</td><td>GIBCO, von Life Technologies</td><td>15140</td><td></td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Quality Biological, Inc.</td><td>118089060</td><td></td></tr><tr><td>EGF</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E9644</td><td></td></tr><tr><td>Insulin</td><td>GIBCO, von Life Technologies</td><td>12585-014</td><td></td></tr><tr><td>Dexamethason</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D1756</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop</td><td>Olympus Corporation</td><td>IX71</td><td></td></tr><tr><td>Digitalkamera</td><td>QImaging</td><td>Retiga 2000RV Fast 1394</td><td></td></tr></tbody></table>

maus brustepithelzellen form mammospheres während lactogenic differenzierung

Mouse Mammary Epithelial Cells form Mammospheres During Lactogenic Differentiation

Eine phänotypische Maßnahme häufig verwendet, um den Grad der Differenzierung in lactogenic Maus Brustepithelzellen Zellkulturen zu bestimmen, ist die Bildung von kuppelförmigen Zellstrukturen genannt mammospheres<sup&gt; 1</sup&gt;. Die HC11-Zelllinie wurde als Modellsystem für die Untersuchung der Regulation der Brustdrüse lactogenic Differenzierung beide berufstätig<em&gt; In-vitro-</em&gt; Und<em&gt; In vivo</em<sup&gt; 2</sup&gt;. Die HC11 Zellen differenzieren und zu synthetisieren Milchproteine ​​in Reaktion auf die Behandlung mit lactogenic Hormone. Nach dem Wachstum der HC11 Maus Brustepithelzellen zur Konfluenz wurde lactogenic Differenzierung durch die Zugabe einer Kombination von lactogenic Hormone einschließlich Dexamethason, Insulin und Prolaktin induziert, die so genannte DIP. Die HC11 Zellen induziert zu unterscheiden waren zeitweise bis zu 120 Stunden nach der Induktion der Differenzierung und die Anzahl der mammospheres, dass in jeder Kultur erschienen war aufgezählt fotografiert. Die Größe der einzelnen mammospheres korreliert mit dem Grad der Differenzierung und das ist in den Bildern der differenzierenden Zellen dargestellt.

HC11 lactogenic Differenzierung kann durch die Bildung von Kuppelbauten genannt mammospheres charakterisiert werden. Die Strukturen können durch Phasenkontrast-Mikroskopie aufgezählt werden, um bei der Quantifizierung lactogenic Differenzierung zu unterstützen.

Maus Brustepithelzellen Form Mammospheres Während lactogenic Differenzierung

Ein phänotypisches Maß, das häufig verwendet wird, um den Grad der laktogenen Differenzierung in Kulturen von Maus-Mamma-Epithelzellen zu bestimmen, ist die Bildung von ...

Hallo, ich bin Bethany Morrison aus dem Labor von Dr. Mary Lou Cutler an der Abteilung für Pathologie der Uniformed Services University of the Health Sciences. Heute zeigen wir Ihnen ein Verfahren zur Entwicklung von Mammosphären aus HC11-Maus-Mammapithelzellen. In unserem Labor verwenden wir dieses Verfahren, um die laktogene Differenzierung zu untersuchen.Beginnen wir mit dem Protokoll. HC-11-Zellen werden sechs Tage lang bis zur Konfluenz in RPMI-1640-Medium kultiviert, das mit 10 % Fetalrinderserum, 5 Mikrogramm pro Milliliter Insulin, 10 Mikromolar Heiss und 10 Nanogramm pro Milliliter epidermalem Wachstumsfaktor (EGF) ergänzt ist, um die Kompetenz zu etablieren.Diese Zellen wurden umfassend in den Laboren von Nancy Hines und Bernard Groner verwendet, um die Regulation der genischen Differenzierung im Gewebekulturhauben zu untersuchen. Die Zellen werden anschließend mit PBS gewaschen und 24 Stunden lang in Wachstumsmedium ohne EGF kultiviert. Nach dieser Inkubation werden die Zellen in Differenzierungsmedium inkubiert, das aus RPMI ergänzt mit Dexamethason, Insulin und Prolaktin besteht, um nach der Inkubation eine laktoide Differenzierung zu induzieren.In den Differenzierungs

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

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Differenzierung von Mausbrustepithel-HC11- und EpH4-Zellen

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Der Mammosphärentest zeigt api5-induzierte Stammbildung in nicht-tumorigenen Brustepithelzelllinien

Lernen Sie die Induktion lactogener Differenzierung in HC11-Mausbrustepithelzellen durch Mammosphärenbildung. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung hormoneller Regulationsmechanismen in vitro.

Maus Brustepithelzellen Form Mammospheres Während lactogenic Differenzierung

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