EOB-DTPA ve Ga (III) Complex Araştırmalar Onun

Chemistry

Your institution must subscribe to JoVE's Chemistry section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

EOB-DTPA izolasyonu ve sonraki Kompleksleşmeye doğal Ga (III) ve 68 ile Ga burada sunulan yanı sıra etiketleme verimliliği üzerinde tüm bileşiklerin ve soruşturmaların tam bir analizini, in vitro istikrar ve n-oktanol / su için bir prosedür Radyo-etiketli kompleks dağılım katsayısı.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Greiser, J., Niksch, T., Weigand, W., Freesmeyer, M. Investigations on the Ga(III) Complex of EOB-DTPA and Its 68Ga Radiolabeled Analogue. J. Vis. Exp. (114), e54334, doi:10.3791/54334 (2016).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Bu EOB-DTPA (3,6,9-triaza-3,6,9-tris (karboksimetil) -4- (etoksibenzil) -undecanedioic asit) onun Gd (III) kompleks ve protokoller için izolasyonu için bir yöntem ortaya koymaktadır Buluşun yeni radyoaktif olmayan, yani, doğal GA (III) 'ün hem de radyoaktif 68Ga kompleksinin hazırlanması. Karmaşık bir ligand olarak GA (III), nükleer manyetik rezonans (NMR) spektroskopi ve kütle spektrometresi ve element analizi ile karakterize edildi. 68Ga 68 ge / 68Ga jeneratöründen standart yıkama yöntemi ile elde edilmiştir. Deneyler 3.8-4.0 yapıldı pH EOB-DTPA 68 Ga-etiketleme etkinliğini değerlendirmek için. Kurulan analiz teknikleri, radyo TLC (ince tabaka kromatografi) ve radyo HPLC (yüksek performanslı sıvı kromatografisi) izleyici radyokimyasal saflığı belirlemek için kullanılmıştır. 68 Ga Tracers 'Lipofillik oktanol / su distributio ilk soruşturma olarakpH 7.4 çözeltisi içinde mevcut 68Ga türlerinin N katsayısı bir ekstraksiyon yöntemi ile belirlendi. yapıldı fizyolojik pH'da çeşitli medya radyofarmasötiğin in vitro stabilitesi ölçümü, ayrışma farklı oranlarda ortaya çıkarılmıştır.

Introduction

Gadoxetic asit, EOB-DTPA 1 ligandının Gd (III) kompleksi için ortak bir isim nedeniyle, karaciğer hepatosit ve yüksek yüzde ile kendine özgü alımı için hepatobiliyer manyetik rezonans görüntüleme (MRG). 2,3 sık kullanılan kontrast ajandır hepatobiliyer atılımı fokal lezyonları ve hepatik tümörlerin lokalizasyonu sağlar. 2-5 Bununla birlikte, MRI tekniğinin belirli sınırlamaları (örneğin, kontrast maddelerin toksisite, klostrofobi veya metal implantlar olan hastalarda sınırlı uygulanabilirlik) alternatif bir tanı aracı için çağrı .

Pozitron emisyon tomografisi (PET) gövdesinde dağıtım PET tarayıcı tarafından kaydedilen edildiği radyoaktif bir madde (izleyici-tracer) ve az miktarda tatbik edildiği bir moleküler görüntüleme yöntemi vardır. 6 PET, yüksek olanak sağlayan bir dinamik bir yöntemdir gerek kalmadan mekansal ve zamansal görüntülerin çözünürlüğü yanı sıra sonuçların ölçümü,MRI kontrast ajanları yan etkileri ile ilgilidir. Elde edilen metabolik bilgilerin bilgilendirici değeri daha da gibi en sık PET / BT tarayıcıları bilgisayarlı tomografi (BT) ile hibrid görüntüleme ile elde ek görüntüleme yöntemleri alınan anatomik verilerle birlikte artabilir.

PET için uygun bir izleyicinin kimyasal yapısı pozitron yayıcı olarak hizmet veren bir radyoaktif izotop içermelidir. Positrons onlar hemen dokuyu çevreleyen atom kabuklarının elektronlarla imha beri kısa yaşam süreleri vardır. Yok edilmesi ile hareket ters yönde iki 511 keV'lik gama fotonları PET tarayıcı tarafından kaydedilen olan yayılan. 7,8 PET nuclides bir molekül bağlanmış olabilir, bir izleyici oluşturulması için, 2-deoksi-olduğu gibi 2- [18F] floroglukoz (FDG), en yaygın olarak kullanılan PET izleyici. 7 Ancak, nüklid, aynı zamanda, bir ya da daha fazla ligand ile koordinatif bağlar oluşturan (örn[68Ga] -DOTATOC 9,10) ya da () çözündürüldü inorganik tuzlar gibi, örneğin, [18F] sodyum fluorür 11 uygulanabilir. onun biodistribution, metabolizma ve atılım davranışını belirler olarak Toplamda, izleyicinin yapısı çok önemlidir.

Uygun bir PET nüklid uygun pozitron enerji ve kullanılabilirliği yanı sıra istenen soruşturma için yeterli bir yarılanma ömrü gibi olumlu özelliklerini birleştirir gerekir. 68 Ga Nüklidin son yirmi yılda PET alanında önemli bir güç haline gelmiştir. 12,13 Bu durum bir siklotrondan çevresinde bağımsız bünyesinde etiketleme sağlayan bir jeneratör sistemi ile onun durumu, esas olarak. Bir jeneratör, anne 68 Ge yavru nüklid 68Ga, uygun bir kenetleyici ile yıkanır ve daha sonra etiketlenmiş olan bir sütun üzerinde emilir nüklidin. 6,14 68Ga nüklid bir trival olarak var yanagadoxetic asit gibi aynı genel negatif yük ile bir kompleks doğuracak yerine 68 Ga ile EOB-DTPA kenetleme sadece Gd (III) 10,13 gibi ent katyon. Buna göre, bu 68 Ga izleyici PET görüntüleme için uygunluğu benzer bir karakteristik karaciğer özgüllük birleştirmek olabilir. Gadoxetic asit takip eden kapsamda satın alınmış ve disodyum tuzu olarak tatbik edilmektedir, ancak biz Gd [EOB-DTPA] gibi başvurmak GA [EOB-DTPA] ya da 68 Ga [olarak radyoaktif olmayan GA (III) kompleksine kolaylık bakımından radyo-etiketli bileşenin durumunda EOB-DTPA].

PET için izleyiciler, radyoaktif metal kompleksleri ilk önce in vivo ya da ex vivo deneyler, in vitro kapsamlı olarak incelenmesi gerekebilir olarak uygulanabilirliğini değerlendirmek. ilgili bir tıbbi sorun için uygun olup olmadığını belirlemek için, biyolojik dağılım davranış ve boşluk profili, istikrar, organ özgüllük ve hücre veya Tissu'nun gibi çeşitli izleyici özelliklerialımın araştırılması gerekmektedir. Sahip oldukları invazif olmayan karakteri nedeniyle, in vitro saptanması genellikle in vivo deneyler önce gerçekleştirilir. Genel olarak, in vivo olarak uygulandığında DTPA ve türevleri nispeten hızlı bir ayrışma elde kinetik inertlik yoksun nedeniyle bu komplekslerin 68 Ga için kenetleyiciler, sınırlandırılmadıkça uygunluk olduğu kabul edilmektedir. 14-20 Bu öncelikle bir şekilde hareket eden APO transferrin kaynaklanır plazmada 68 Ga için rakip. Yine de, biz tanılama bilgilerini ve böylece mutlaka uzun vadeli izleyici istikrar gerekmeyen, birkaç dakika içinde post-enjeksiyon 3,4,21-23 sağlanabilir burada hepatobiliyer görüntüleme, onun olası uygulama ile ilgili bu yeni izleyici araştırdık. Bu amaçla gadoxetic asitten EOB-DTPA izole edilmiş ve ilk iki sabit izotoplar, 69 GA ve 71 karışımı olarak var olabilir, doğal Ga (III) ile kompleks gerçekleştirilen 68Ga, aşağıdaki kelasyon için radyoaktif olmayan bir standart olarak hizmet elde edilmiştir. Biz yöntemleri kurulan ve aynı anda EOB-DTPA 68 Galabeling verimliliğini belirleyen ve yeni 68 Ga izleyici lipofilitesi ve farklı ortamlarda istikrarını araştırmak için onların uygunluğunu değerlendirildi kullanmıştır.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

EOB-DTPA ve Ga hazırlanması 1. [EOB-DTPA]

Dikkat: Kullanmadan önce kullanılan organik çözücüler, asit ve alkalin piller tüm ilgili malzeme güvenlik bilgi formlarını (MSDS) danışın. Davlumbaz tüm adımları uygulayın ve kişisel koruyucu ekipman (koruyucu gözlük, eldiven, laboratuvar önlüğü) kullanın.

  1. Gadoxetic asitten EOB-DTPA izolasyonu
    1. bir şişe içine, 0.25 M gadoxetic asit enjekte edilebilir çözelti 3 ml koyun. karıştırılan çözeltiye okzalik asit, 500 mg (5.6 mmol) ekleyin.
    2. 1 saat boyunca karıştırıldıktan sonra, indirgenmiş basınç kullanarak bir cam tozu hamuru boyunca süspansiyonu filtre. sırasıyla su, 3 ml ile Tortu, üç kez yıkayın.
    3. Elde edilen sulu filtratlar birleştirin ve bir pH elektrodunun çözelti donatmak. pH değeri yaklaşık -0.1 olana kadar süzüntüye 12 M hidroklorik asit ilave.
    4. Renksiz bir tortu elde etmek için vakum altında çözücüyü çıkarın. atıl gaz altında depolayın.
    5. iyice kalıntı yıkayın (en az üçetil asetat ile kere) oksalik asit fazlalığını ortadan kaldırmak için. Vakumda bir tortu kurutun.
    6. Oda sıcaklığında 2 ml su içinde bir tortu yeniden çözünmesine ve daha sonra bir buz banyosu içinde çözelti soğutulur. Buz banyosu çıkarmadan oluşumu tamamlanana kadar 0.5 M sulu sodyum hidroksit çözeltisi damla damla ilave renksiz görülmektedir bir katı tutkal.
    7. dekantasyon yoluyla su çıkarmak. Soğuk su, 1 ml bir katı iki kez daha yıkanır. Birinci ürün fraksiyonu elde etmek için vakum altında bir katı kurutun.
    8. Sütun kromatografisi (silika, metanol / su 4/1) ile boşaltılmıştır suyun birleşik fraksiyonlardan ikinci bir ürün fraksiyonu izole edin. 24 çözücü vakum altında çıkarın.
    9. Bu şekilde elde edilen beyaz katı madde olarak saf değilse, 1 ml su içinde çözülür ürünü çökeltmek için 10 ml etanol ve sonra 10 ml dietil eter ekleyin. Indirgenmiş basınç vakum altında kuru kullanarak bir sırdan filtre.
    10. birleştirmekKatı EOB-DTPA fraksiyonları ve NMR spektroskopik, 25 kütle spektrometrik 26 ve element 27 analizleri gerçekleştirmek hem.
  2. Ga N- [EOB-DTPA]
    DİKKAT: kuru inert bir atmosfer altında deposu bir katı GA (III) klorür, çünkü hava, nem veya yağ ayrışma ile temas üzerine aşındırıcı duman ve sarı, kahverengi ve siyah yabancı maddelerin oluşumu ile sonuçlanan, yer alır.
    1. 100 ml su Ga (III) klorür 1.94 g (11.0 mmol) eritilmesi ile 0.11 M'lik bir stok çözelti hazırlayın. 4 ml su ile% 25 sulu amonyak çözeltisi 1 ml seyreltilir.
    2. 10 ml su içinde bir kaba EOB-DTPA 80 mg (0.15 mmol) çözündürülür. Gerekirse, tam bir çözünme elde etmek çözücü ısıtılır.
    3. GA (III) klorür stok çözeltisi 1.4 ml (0.15 mmol) ilave edin. Bir karıştırıcı ve pH-elektrodu ile balon donatmak. Çözeltinin pH değeri yaklaşık 4.1 olana kadar seyreltik sulu amonyak çözeltisi damla damla ekleyin. ro karıştırılmaya30 dakika OM sıcaklığı.
    4. Vakum altında çözücüyü çıkarın. ve merkezi bir paralel yan boyun ile stillhead ile donatılmış bir şişe içinde bir tortu, koyun. Bir vakum pompası çıkışına sahip bir soğutma parmağı ve yan boyun merkezi boyun donatın
    5. indirgenmiş basınç altında (125 ° C, 0.6 mbar) altında bir tortu ısıtın. Periyodik olarak, soğutma parmağı ve yine baş (cam yüzeyinin beyaz kaplama olarak görünür) süblime amonyum klorürü çıkarmak, hem de hafif nemli bir bezle şişenin üst kısımlarından. Yeni yüceltmek görünür hiçbir oluşumu kalmayıncaya kadar işleme devam edin.
    6. sırasıyla sıcak metanol, 0.5 ml kalıntı, üç kez yıkama amonyum klorür son izlerini çıkarmak için. Vakum altında renksiz bir tortu kurutun. NMR spektroskopik, 25 kütle spektrometrik 26 ve element 27 analizlerini gerçekleştirmek.

2. Genel Etiketleme Prosedür

DİKKAT: Tüm eskiRadyoaktif maddeler ile doğrudan veya dolaylı temas da dahil olmak üzere deneylerinizi sadece eğitimli personel tarafından yapılmalıdır. Uygun koruyucu ekipman kullanın. ayrı radyoaktif atıkları toplamak ve depolamak ve geçerli yönetmeliklere uygun olarak imha ediniz.

  1. Jeneratörün elüsyon
    Not: dodesil-3,4,5-trihydroxybenzoate silika üzerinde oksit olarak bağlı anne nüklidle 40 mCi 68 Ge / 68 Ga jeneratör kullanıldı. Bu prosedürde olduğu gibi elüsyon ve arıtma bir peristaltik pompa ve dağıtıcı birimi ile kombine bir otomatik işlem olarak, el ile veya olabilir.
    1. 5.5 M, 1.0 M ve 0.05 M hidroklorik asit solüsyonları hazırlayın. ml başına 5.5 M hidroklorik asit 25 ul ihtiva eden 5.0 M sodyum klorür ihtiva eden bir çözelti hazırlayın. 4.1 g sodyum asetat, 1 ml HCI (% 30) ve 2.5 ml buzlu asetik asit, birleştirme ve 50 ml su ile seyreltilmesi suretiyle pH 4,6 tampon çözeltisi hazırlayın.
    2. prec1 1.0 M hidroklorik asit ilave edildi ve daha sonra 5 ml su yavaş yavaş çalkalayarak PS-H + kartuşu ondition.
    3. 4 mi 0.05 M HCI ile jeneratörün silis kolon Zehir. 12 yüklenebilir PS-H + kartuşu üzerine 68Ga eluat.
    4. 5 ml su ile kartuş yıkayın ve daha sonra hava, 5 ml kurutun. 1 ml 5.0 M asitleştirilmiş sodyum klorür çözeltisi ile kartuşun 68 Ga Zehir. 28
  2. 68 Ga ile EOB-DTPA etiketleme
    1. 1 ml su içinde EOB-DTPA 1 mg (1.9 umol) içinde çözülür. Bu çözeltiye 100 ul (0.19 mmol) almak ve 19 um (10 mg / ml) EOB-DTPA stok çözeltisi hazırlamak için su, 9.9 ml ile seyreltin.
    2. 68 Ga içeren çözeltinin (22-29 MBq eşit) 50 ul çıkarın ve bir şişenin içine koyun. EOB-DTPA 19 mM stok solüsyonu 50 ul (0.5 mg) ve 300 ul o ekleF ila 4.0 pH değerini yükseltmek için tampon. Kısaca çalkalanır ve 5 dakika boyunca oda sıcaklığında çözelti inkübe edin. 1-5 ul bir kısım çıkarın ve HPLC veya TLC analizi koydu.
    3. ., Su / trifloroasetik asit (% 99.9 /% 0.1), - B - trifloroasetik / asetonitril asit (% 99.9 /% 0.1), gradyan A: ters faz (RP) C18 kolonu 29 için aşağıdaki hareketli faz radyo HPLC analizi gerçekleştirmek : 06 dakika% 80 A →% 0 A (0.5 mL / dakika), 610 dakika% 0 A (0.5 ml / dk).
    4. eğri altında kalan alan radyo HPLC sinyallerinin tepe noktası yoğunluklarını belirler. aşağıdaki gibi izleyicinin radyokimyasal saflık (RCP) olarak etiketleme verim hesaplayın:
      RCP = A Ga-EOB-DTPA / (A Ga + A Ga-EOB-DTPA)% 100 ∙
      Ga-EOB-DTPA: 68Ga [EOB-DTPA] eğrisi altında kalan alan
      Bir Ga: ücretsiz 68 Ga eğri altında kalan alan

3. Etiketleme Verimlilik

  1. tarif olarak etiketleme prosedürleri uygulayınbölüm 2. Kullanımda d (eluat tazeliği bağlı 40-140 ul) 68 Ga eluat aktivitesini başlangıç ​​tutarlı bir dizi, örneğin, 22-29 MBq.
  2. (68Ga, ayrılmış malzeme hacmine bağlı olarak, 40-190 uL) 3.8-4.0 pH ayarlamak için tampon çözeltisi gerekli miktarını ekleyin. Ligand stok solüsyonu istenen bir miktar (19 mM çözeltisi 10-70 ul) eklenir.
  3. 1.75 ml her etiketleme prob genel ses seviyesini ayarlamak için gerekli su miktarını ekleyin. İyice karıştırın ve numune, oda sıcaklığında 5 dakika bekletin. Etiketleme verimi belirlemek için bölüm 2'de tarif edildiği gibi, HPLC analizi yapın.
  4. 0.1 ug adımlarla ligand miktarlarda mcg 0.1 ila 0.7 ile etiketleme prosedürleri uygulayın. Her bir ligand konsantrasyonu için üçlü olarak deneyler gerçekleştirmek. Ortalama verim ve standart sapma hesaplayın.

4. in vitro stabilitesi

  1. Genel procedure ve preparasyonlar
    1. 10 mM'lik bir fosfat konsantrasyonuna sahip bir PBS stok çözelti hazırlamak için, deiyonize su, 200 ml fosfat tamponlu tuzlu su içinde bir tabletin (PBS) içerisinde çözün.
    2. Bölüm 3. örneklerinin alınması tarif edildiği gibi, bölüm 2'de tarif edildiği gibi, 68Ga, ayrılmış malzeme hacmine bağlı olarak, EOB-DTPA stok çözeltisi 0.5 ul 22-29 MBq 68 Ga etiketlenmesi tampon miktarını ayarlamak kararlılık ölçümleri gerçekleştirmek için izleyicinin 6-12 MBq içeren etiketleme çözümü.
    3. Elüent olarak 0.1 M sulu sodyum sitrat kullanılarak 80 mm silis jel kaplanmış alüminyum plakalar üzerindeki radyo TLC analizi gerçekleştirmek ve bir ince tabaka kromatografisi radyoaktivite tarayıcı ile plakaları analiz. 30 eğrisi altındaki alan olarak TLC sinyallerinin yoğunlukları belirlenir. aşağıdaki gibi izleyicinin RCP hesaplayın:
      RCP = A Ga-EOB-DTPA / (A Ga-ücretsiz + A Ga-EOB-DTPA + A Ga-kolloidal) ∙% 100
      Bir Ga-EOB-DTPA: 68 Ga [EOB-DTPA] eğrisinin altında kalan alan
      Bir Ga-serbest: ücretsiz 68 Ga eğri altında kalan alan
      Kolloidal 68 Ga eğri altında kalan alan: Bir Ga-koloidal
    4. Her zaman noktası için RCP t / RCP 0 hesaplayın. Başlangıç ​​noktası t = 0 dakika beri zaman farkı vs böylece standart RCP çizilir.
      Zaman noktası t 68 Ga [EOB-DTPA] RCP t = RCP.
      T 68 Ga [EOB-DTPA] = 0 dk BİP 0 = RCP.
  2. Fosfat tamponlu tuzlu su içinde stabilitesi (A)
    1. Etiketleme çözeltisi 65 ul için pH'ı 7.4'e yükseltmek için, PBS stok çözeltisi 150 ul ve sodyum hidroksit çözeltisi (0.1 M) 60 ul ekle. İyice karıştırın.
    2. ( 'Başlangıç ​​noktası') TLC analizi gerçekleştirmek için 1-5 ul bir kısım çıkarın. Hemen 37 ° C'de bir kuluçka çözelti depolamak ve temsil TLC analizi gerçekleştirmek için bölüntülerin3 saat boyunca zaman noktaları ative.
  3. PBS apo -transferrin aşan doğru Stabilite (B)
    1. Etiketleme çözeltisi 120 ul için pH'ı 7.4'e yükseltmek için, PBS stok çözeltisi 50 ul ve sodyum hidroksit çözeltisi (0.1 M) içinde 430 ul ekle. Apo -transferrin (25 mg / ml) içindeki bir çözeltisi 40 ul ekle. İyice karıştırın.
    2. ( 'Başlangıç ​​noktası') TLC analizi gerçekleştirmek için 1-5 ul bir kısım çıkarın. Hemen 37 ° C'de bir kuluçka çözelti depolamak ve 3 saat boyunca Örnek zaman noktalarında TLC analizi gerçekleştirmek için bölüntülerin.
  4. İnsan serumundaki stabilitesi (C)
    1. insan serumu 500 ul için pH'ı 7.4'e yükseltmek etiketleme çözeltisi 25 ul ve sodyum hidroksit çözeltisi (0.1 M) içinde 45 ul ekle. İyice karıştırın.
    2. ( 'Başlangıç ​​noktası') TLC analizi gerçekleştirmek için 1-5 ul bir kısım çıkarın. Hemen bir incu çözümü saklamak37 ° C'de batör ve bölüntülerin 3 saat boyunca Örnek zaman noktalarında TLC analizi gerçekleştirmek için.

Dağıtım Katsayısı 5. belirlenmesi LogD

  1. PH'ı 7.4'e yükseltmek için, PBS stok çözeltisi 20 ul ve sodyum hidroksit çözeltisi (0.1 M) içinde 170 ul markalama çözeltisi 50 ul bölüm 2'de tarif edildiği gibi etiketleme işlemleri gerçekleştirir.
  2. bu çözüm 200 ul çekiniz ve bir plastik V-şişenin içine koydu. N oktanol 200 ul ekleyin. 2 dakika süreyle flakon ve vorteks kapatın. Daha sonra 5 dakika boyunca 1600 x g'de santrifüjleyin.
  3. N oktanol'un faz ve her sulu fazdan 40 ul triplicates çıkarın ve ayrı V-şişeleri koyun. katmanları karıştırmak için dikkatli olun.
  4. 30 sn için bir gamma sayacında de her numunenin aktivitesi ölçülür. Her numune hemen iki ölçümü tekrarlayın ve bunların ortalama aktivite Ᾱ t hesaplamak için t listelemek, ilgili birlikte W1,t, W2 ve Ᾱ t, W3 (sulu örneklerde faaliyetlerin) ve Ᾱ t, O1,t, O2,t, O3 (n oktanolde faaliyetler) onların belirlenmesi zaman noktası t.
  5. T 0 olarak son örneğinin ölçüm zamanı noktasını tanımlayın. Belirleyin ve ¨t = tt 0 hesaplayarak dakika içinde ¨t listesi. Aşağıdaki formülü kullanarak, Ᾱ t çürüme düzeltme gerçekleştirin:
    0 = Ᾱ t · 2 (¨t / 68 dk).
  6. Ortalaması olarak W0, hesaplayın Ᾱ 0, W1,0, W2 ve Ᾱ 0, W3 yanı sıra Ᾱ 0, O ortalaması olarak Ᾱ 0, A1,0, O2 ve Ᾱ 0, O3. aşağıdaki formül kullanılarak logD hesaplayın:
    logD = log [(Ᾱ 0, W · 33 mikrogram)].
  7. üçlü olarak tüm deneyi gerçekleştirmek ve standart sapma ile birlikte ortalama logD hesaplayın.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Ligand EOB-DTPA ve radyoaktif olmayan GA (III) 'ün 1 H ve13C {1H} NMR spektroskopisi, kütle spektrometrisi ve elementel analiz ile analiz edildi kompleksi. Şekiller 1-6, Tablo 1 'de listelenmiştir ve gösterilen sonuçlar madde saflığını teyit.

68 Ge / 68 Ga jeneratör elüsyon 400-600 MBq 68 Ga çözümlerini vermiştir. İstenen izleyici 68Ga [EOB-DTPA] oluşumu tarif etiketleme prosedürü sonuçları, 2.8 dakika boyunca (Şekil 7) bir tutma süresine gösteren radyo HPLC tepe noktası olarak gösterilen. 220 nm (2.7 dakika, Şekil 8) UV-vis detektör Ga [EOB-DTPA] standardın tutma süresi ile karşılaştırılması başarılı etiketleme onaylar. Koordinasyonsuzluk 68 Ga 2.1 dk radyo zirve olarak algılanır (Şekil7). EO-BDTPA 68 Ga-etiketleme verimliliği HPLC ile ligand konsantrasyonunun bir fonksiyonu olarak markalama verimi (Şekil 9) saptanmasıyla incelenmiştir. verim üç kopya halinde tayin edildi ve standart sapması hesaplanmıştır.

PH ve çözelti içinde mevcut koordine edilmemiş ya anyonlarının konsantrasyonuna bağlı olarak, 68Ga, çeşitli türleri, örneğin, Gallatlar veya çözünmez hidroksit içinde mevcut olabilir etiketli olmayan. 31 genel terimi, "serbest 68Ga" 32, tüm etiketli olmayan kullanılır genel olarak "koloidal 68 GA" olarak adlandırılır hidroksit dışında çözelti içinde türleri. Tarif edilen analiz koşulları altında, serbest 68Ga bir TLC plakası üzerinde çözücü önünde (Rf = 1.0) ile birlikte hareket eder. Bir TLC plakası üzerinde bu etkinlik olarak görünürken Kolloidal 68Ga, HPLC ile tespit edilemezorijinde (Rf = 0). TLC radyoaktivite tarayıcı ile analiz bir TLC plakası bir kromatogramını. Şekil 10 'de gösterilmiştir izleyici bağlı olarak, farklı tutma davranışı sergiler olup markalama çözeltisinin bir numunesi (pH 3.8-4.0, Rf = 0.3) ya da fizyolojik bir numunesi pH (Rf = 0.5) ile analiz edilmiştir.

PBS- taze fizyolojik pH örnekleri ilave edildi 68Ga [EOB-DTPA] etiketli tracer stabilitesi, seyreltilmiş içeren PBS (fosfat konsantrasyonu 5.5 mM, A), APO-transferrin fazla (1.6 mg / ml araştırmak sırasıyla 0.8 fosfat konsantrasyonlarının mM, B) ve insan serumu (C) ile. Zaman içinde, örneklerin radyofarmasötiğin radyokimyasal saflığı (RCP t), TLC ile tespit edildi. Sağlam izleyici yüzdesi BİP t oranında olarak hesaplanmıştırbaşlangıç ​​noktasında, ilgili zaman noktaları ve RCP 0 (Tablo 2). Bunun nedeni BİP 0 (93-96%), farklı izleyici içeren etiketleme çözümleri için gerekli oldu. Sağlam izleyicinin böylece standart bir yüzdesi, Şekil 11 'de zamanın bir fonksiyonu olarak gösterilmiştir.

seyreltik bir PBS çözeltisi radyofarmasötiğin logD sulu örneklerin belirlenmesi için hazırlanmıştır. Örnekler, n-oktanol ile karıştırılmış santrifüje tabi tutulur ve daha sonra tam bölünen miktarları, her iki fazda aktivitesi konsantrasyonunu belirlemek için uzaklaştırılmıştır. Aktivite değerleri ve logD sonraki hesaplama bunların Tablo 3'te tasvir edilmiştir. Ortalama logD değeri 3.54 ± 0.08.

Şekil 1
Şekil 1. 1 EOB-DTPA 'H-NMR spektrumu. < / strong> spektrum 400.1 MHz'de D 2 O kaydedildi. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

şekil 2
Şekil 2. 13 C {1H} EOB-DTPA-NMR spektrumu. Spektrum 100.6 MHz'de D 2 O kaydedildi. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Şekil 3,
EOB-DTPA Şekil 3. MS (elektrosprey iyonizasyon (ESI), metanol, negatif mod).54334fig3large.jpg "target =" _ blank "> bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Şekil 4,
Ga [EOB-DTPA] Şekil 4. 1 H-NMR spektrumu. Spektrum 400.1 MHz'de D 2 O kaydedildi. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Şekil 5,
Şekil 5. 13 C {1H} Ga [EOB-DTPA] ve -NMR spektrumu. Spektrum 100.6 MHz'de D 2 O kaydedildi. Onu tıklayınız E bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için.

Şekil 6,
Ga [EOB-DTPA] (ESI, metanol, negatif mod) Şekil 6. MS, moleküler tepe izotop desen ayrıntılı tasviri ile birlikte. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Şekil 7,
Ga [EOB-DTPA] bölgelerinde ihtiva eden koordine 68Ga, radyoaktivite dedektörü tarafından kaydedilen. Koordine Olmayan 68Ga 2.1 dakikalık bir tutma zamanı sergiler 68 örneğinin Şekil 7. Örnek HPLC kromatogramıdır, izleyici 2.8 dk tespit edilmediğinde .target = "_ blank"> bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Şekil 8,
Standart madde Ga [EOB-DTPA] Şekil 8. Temsilcisi HPLC kromatogramı, 220 nm UV-vis kanalda saptanan. Soğuk standardın tutma süresi 2.7 dakikadır. Bu daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayınız rakam.

Şekil 9,
EOB-DTPA 68Ga etiketleme verimliliği Şekil 9. tasviri. HPLC ile belirlenen şekilde markalama verimi EOB-DTPA konsantrasyonunun bir fonksiyonu (22-29 MBq başlangıç ​​aktivitesi, pH 3.8-4 olarak çizilmiştir.0, 5 dakika, RT). Standart sapma hata çubukları ile gösterilir. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Şekil 10,
Farklı 68Ga türleri ortaya Şekil 10. Örnek TLC kromatogramı. Seyreltildi PBS içinde 68 Ga [EOB-DTPA] (fosfat konsantrasyonu 5.5 mM, pH = 7.4) içeren bir numune inkübasyonu 110 dakikada analiz edilmiştir. Koloidal 68Ga örnek dağılımı (Rf = 0), 68Ga [EOB-DTPA] (Rf = 0.5) ve 68 Ga TLC radyoaktivite tarayıcı tarafından tespit edildiği üzere, 70 mm'lik bir TLC plakası üzerinde (Rf = 1.0) serbesttir sundu. Sayımlar çürüme düzeltilmiş vardır. Bir büyük görmek için tıklayınızBu rakamın sürümü.

Şekil 11,
Farklı ortamlarda 68 Ga [EOB-DTPA] Şekil 11. Kararlılık tespitler. Çürüme düzeltilmiş, TLC aracılığıyla belirlendiği gibi sağlam izleyici standart yüzdesi, zamanın bir fonksiyonu olarak tasvir edilir. Bu rakamın büyük halini görmek için tıklayınız .

tablo 1
Doruklarına NMR spektroskopik, MS ve EOB-DTPA ve Ga [EOB-DTPA] için yapılan element analizleri. Bağıl MS pik şiddetleri% verilmiştir, atama Tablo 1. Sonuçlar köşeli parantez içinde verilmiştir. Element CHN değerleri Calcu edildiCı 23 için hesaplanan H 33 N3 O 11 · H2O (EOB-DTPA), ve (NH4) 0.75 saat 1.25 [Cı 23 saat 28 GaN 3 O 11] · 2H 2 O (Ga [EOB-DTPA]).

Tablo 2
Farklı ortamlarda 68 Ga [EOB-DTPA] Tablo 2. Stabilite belirlenmesi. Medya A, B ve C 68 Ga [EOB-DTPA] RCP verilen zaman noktalarında TLC ile tespit edilmiştir. Numunelerin kompozisyon izleyici / ücretsiz 68 Ga /% 'si olarak yüzdeleri kolloidal 68 Ga olarak verilir. Sağlam izleyici yüzdesi RCP t / RCP 0 oranı olarak standardize edilmiştir. RCP 0 t = 0 dk izleyici ilgili BİP olduğunu.


. Bir numunenin logD çürümesine Tablo 3. belirlenmesi değerler 0 a üç bölümü (X = 1, 2, 3) her bir fazdan (:, sulu, burada n O ile oktanol'un W) X-düzeltildi. Tüm etkinlikler cpm verilmiştir. protokol bölüm 5'de tarif edilen şekilde LogD hesaplanır. Deney iki kere tekrar edildi.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

EOB-DTPA çok adımlı bir sentez 33 üzerinden erişilebilir, ancak sadece de gadoxetic asit içeren uygun kontrast ajanları izole edilebilir. Bu amaçla, merkezi Gd (III) iyonu oksalik asit fazlası ile çökeltilebilir. Gd (III) oksalat ve oksalik asitin ayrılması Ligant pH 1.5 soğuk su içinde çökeltme ile izole edilebilir. Bununla birlikte, filtre verimi kolon kromatografisine arttırmak için bunun yerine ya da bir izleme prosedürü olarak gerçekleştirilebilir. Her iki yöntem de% 70 toplam verimle analitik olarak saf ligand (Şekil 1-3, Tablo 1) elde edilir.

Ga izole etmek üzere [EOB-DTPA] yan ürün amonyum klorür süblimasyon yoluyla çok hidrofilik kalıntı kaldırılabilir, çünkü sodyum hidroksit kullanılması avantajlı karşılaştırıldığında amonyak çözeltisi ile pH ayarlaması bulundu. Yukarıda belirtilen koşullar altında, bu işlemi yavaş gerçekleşirly. klorür olmayan önemsiz miktarlarda beş gün sonra hala bulgulanabilir olması nedeniyle, diğer bir tuzu, metanol ile yıkandı. Ga [EOB-DTPA] kısmi kaybı, bu çalışma prosedürü sonuçları, ürün% 46 genel verimle bir analitik saflıkta elde edilmiştir (4-6, Tablo 1 deki inceleme). Her ne kadar EOB-DTPA ve Ga hem izolasyonu için (III) kompleksi, ters fazlı kromatografi kullanımı oldukça polar çözücüler kullanıldığında, silika jel ayrışma olasılığı, özellikle de arıtma için alternatif bir yöntem olarak kabul edilmelidir.

EOB-DTPA etiketleme işlemi 1.75 mL numune 68 Ga 2 MBq (nanomolar miktarlarda mevcut olması nedeniyle 68 Ga, rekabet eden metal iyonları önlemek için çözücüler, kimyasal ve metalden-kurtarılmış Ekipman, son derece saf bir kullanımını gerektiren ) 0,14 nM nüklid konsantrasyonuna eşittir. 68 Ga EOB-DTPA etiketleme beş dakika içinde pH 3.8-4.0 oluşurOda sıcaklığında utes. Reaksiyon koşulları pH'ı, sıcaklık ve reaksiyon süresi tutarak yanı sıra 68 Ga sabitinin veya haklı bir aralıkta aktivite başlarken 68 Ga-etiketleme verimliliği üzerinde araştırmalar etiketleme verim belirlenmesini gerektirmektedir. Her bir veri noktası için (yani, ligand konsantrasyonu) deneyi ligandı ve 68 Ga hem konsantrasyonları, uygun bir güven seviyesi sağlamak için çok düşük en az üç kez olan yapılmalı ve en ufak bir sapma etiketleme verimi dolayısıyla hassas reaksiyon koşulları. Örneğin, 68Ga elüat yaş olarak, hacminin arttırılması alikotları böylece tampon artan miktarlarda gerektiren sabit bir başlangıç ​​etkinlik temin etmek üzere geri gerekir. Bundan başka, negatif durumda, kendi başına 68 Ga için bir rakip olarak hareket olabilir bozunum ürünü 68 Zn, artan konsantrasyonlarda labelin etkileyen elüat sonuçlar yaşlanması22-29 MBq 68Ga g etkinliği. 13,34,35 pratikte nicel etiketleme bilgilerini 68 içeriği Ga ≤% 2 ila yaklaşık 5 ile EOB-DTPA miktarlarda ≥ 0.7 ug (Şekil 9) yukarıda sözü edilen koşullar altında elde edilir örneklerde kolloidal 68Ga mevcut%.

HPLC ücretsiz 68 Ga ve 68 Ga [EOB-DTPA] üstün bazal ayrılmasını sağladı iken, kolloid 68 Ga algılamak için uygun değildir. Bu nedenle transferin ya da protein-bağlı ölçümü 68 Ga gerekli olup stabilite ölçümleri sırasında RCP belirlemek için TLC seçti. Biz bu amaçla (Şekil 10) için kabul edilebilir temel ayrımı bulundu; Bununla birlikte, boy dışlama kromatografisi veya süzme yöntemleri 15,36 kullanılması HPLC analizi ile takip kolloidal parçacıklar, alternatif olarak kabul edilebilir kaldırın. 68Ga kompleksi daha güçlü bir ret sergileyenTLC tabakalarına ention fizyolojik pH (Rf = 0.5) örnekleri yerine Örnek markalama çözeltisinden doğrudan geri çekildiğinde (Rf = 0.3). Biz bu gözlem kompleksinin farklı protonasyon devletler ile açıklanabilir olabileceğini düşündürmektedir.

68Ga izleyicilerin vitro stabilitesi tayinleri, genellikle, hem de kanda 68 Ga için ana rakip veya içinde olan, APO transferin 37 ihtiva eden çözeltiler içinde PBS 15,17 ya da fizyolojik pH 37 taklit eden alternatif bir tampon sistemlerinde gerçekleştirilen in insan serum 15,17. Deneylerimizde PBS 0.1 M sodyum hidroksit çözeltisinin eklenmesiyle 7.4 numune pH değerini ayarlamak için gerekli oldu. Fosfat konsantrasyonu bozulması oranını etkilediğini Biz fosfat konsantrasyonu (0.8 mM ve 5.5 mM (A)) vermiştir olmayan reprodu değişen çözümlerinde istikrar deneyleri beri, iddia olamazdıkarışmayan sonuçlanır. Bununla birlikte, bir çözelti B, ihtiva apo -transferrin 0.8 mM fosfat (normal plazma içeriğine 38 aralığında 1.6 mg / ml) (insan kanı, genellikle 0.8-1.5 olan bir fosfat seviyesi mM 39,40 arzettiği bulunmuştur ), insan serumu (C) bu gözlemlenebilir karşılaştırılabilir bir oranda ayrışma neden olur. Ücretsiz 68 Ga içeriği çözümü A% 11 oranında artmıştır ise çözümlerinde AC, 185 dk koloidal 68 içeriği sonra Ga, yaklaşık% 24 oranında çözüm C çözüm B% 17 ve% 27 (Tablo 2 artmıştı ). Kolloidal karşı veya B proteine ​​bağlı 68 Ga ve C nedeniyle transferin doygunluğu ya da kıyaslanabilir yavaş transferin bağlayıcı oranları olabileceği gibi 68 Ga izleyici ayrışmasıyla oluşan gerçeği ücretsiz 68 Ga ağırlıklı olarak mevcuttur. 68 Ga [EOB-DTPA] içinde (Şekil 11) benzer DTPA türetilmiş şelatlar sahip izleyiciler ile karşılaştırılabilir. 15,16,18 Genellikle karaciğer erken arteriyel ve venöz perfüzyon aşamasında bilgilerdir uygulanmasından sonraki ilk 3 dakika 4,21 içinde MR taramaları yaparak kazanılan Gd [EOB-DTPA], hepatosit varlığı 20 dakika 3,4,23 kadar birkaç saat enjeksiyondan sonra 21,22 gecikmiş fazda tespit edilirken. Insan serumunda 20 dakika sonra 68 Ga [EOB-DTPA]% 93 değişmeden kalır. Beklenildiği, o zaman sinyal-gürültü oranı nedeniyle plazma ve doku ifade transferin reseptörleri mevcut yanı sıra 68 Ga galat ücretsiz 68 Ga-transferrin, artan miktarlarda bozulan olurdu. 41,42

Katsayıları günlük bir izleyicileri doku dağılımını oktanol / su bölümü tahmin etmek içinP veya dağılım katsayıları iki aşamada aktivitesi konsantrasyonlarının oranı olarak belirlenebilir logD. Tanım olarak, logD parametresi nedeniyle farklı protonasyon izleyici devletlerin yanı sıra sulu fazda kendi ayrışma olasılığı bizim deneyler için uygun kılan bir ortam, mevcut çoklu türler arasında ayrım yapmaz. Ekstre logD belirlemek için sulu ortam, genellikle 0.8 mM ve fizyolojik pH bir fosfat konsantrasyonu gösteren kan koşulları. Biz PBS seyreltildi kullanılan yukarıda belirtilen nedenlerden dolayı 17,43-45 taklit etmek için PBS ile tamponlanır. N oktanol'un ve santrifüj ile ayırmayı takiben, aynı fazdan birkaç seferde ayrılması pipetleme kaynaklanan hatalardan sağlar azaltılabilir. Nedeniyle n oktanol çok düşük aktivite konsantrasyonları tek sulu faz ile çapraz bulaşmayı önlemek için dikkatli olmalı ve ayrı bir şişenin içine nicel transferini sağlamak. DistribBu prosedür ile saptanmaktadır Katkı katsayıları yeniden üretilebilir ve onlar lipofilisitesinin bir kaba tahmini için izin verirken, Gd bir logP [EOB-DTPA] ile doğrudan bir karşılaştırma mümkün değildir. Nedeniyle Gd [EOB-DTPA] Lipofillik gelen ziyade yaşayan kişilerde veya hücrelerin kendi hepatobiliyer alımı ek deneyler 68 Ga [EOB in vivo daha geniş biodistribution üzerinde bilgilerin yanı sıra istikrarı sağlamak için gerekli olacaktır değil öncelikle ortaya çıkan özgüllük için DTPa]. Toplamda, görüntüleme perfüzyon için ajan ve erken hepatobilier faz olarak bir uygulama hayal olduğunu.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
primovist Bayer - 0.25 M
gallium(III) chloride Sigma-Aldrich Co. 450898
water (deionized) - - tap water deionizing equipment by Auma-Tec GmbH
hydrochloric acid 12 M VWR 20252.29
sodium hydroxide Polskie Odczynniki Chemiczne S.A. 810925429
oxalic acid Sigma-Aldrich Co. 75688
ethyl acetate Brenntag GmbH 10010447
silica gel Merck KGaA 1.10832.9025 Geduran Si 60 0.063-0.2 mm
TLC silica gel 60 F254 Merck KGaA 1.16834.0001
methanol VWR 20903.55
ethanol Brenntag GmbH 10018366
eiethylether VWR 23807.468 stored over KOH plates
ammonia solution (25%) VWR 1133.1
pH electrode VWR 662-1657
stirring and heating unit Heidolph 505-20000-00
pump Ilmvac GmbH 322002
frit - custom design
NMR spectrometer Bruker Coorporation - Ultra Shield 400
mass spectrometer Thermo Fisher Scientific Inc. -
elemental analyser Hekatech GmbH Analysentechnik - EuroVector EA 3000 CHNS
deuterated water D2O euriso-top D214 99.90% D
Material/Equipment required for labeling procedures
68Ge/68Ga generator ITG Isotope Technologies Garching GmbH A150
pump and dispenser system Scintomics GmbH - Variosystem
hydrochloric acid 30% (suprapur) Merck KGaA 1.00318.1000
water (ultrapur) Merck KGaA 1.01262.1000
sodium chloride (suprapur) Merck KGaA 1.06406.0500
sodium acetate (suprapur) Merck KGaA 1.06264.0050
glacial acetic acid (suprapur) Merck KGaA 1.00066.0250
sodium citrate dihydrate VEB Laborchemie Apolda 10782 >98.5%
PS-H+ Cartridge (S) Macherey-Nagel 731867 Chromafix
apo-Transferrin Sigma-Aldrich Co. T2036
PBS buffer (tablets) Sigma-Aldrich Co. 79382
human serum Sigma-Aldrich Co. H4522 from human male AB plasma
flasks, columns, etc. custom design
pH electrode Knick Elektronische Messgeräte GmbH & Co. KG 765-Set
binary pump (HPLC) Hewlett-Packard G1312A (HP 1100)
UV Vis detector (HPLC) Hewlett-Packard G1315A (HP 1100)
radioactive detector (HPLC) EGRC Berthold
HPLC C-18-PFP column Advanced Chromatography Technologies Ltd. ACE-1110-1503/A100528
HPLC glass vials GTG Glastechnik Graefenroda GmbH 8004-HP-H/i3µ
pipette Eppendorf -
plastic vials Sarstedt AG & Co. 6542.007
plastic vials Greiner Bio-One International GmbH 717201
activimeter MED Nuklear-Medizintechnik Dresden GmbH - Isomed 2010
tweezers custom design
incubator Heraeus Instruments GmbH 51008815
vortex mixer Fisons - Whirlimixer
centrifuge Heraeus Instruments GmbH 75003360
gamma well counter MED Nuklear-Medizintechnik Dresden GmbH - Isomed 2100
water for chromatography Merck KGaA 1.15333.2500
acetonitrile for chromatography Merck KGaA 1.00030.2500
trifluoroacetic acid Sigma-Aldrich 91707
TLC radioactivity scanner raytest Isotopenmessgeräte GmbH B00003875 equipped with beta plastic detector

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Weinmann, H. J., et al. A new lipophilic gadolinium chelate as a tissue-specific contrast medium for MRI. Magn. Reson. Med. 22, 233-237 (1991).
  2. Stroszczynski, C., et al. Aktueller Stand der MRT-Diagnostik mit leberspezifischen Kontrastmitteln. Radiologe. 44, 1185 (2004).
  3. Van Beers, B. E., Pastor, C. M., Hussain, H. K. Primovist, Eovist - what to expect. J. Hepatol. 57, 421-429 (2012).
  4. Zech, C. J., Herrmann, K. A., Reiser, M. F., Schoenberg, S. O. MR Imaging in Patients with Suspected Liver Metastases: Value of Liver-specific Contrast Agent Gd-EOB-DTPA. Magn. Reson. Med. Sci. 6, 43-52 (2007).
  5. Leonhardt, M., et al. Hepatic Uptake of the Magnetic Resonance Imaging Contrast Agent Gd-EOB-DTPA: Role of Human Organic Anion Transporters. Drug Metab. Dispos. 38, 1024-1028 (2010).
  6. Wadas, T. J., Wong, E. H., Weisman, G. R., Anderson, C. Coordinating Radiometals of Copper, Gallium, Indium, Yttrium, and Zirconium for PET and SPECT Imaging of Disease. J. Chem. Rev. 110, 2858-2902 (2010).
  7. Ametamey, S. M., Honer, M., Schubiger, P. A. Molecular Imaging with PET. Chem. Rev. 108, 1501-1516 (2008).
  8. Cutler, C. S., Hennkens, H. M., Sisay, N., Huclier-Markai, S., Jurisson, S. S. Radiometals for Combined Imaging and Therapy. Chem. Rev. 113, 858-883 (2013).
  9. Henze, M., et al. PET Imaging of Somatostatin Receptors Using [68GA]DOTA-D-Phe1-Tyr3-Octreotide: First Results in Patients with Meningiomas. J. Nucl. Med. 42, 1053-1056 (2001).
  10. Hofmann, M., et al. Biokinetics and imaging with the somatostatin receptor PET radioligand 68Ga-DOTATOC: preliminary data. Eur. J. Nucl. Med. 28, 1751-1757 (2001).
  11. Blau, M., Nagler, W., Bender, M. A. Fluorine-18: a new isotope for bone scanning. J. Nucl. Med. 3, 332-334 (1962).
  12. Green, M. A., Welch, M. J. Gallium Radiopharmaceutical Chemistry. Int. J. Radiat. Appl. Instrum. B. 16, 435-448 (1989).
  13. Rösch, F. Past, present and future of 68Ge/68Ga generators. Appl. Radiat. Isot. 76, 24-30 (2013).
  14. Liu, S. The role of coordination chemistry in the development of target-specific radiopharmaceuticals. Chem. Soc. Rev. 33, 445-461 (2004).
  15. Haubner, R., et al. Development of (68)Ga-labelled DTPA galactosyl human serum albumin for liver function imaging. Eur. J. Nucl. Med. Mol. Imaging. 40, (68), 1245-1255 (2013).
  16. Yang, W., Zhang, X., Liu, Y. Asialoglycoprotein Receptor-Targeted Radiopharmaceuticals for Measurement of Liver Function. Curr. Med. Chem. 21, 4-23 (2014).
  17. Chauhan, K., et al. 68Ga based probe for Alzheimer's disease: synthesis and preclinical evaluation of homodimeric chalcone in β-amyloid imaging. Org. Biomol. Chem. 12, 7328-7337 (2014).
  18. Chakravarty, R., Chakraborty, S., Dash, A., Pillai, M. R. A. Detailed evaluation on the effect of metal ion impurities on complexation of generator eluted 68Ga with different bifunctional chelators. Nucl. Med. Biol. 40, 197-205 (2013).
  19. Clevette, D. J., Orvig, C. Comparison of ligands of differing denticity and basicity for the in vivo chelation of aluminum and gallium. Polyhedron. 9, 151-161 (1990).
  20. Prinsen, K., et al. Development and evaluation of a 68Ga labeled pamoic acid derivative for in vivo visualization of necrosis using positron emission tomography. Bioorg. Med. Chem. 18, 5274-5281 (2010).
  21. Vogl, T. J., et al. Liver tumors: comparison of MR imaging with Gd-EOB-DTPA and Gd-DTPA. Radiology. 200, 59-67 (1996).
  22. Reimer, P., et al. Phase II clinical evaluation of Gd-EOB-DTPA: dose, safety aspects, and pulse sequence. Radiology. 177-183 (1996).
  23. Ba-Ssalamah, A., et al. MRT der Leber. Radiologe. 44, 1170-1184 (2004).
  24. Scott, R. P. W. Journal of Chromatography Library. 22A, Elsevier Scientific Publishing Co. A137-A160 (1983).
  25. Reichenbaecher, M., Popp, J. Strukturanalytik organischer und anorganischer Verbindungen. 1st, B. G. Teubner Verlag. Wiesbaden. (2007).
  26. Gross, J. H. Mass Spectrometry: A Textbook. Springer. (2004).
  27. Ma, T. S., Rittner, R. C. Modern Organic Elemental Analysis. Marcel Dekker, Inc. (1979).
  28. Mueller, D., et al. Simplified NaCl Based 68Ga Concentration and Labeling Procedure for Rapid Synthesis of 68Ga Radiopharmaceuticals in High Radiochemical Purity. Bioconjugate Chem. 23, 1712-1717 (2012).
  29. Roberts, T. R. Radio-column chromatography. Journal of Chromatography Library. 14, 103-132 (1978).
  30. Roberts, T. R. Radio-thin-layer chromatography. Journal of Chromatography Library. 14, 45-83 (1978).
  31. Green, M. A., Welch, M. J. Gallium radiopharmaceutical chemistry. Nucl. Med. Biol. 16, 435-448 (1989).
  32. Notni, J., Plutnar, J., Wester, H. J. Bone-seeking TRAP conjugates: surprising observations and their implications on the development of gallium-68-labeled bisphosphonates. EJNMMI Res. 2, 13 (2012).
  33. Schmitt-Willich, H., et al. Synthesis and Physicochemical Characterization of a New Gadolinium Chelate: The Liver-Specific Magnetic Resonance Imaging Contrast Agent Gd-EOB-DTPA. Inorg. Chem. 38, 1134-1144 (1999).
  34. 68Ga generator for positron emission tomography. Zhernosekov, K., Nikula, T. DE102010037964B3 (2012).
  35. Simecek, J., Hermann, P., Wester, H. J., Notni, J. How is 68Ga Labeling of Macrocyclic Chelators Influenced by Metal Ion Contaminants in 68Ge/68Ga Generator Eluates? ChemMedChem. 8, 95-103 (2013).
  36. Baur, B., et al. Synthesis, Radiolabelling and In Vitro Characterization of the Gallium-68-, Yttrium-90- and Lutetium-177-Labelled PSMA Ligand, CHX-A''-DTPA-DUPA-Pep. Pharmaceuticals (Basel). 7, 517-529 (2014).
  37. Boros, E., et al. RGD conjugates of the H2dedpa scaffold: synthesis, labeling and imaging with 68Ga. Nucl. Med. Biol. 39, 785-794 (2012).
  38. Beck, W. S. Hematology. 5th, MIT press. Cambridge, Massachusetts. (1998).
  39. Patel, V., Morrissey, J. Practical and Professional Clinical Skills. 1, Oxford University Press Inc. New York. (2001).
  40. Bartke, A., Constanti, A. Basic Endocrinology. 1, CRC Press. (1998).
  41. Bernstein, L. R. Mechanisms of Therapeutic Activity for Gallium. Pharmacol. Rev. 50, 665-682 (1998).
  42. Clausen, J., Edeling, C. J., Fogh, J. 67Ga Binding to Human Serum Proteins and Tumor Components. Cancer Res. 34, 1931-1937 (1974).
  43. Dumont, R. A., et al. Novel 64Cu- and 68Ga-Labeled RGD conjugates show improved PET imaging of αvβ3 integrin expression and facile radiosynthesis [Erratum to document cited in CA156:116856. J. Nucl. Med. 52, 1498 (2011).
  44. Pohle, K., et al. 68Ga-NODAGA-RGD is a suitable substitute for 18F-Galacto-RGD and can be produced with high specific activity in a cGMP/GRP compliant automated process. Nucl. Med. Biol. 39, 777-784 (2012).
  45. Notni, J., Pohle, K., Wester, H. J. Be spoilt for choice with radiolabelled RGD peptides: Preclinical evaluation of 68 Ga-TRAP(RGD)3. Nucl. Med. Biol. 40, 33-41 (2013).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics