Tendon ex vivo Mekanik Yükleniyor

Published 5/28/2007
0 Comments
  CITE THIS  SHARE 
Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





By clicking "Submit", you agree to our policies.

 

Summary

In vitro sistemde aynı anda dört tendon kültür yüklemek için yeni bir tarif edilir.

Cite this Article

Copy Citation

Asundi, K., Rempel, D. Ex vivo Mechanical Loading of Tendon. J. Vis. Exp. (4), e209, doi:10.3791/209 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Aşırı kullanıma bağlı olarak (örneğin, bilek tendinit, epicondyltis) tendon yaralanmaları, spor aktiviteleri ve işyerinde yaygındır. En çok tekrarlanan, yüksek kuvvet el faaliyetleri ile ilişkilidir. Döngüsel yükleme nedeniyle hücresel ve yapısal hasar mekanizmaları iyi bilinmemektedir. Bu videonun amacı, doku kültürü aynı anda dört tendonların yükleyebilirsiniz yeni bir sistem sunmak. Video steril doku hasat yöntemleri ve tendonları daha sonra medya içine dalmış ve 37 muhafaza sıkma sistemi ° C üzerine nasıl yüklenir Bir kelepçe, diğeri lineer aktüatör ile hareket ise sabittir. Tendon çekme kuvveti mobil kelepçe ile seri bir yük hücresi ile izlenir. Aktüatörler LabView program ile kontrol edilir. Arka arkaya dört tendon yükleme, tekrarlama oranı, yükleme hızı ve süresi farklı desenleri ile yüklenebilir. Yükleme birkaç dakika için 48 saat devam edebilir. Yükleme sonunda, tendonların kaldırılır ve orta maddenin biyokimyasal analizler için ayıklanır. Bu sistem, gen ekspresyonu ve tendon yapısal değişiklikler desenler yükleme etkileri soruşturma için izin verir. Sonuçta, aşırı kullanıma bağlı yaralanma mekanizmaları, bulguları ile tedavisi ve önlenmesi için uygulanan çalışmalar yapılabilir.

Protocol

  1. Ek medya CO 2-bağımsız medya fetal sığır serumu, L-glutamin, antibiyotikler ve askorbik asit ile
  2. Kısım 40 ml, 50 ml santrifüj tüpleri içine (her tendonu 1)
  3. Kısım 10 ml, 15 ml santrifüj tüpleri içine (her tendonu 1)
  4. ,, Cerrahi aletler, otoklav yaprak, cımbız ve tork anahtarı otoklavda sterilize
  5. Bir gecede% 70 etanol iliklerine kelepçeler ve kuvvet mikrometre ipuçları sterilize
  6. Tavşan arka pençeleri Hasat tendonları. Tavşan en fazla 2 saat önce ötenazi olması gerekirdi.
  7. 15 ml santrifüj tüpüne koyun tendonları medya ile dolu
  8. Steril bir alan oluşturulması için steril bir otoklav sac Lay
  9. Tendon kesit alanı ölçün
    1. Mikrometre yerleştirin mikrometre ipuçları, düzgün hizalamak
    2. Yol Tutuş tendon biter
    3. Oluk ince tendon bölümü Fit
    4. Asistan yer 50g ağırlığa sahip
    5. 30 saniye bekleyin, kalınlığı okumak (CSA = kalınlığı x 1.3)
  10. 15 ml santrifüj tüpüne koyun tendon geri
  11. Yüklenecek her tendon tekrarlayın
  12. Tabanından sökünüz
  13. 3mm 5mm parça steril gazlı bez ile her tendon için 40mm şeritler ve bir iki 15mm Kes
  14. Distal kelepçe oluklar arasındaki her sıkıca şerit yer ve Rulo
  15. Kelepçe, distal proksimal kelepçe kelepçe ve tendon fibrokartilaj bölgesinde tendonun distal ucu santrifüj tüpüne tendon ve yeri çıkarın
  16. Yeri tendonun distal ucu üstünde 3x5 gazlı bez parçası, ve kelepçe güvenli
  17. Güvenli proksimal kelepçe, tendon sağlamak kelepçeler sıkılır zaman gerilim altında olmadığını kelepçeler arasında ve yeterince bolluk ile uyumlu kalır. 1N-m kelepçeler sıkın.
  18. Yeri 50ml santrifüj tüpüne temel medya
  19. Tabanda Yeri aktüatör
  20. Yüklenecek her tendon tekrarlayın
  21. Su banyosu üzerinde Yeri üssü
  22. Yükleme Protokolü
    1. Önkoşul tendon
    2. 0.5N yük, ölçü tendon uzunluğu (Bu ölçü uzunluğu) uygulayın
    3. Tekrarlı yükleme uygulayın
  23. Tabanından sökünüz
  24. Kelepçeler dan Yayın tendon
  25. Süreç tendon

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Video doku kültürü dört canlı tendonları kadar aynı anda yükleme için yeni bir sistem sunar. Tipik yükleme süreleri 2 ila 48 saat. Yükledikten sonra, tendonların kaldırılır ve gen ekspresyonu için işlenmiş. Sistemi yükleme desen etkisi tendon dejeneratif değişiklikler ile ilişkili genlerde değişiklikler hakkında soruşturma için izin verir. Bu deneyler, tekrarlayan yükleme ile ilişkili yaralanma mekanizmaları içine bazı bilgiler sağlayabilir. Ayrıca doku hasarına neden olabilir yükler içgörü sağlar. Sonuçta, tendon ve bağların aşırı yaralanmaları önlemek ve tedavi etmek için kullanılıyor olabilir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

References

  1. Asundi, K., Kursa, K., Lotz, J. C., Rempel, D. In vitro system for applying cyclic loads to connective tissues under displacement or force control. Ann Biomed Eng. 35, 1188-1195 (2007).
  2. Asundi, K. R., Rempel, D. M. Cyclic loading inhibits expression of MMP-3 but not MMP-1 in an in vitro rabbit flexor tendon model. Clin Biomech. In Press Forthcoming.
  3. Asundi, K. R., Rempel, D. M. MMP-1, IL-1β and COX-2 mRNA Expression is Modulated by Static Load in Rabbit Flexor Tendon. Ann Biomed Eng. In Press Forthcoming.

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Video Stats